一种修复型中性粒细胞的分类、诱导活化方法及其用途

本发明涉及免疫学和再生医学领域，具体地涉及一种修复型中性粒细胞的分类、诱导活化方法及其用途。

背景技术：

1、随着对免疫系统研究的深入，近几年通过免疫细胞调控组织再生修复已成为研究热点。有研究表明免疫反应是调控组织再生的重要因素。其中免疫细胞促进修复的作用被逐渐认识到。然而，目前对修复型免疫细胞的认识主要集中在巨噬细胞。而中性粒细胞被普遍认为是组织损伤发生时清除坏死组织，引发炎症反应的免疫细胞，对其促修复功能的研究较少，导致如何更好地利用免疫细胞的调控作用促进组织修复还不够清楚。修复型中性粒细胞对临床修复受损组织可能存在重要影响。

2、中国专利申请cn114891728a公开了一种聚电解质膜、巨噬细胞外泌体及其在促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的应用，其通过将m0巨噬细胞接种于涂覆聚电解质膜的培养器皿中，并收集含有巨噬细胞外泌体的培养液上清液；从培养液上清液中提取巨噬细胞外泌体，利用巨噬细胞外泌体可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。不过，该方法利用巨噬细胞外泌体可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化未经过动物实验验证，临床效果的稳定性难以保证。

3、中国专利申请cn111529757a公开了一种人羊膜间充质干细胞(hamscs)用于制备骨再生产品的用途，其利用人羊膜间充质干细胞的免疫调节作用优化骨缺损微环境，促血管化骨再生的m2巨噬细胞聚集，分泌促血管新生和成骨活性因子，刺激内源性骨再生。该申请所使用的人羊膜间充质干细胞来源是无传染性疾病剖宫产新鲜胎盘组织，其来源少，且涉及到剖宫产患者的知情同意及伦理要求，因此其临床推广和应用受到限制。

4、背景技术中的信息仅仅在于说明本发明的总体背景，不应视为承认或以任何形式暗示这些信息构成本领域一般技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

1、为解决现有技术中的至少部分技术问题，本发明提供一种修复型中性粒细胞的分类、诱导活化方法及其用途。具体地，本发明包括以下内容。

2、本发明的第一方面，提供一种分离的修复型中性粒细胞，其中，所述分离的修复型中性粒细胞为cd45+ly6g+cd54+cd274+glut1+细胞亚群。

3、在某些实施方案中，根据本发明所述的分离的修复型中性粒细胞，其中，所述修复型是指当使用物理电刺激所述细胞亚群时能够诱导该细胞亚群的促血管化功能。

4、在某些实施方案中，根据本发明所述的分离的修复型中性粒细胞，其中，所述物理电刺激包括压电材料、铁电材料，或者直流电、交流电、电磁场等提供的电刺激信号。

5、本发明的第二方面，提供一种修复型中性粒细胞的制备方法，其中，所述方法包括诱导中性粒细胞表达cd54、cd274和glut1的步骤，或者通过基因工程手段使中性粒细胞过表达cd54、cd274和glut1的步骤，或者分离修复型中性粒细胞的步骤。

6、本发明的第三方面，提供一种中性粒细胞的分类方法，其中，所述方法包括检测中性粒细胞表面或内部标志蛋白或其mrna的步骤，其中，所述标志蛋白包括cd54、cd274和glut1；可选地，进一步包括鉴定中性粒细胞的步骤，优选地，通过cd45、ly6g来鉴定所述中性粒细胞。

7、在某些实施方案中，根据本发明所述的中性粒细胞的分类方法，其中，进一步包括将cd45+ly6g+cd54+cd274+glut1+细胞分类为修复型中性粒细胞。

8、在某些实施方案中，根据本发明所述的中性粒细胞的分类方法，其中，进一步包括将cd45+ly6g+cd54-cd274-glut1-细胞分类为非修复型中性粒细胞。

