贝莱斯芽孢杆菌OUC-BV1及其在制备水产病原菌抑制剂中的应用

本发明涉及一种贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1及其在制备水产病原菌抑制剂中的应用，属于微生物。

背景技术：

1、水产养殖业是世界上重要的产业之一。在水产养殖过程中经常会发生水产养殖病害，造成巨大损失。引发水产养殖病害的主要原因有细菌、真菌、寄生虫等，其中，水产病原菌因其种类繁多，繁殖速度快，传播范围广，成为危害水产养殖业的主要原因。

2、目前，由于抗生素的抑菌谱广且治疗效果明显，抗生素被广泛使用甚至滥用，产生了多种抗生素耐药性菌株，危害动物及人类健康，成为21世纪全球最紧迫的公共健康问题之一，急需更加安全、绿色的物质来替代抗生素。天然抗生素的来源主要有微生物、动物和植物，由于微生物源的抗生素更加安全和高效，因此微生物成为替代抗生素的理想材料。

3、贝莱斯芽孢杆菌是一种革兰氏阳性细菌，它种分类地位的确定较晚，最早在1999年被分离到，直到2005年被首次报道和命名。近年来，对贝莱斯芽孢杆菌的研究越来越多，贝莱斯芽孢杆菌可以处理和预防偶氮染料废水污染，增加风味物质的种类，具有广谱抑菌活性和促生长作用等优点，在食品、医疗、农业、工业环境等领域具有广泛应用。现有技术中有关于贝莱斯芽孢杆菌抑制水产病原菌的报道，比如：cn 108676756 a公开了一种贝莱斯芽孢杆菌，保藏编号为gdmcc no.60344，该菌具有广谱拮抗水产常见病原菌功能，能有效抑制无乳链球菌、海豚链球菌、鰤鱼诺卡氏菌、嗜水气单胞菌、舒氏气单胞菌和迟缓爱德华氏菌等病原菌的生长。cn 110438044 a公开了一种贝莱斯芽孢杆菌yfi-4，保藏编号为cctccno：m2019653，对水产病原菌：维氏气单胞菌、嗜水气气单胞菌、荧光假单胞菌、鲁氏耶尔森菌、脑膜败血伊丽莎白菌、恶臭假单胞菌具有良好的抑制作用。但这些菌均不能同时对大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌有抑制活性(尤其是哈维氏弧菌)，且在特定使用环境(比如高温)下有局限性。

技术实现思路

1、针对上述现有技术，本发明提供了一种贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1。本发明还提供了其在制备水产病原菌抑制剂中的应用。本发明还提供了一种水产病原菌抑制剂。

2、本发明是通过以下技术方案实现的：

3、一种贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(bacillusvelezensis)，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.26580，保藏日期：2023年02月20日。

4、所述贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1的生物学特征为：革兰氏阳性菌，菌体短杆状，单个排列，不运动；菌落3～4mm，圆形，凸起，乳白色，较粘稠，边缘整齐，表面凸起有褶皱。

5、所述贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1在制备水产病原菌抑制剂中的应用。

6、进一步地，所述水产病原菌选自大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌中的任意一种或两种以上。更进一步地，所述水产病原菌为大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌。

7、进一步地，具体应用时，培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1得发酵液，离心得发酵上清液，该发酵上清液即可作为水产病原菌抑制剂进行应用，可进行适当浓缩或稀释，可添加常见的辅料、载体等制成各种常见剂型，比如水剂、片剂。

8、更进一步地，所述培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1所采用的培养基的组分组成为：碳源1～30g/l，氮源5～30g/l，nacl 1～10g/l，谷氨酸钠1～7g/l，培养基初始ph为4～9；所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、甘油、可溶性淀粉、玉米粉、马铃薯淀粉中的任意一种或两种以上；所述氮源选自蛋白胨、牛肉膏、玉米浆粉、工业用酵母粉中的任意一种或两种以上。优选的，培养基的组分组成为：玉米粉5g/l，工业酵母粉15g/l，nacl 7g/l，谷氨酸钠5g/l，培养基初始ph为7。

9、更进一步地，所述培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1的培养条件为：接种量1％～6％，培养温度20～42℃，发酵时间12～72h。优选的，培养条件为：接种量2％，培养温度30℃，发酵时间48h。

