一种干细胞培养液及其制备方法与流程

本发明属于干细胞培养，具体涉及一种干细胞培养液及其制备方法。

背景技术：

1、干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。

2、现有的干细胞培养液存在细胞增殖率低，易分化或引起成体干细胞衰老和凋亡的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的之一在于提供一种细胞增值率高，普适性强的干细胞培养液，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、为达到上述技术目的，本发明的技术方案：

3、一种干细胞培养液，包括以下组分：dmem/f12培养基液1000ml、甘氨酸0.5-1mg/ml、碳酸氢钠0.3-0.5mol/l、hepes 15-150mmol/l、胰岛素1-10µg/ml、纤粘连蛋白1-5µg/ml、转铁蛋白0.05-5µg/ml、青霉素和链霉素50-100mg/ml、大豆胰酶抑制剂0.05-0.1g/l、硒酸2.5-5 mmol/l和生长因子20-40 ng/ml，所述生长因子包括bdnf、cntf、igf-1和bfgf。

4、 作为一种改进，包括以下组分：dmem/f12培养基液1000ml、甘氨酸1mg/ml、碳酸氢钠0.37mol/l、hepes 150mmol/l、胰岛素5µg/ml、纤粘连蛋白1µg/ml、转铁蛋白1µg/ml、青霉素和链霉素100mg/ml、大豆胰酶抑制剂0.1g/l、硒酸2.5mmol/l和生长因子28 ng/ml。

5、作为一种改进，所述青霉素和链霉素的质量比为1:1。

6、作为一种改进，所述bdnf、cntf、igf-1和bfgf的质量比为1:1:1:1。

7、作为一种改进，所述dmem/f12培养基液中dmem培养基液与f12培养基液的体积比为1:1。

8、本发明的又一目的在于提供一种所述的干细胞培养液的制备方法，包括以下步骤：

9、（1）取dmem培养基液和f12培养基液，混合成1000ml的dmem/f12培养基液；

10、（2）取上述碳酸氢钠、hepes和抗生素，加入上述dmem/f12培养基液中，搅拌10min，得搅拌液；

11、（3）取上述甘氨酸、胰岛素、纤粘连蛋白、转铁蛋白、大豆胰酶抑制剂和硒酸，加入上述搅拌液中，用hcl调ph至7.2，继续搅拌15-20min，先后用0.22µm和0.45µm过滤膜过滤，得滤液；

12、（4）取上述生长因子，加入所述滤液中，搅拌5-10min，静置，于4℃贮存，即得。

13、由于采用上述技术方案，本发明的有益效果：

14、本发明提供的干细胞培养液，dmem/f12培养基液中含有细胞生长必需的氨基酸、葡萄糖、维生素和微量元素；本发明的干细胞培养液中不含有动物血清，而是采用无血清添加物代替，抗生素可防止不需要的细菌或真菌的生长，避免细菌或真菌对细胞生长产生不必要的影响；胰岛素可用于调节细胞对葡萄糖的摄取量、还可刺激细胞生长和维持细胞功能，转铁蛋白可向细胞内转运离子、还可增加培养基的粘度、保护细胞免受机械损伤，纤粘连蛋白可促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，避免其以悬浮形式生长而影响活性；大豆胰酶抑制剂可终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的；硒酸可提供细胞生产所需的微量元素硒；bdnf为脑源性神经生长因子，cntf为睫状神经营养因子，igf-1为胰岛素样生长因子，bfgf为碱性成纤维生长因子，本发明的干细胞培养液中由于含有多种生长因子，因此可适用于多种人体干细胞的培养，培养的干细胞活性高，且其制备方法简单，易于操作。

技术特征：

1. 一种干细胞培养液，其特征在于，包括以下组分：dmem/f12培养基液1000ml、甘氨酸0.5-1mg/ml、碳酸氢钠0.3-0.5mol/l、hepes 15-150mmol/l、胰岛素1-10µg/ml、纤粘连蛋白1-5µg/ml、转铁蛋白0.05-5µg/ml、青霉素和链霉素50-100mg/ml、大豆胰酶抑制剂0.05-0.1g/l、硒酸2.5-5 mmol/l和生长因子20-40 ng/ml，所述生长因子包括bdnf、cntf、igf-1和bfgf。

2. 根据权利要求1所述的干细胞培养液，其特征在于，包括以下组分：dmem/f12培养基液1000ml、甘氨酸1mg/ml、碳酸氢钠0.37mol/l、hepes 150mmol/l、胰岛素5µg/ml、纤粘连蛋白1µg/ml、转铁蛋白1µg/ml、青霉素和链霉素100mg/ml、大豆胰酶抑制剂0.1g/l、硒酸2.5mmol/l和生长因子28 ng/ml。

3.根据权利要求1所述的干细胞培养液，其特征在于，所述青霉素和链霉素的质量比为1:1。

4.根据权利要求1所述的干细胞培养液，其特征在于，所述bdnf、cntf、igf-1和bfgf的质量比为1:1:1:1。

5.根据权利要求1所述的干细胞培养液，其特征在于，所述dmem/f12培养基液中dmem培养基液与f12培养基液的体积比为1:1。

6.一种权利要求1所述的干细胞培养液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

技术总结
本发明属于干细胞培养技术领域，具体涉及一种干细胞培养液及其制备方法，所述培养液包括以下组分：DMEM/F12培养基液、甘氨酸、碳酸氢钠、HEPES、胰岛素、纤粘连蛋白、转铁蛋白、青霉素和链霉素、大豆胰酶抑制剂、硒酸和生长因子。本发明提供的干细胞培养液，培养的干细胞活性高，且其制备方法简单，易于操作。

技术研发人员：刘凯年,刘天津,李丁
受保护的技术使用者：潍坊吉涛医学科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13