9、本发明的第四方面，提供一种用于活化修复型中性粒细胞的方法，其中，包括使用物理电刺激第一方面所述的修复型中性粒细胞的步骤。

10、在某些实施方案中，根据本发明所述的用于活化修复型中性粒细胞的方法，其中，所述活化是指表达或增强表达vegf、cxcl16、mmp9、proliferin和osteopontin中的至少一种。

11、本发明的技术效果包括但不限于：

12、(1) 本发明的具有修复功能的中性粒细胞亚群是首次被发现的能被电刺激诱导后发挥促修复功能的免疫细胞亚群，其在电学微环境的诱导下能够被激活细胞内的钙信号通路，进而发挥例如促进组织修复的功能。

13、(2) 本发明的具有修复功能的中性粒细胞亚群在动物体内具有良好的促进血管化、促进成骨的作用，可用于组织修复治疗，很好的解决了目前临床上骨缺损修复效果不佳的问题。

14、(3) 本发明的制备工艺简单，操作简便，可以实现批量生产及临床上的推广应用。

技术特征：

1.一种分离的修复型中性粒细胞，其特征在于，其为cd45+ly6g+cd54+cd274+glut1+细胞亚群。

2.根据权利要求1所述的分离的修复型中性粒细胞亚群，其特征在于，所述修复型是指当使用物理电刺激所述细胞亚群时或刺激所述细胞亚群后能够引发细胞内的钙离子流。

3.根据权利要求2所述的分离的修复型中性粒细胞亚群，其特征在于，由所述细胞内的钙离子流进一步引发组织修复。

4.一种修复型中性粒细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括诱导中性粒细胞表达cd54、cd274和glut1的步骤，或者通过基因工程手段使中性粒细胞过表达cd54、cd274和glut1的步骤，或者从细胞群中鉴定并分离所述修复型中性粒细胞的步骤。

5.一种中性粒细胞的分类方法，其特征在于，包括检测中性粒细胞表面或内部标志蛋白或其mrna的步骤，其中，所述标志蛋白包括cd54、cd274和glut1中的至少之一；进一步包括鉴定中性粒细胞的步骤，通过cd45、ly6g来鉴定所述中性粒细胞。

6.根据权利要求5所述的中性粒细胞的分类方法，其特征在于，进一步包括将cd45+ly6g+cd54+cd274+glut1+细胞分类为修复型中性粒细胞。

7.根据权利要求5所述的中性粒细胞的分类方法，其特征在于，进一步包括将cd45+ly6g+cd54-cd274-glut1-细胞分类为非修复型中性粒细胞。

8.根据权利要求5所述的中性粒细胞的分类方法，其特征在于，使用试剂检测所述标志蛋白或其mrna，所述试剂包括抗体或引物、探针。

9.一种用于活化修复型中性粒细胞的方法，其特征在于，包括使用物理电刺激根据权利要求1-4任一项所述的修复型中性粒细胞的步骤。

10.根据权利要求9所述的用于活化修复型中性粒细胞的方法，其特征在于，所述活化是指表达或增强表达vegf、cxcl16、mmp9、proliferin和osteopontin中的至少之一。

技术总结
本发明公开一种修复型中性粒细胞的诱导、分类方法及其用途。其中修复型中性粒细胞为CD45<supgt;+</supgt;Ly6G<supgt;+</supgt;CD54<supgt;+</supgt;CD274<supgt;+</supgt;GLUT1<supgt;+</supgt;经物理电刺激诱导的细胞亚群，该修复型免疫细胞亚群经物理电刺激的诱导后能够发挥促进组织修复功能。此外，本发明的修复型中性粒细胞制备工艺简单，操作简便，可以实现批量生产及临床上的推广应用。

技术研发人员：张学慧,游富平,邓旭亮,郑晓娜,郭亚茹
受保护的技术使用者：北京大学口腔医学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12