10、更进一步地，所述离心的条件为：在4℃、11000rpm条件下离心20min。

11、一种水产病原菌抑制剂，是通过以下方法制备得到的：培养上述贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1得发酵液，离心得发酵上清液，即为水产病原菌抑制剂；所述水产病原菌选自大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌中的任意一种或两种以上。所述培养条件同上。该水产病原菌抑制剂中含有脂肽类物质c14iturina，c15iturina，c16mycosubtilin和bacilysin，对大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌均具有抑菌活性，且温度稳定性高，能耐高温，试验表明，在20℃下76h内可保持95％以上的抑菌活性，在40℃下96h内可保持65％的抑菌活性，在60℃下6h内可保持85％以上的抑菌活性，在80℃下6h内可保持50％的抑菌活性，即使在100℃的高温下1h时仍可保留70％的抑菌活性。

12、所述水产病原菌抑制剂在抑制水产病原菌中的应用。

13、本发明的贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，是从海洋中分离获得的，具有较强抑菌活性，具有普遍抑菌活性，对大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌(这4种病原菌是常见的病原菌，它们的存在常常给水产养殖带来麻烦)均具有抑菌活性，且能耐高温，在100℃条件下仍有较高的抑菌活性，可以在特定环境下应用。本发明的贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，与现有技术中的用于抑制水产病原菌的贝莱斯芽孢杆菌相比，抑菌谱更广，比如：贝莱斯芽孢杆菌dh82仅能抑制哈维氏弧菌和嗜水气单胞菌，贝莱斯芽孢杆菌wlys39仅能抑制嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌，贝莱斯芽孢杆菌rs6-14仅能抑制大肠杆菌。

14、贝莱斯芽孢杆菌通过合成具有抑菌活性的次级代谢产物来抑制病原菌的生长，次级代谢产物主要包括细菌素、抑菌蛋白、脂肽类和聚酮类物质。它们发挥作用的方式主要有破坏细胞壁、控制关键的dna和rna以及抑制酶活性。其中抗菌脂肽发挥了重要作用，贝莱斯芽孢杆菌产生的脂肽类物质包括表面活性素、伊枯草菌素、丰原素、杆菌霉素等。

15、本发明的贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，抑菌谱广，抑菌效果显著，有望开发成天然抗生素产品，在水产养殖及饲料替抗领域有潜在的应用价值和巨大的市场需求。

16、本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。

技术特征：

1.一种贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，其特征在于：分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(bacillusvelezensis)，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.26580，保藏日期：2023年02月20日。

2.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1在制备水产病原菌抑制剂中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述水产病原菌选自大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌中的任意一种或两种以上。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述水产病原菌为大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：具体应用时，培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1得发酵液，离心得发酵上清液。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1所采用的培养基的组分组成为：碳源1～30g/l，氮源5～30g/l，nacl1～10g/l，谷氨酸钠1～7g/l，培养基初始ph为4～9；

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述培养基的组分组成为：玉米粉5g/l，工业酵母粉15g/l，nacl7g/l，谷氨酸钠5g/l，培养基初始ph为7；

8.一种水产病原菌抑制剂，其特征在于，是通过以下方法制备得到的：培养权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1，得发酵液，离心得发酵上清液，即为水产病原菌抑制剂。

9.根据权利要求8所述的水产病原菌抑制剂，其特征在于：所述水产病原菌选自大肠杆菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和哈维氏弧菌中的任意一种或两种以上。

10.根据权利要求8所述的水产病原菌抑制剂，其特征在于：所述培养贝莱斯芽孢杆菌ouc-bv1所采用的培养基的组分组成为：碳源1～30g/l，氮源5～30g/l，nacl1～10g/l，谷氨酸钠1～7g/l，培养基初始ph为4～9；

技术总结
本发明公开了一种贝莱斯芽孢杆菌OUC‑BV1及其在制备水产病原菌抑制剂中的应用，属于微生物技术领域。所述贝莱斯芽孢杆菌OUC‑BV1，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.26580，保藏日期：2023年02月20日。所述贝莱斯芽孢杆菌OUC‑BV1在制备水产病原菌抑制剂中的应用。本发明还公开了一种水产病原菌抑制剂。本发明的贝莱斯芽孢杆菌OUC‑BV1具有较强抑菌活性，具有普遍抑菌活性，且能耐高温，有望开发成天然抗生素产品，在水产养殖及饲料替抗领域有潜在的应用价值和巨大的市场需求。

技术研发人员：姜宏,董格菲,毛相朝,司先懂,陈鹏,王鲁保,任泽林
受保护的技术使用者：中国海洋大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13