本发明涉及一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a及其制备方法和应用。
背景技术:
1、癌症是危害人类健康的重大疾病。近几十年来,各国研究者都在致力于开发高效、低毒的癌症治疗药物。真菌作为许多生物碱的生产者,其中,吲哚二萜(indolediterpenes,idts)是最具有代表性真菌次级代谢产物。吲哚二萜核心结构由与吲哚融合环状二萜组成,其被证明具有多种生物活性的次级代谢产物,如,其具有显著的细胞毒。据文献报道能产生吲哚二萜的真菌大约有9个菌属,其中,青霉属(penicillium.sp)是产生吲哚二萜最常见的菌属之一。而微生物因其不受生长季节限制且可人工大规模培养的特点,相较于其他生物资源而言不致引起生态破坏,易于解决药源问题,因此在后续开发研究方面具有独特的优势。
技术实现思路
1、本发明的目的是克服现有技术的缺陷,提供一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a,可以自动测量识别药盒规格,并采用机械手抓取药盒,实现补药,可以提高工作效率。
2、本发明的另外一个目的是提供一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a的制备方法。
3、本发明的另外一个目的是提供一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a在制备抗肿瘤药物中的应用。
4、实现上述目的一种技术方案是:一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a,具有式i所示的结构:
5、
6、本发明还提供了一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a的制备方法,包括以下步骤:
7、s1,将青霉属内生真菌接种于发酵培养基中发酵,得到青霉属真菌发酵物,青霉属内生真菌已于2023年03月27日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号cctcc no:m2023416;
8、s2,将所述步骤s1得到的青霉属真菌发酵物与醇混合后超声提取,得到粗提物;
9、s3,将粗提物经色谱纯化,得到具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a。
10、上述的一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a的制备方法,步骤s1中,所述发酵培养基的制作原料中含有马铃薯,发酵方式为固体发酵。
11、上述的一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a的制备方法,步骤s1中的发酵温度为20~25℃,发酵时间为28~30d。
12、上述的一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a的制备方法,步骤s2中,青霉属真菌发酵物与醇的质量体积比为(60~90)g:(100~160)ml。
13、上述的一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a的制备方法,步骤s3中,所述色谱纯化为:
14、以体积比为(100:0)~(3:1)的二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱溶剂,正相硅胶柱色谱洗脱所述粗提物,得到的洗脱液再经色谱纯化,得到具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a。
15、上述的一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a的制备方法,所述硅胶柱色谱洗脱为:
16、用二氯甲烷-甲醇溶液将所述粗提物溶解,得到粗提物溶液;将所述粗提物溶液与粗提物干重质量0.9~1.1倍的硅胶混合,去除溶剂,装柱,依次用体积比为100:0、30:1、3:1的二氯甲烷-甲醇溶液进行梯度洗脱,分别得到体积比为100:0、30:1、3:1的二氯甲烷-甲醇溶液洗脱部分;
17、取体积比为30:1的二氯甲烷-甲醇溶液洗脱部分,以体积比为(80:0)~(30:1)的二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱溶剂,正相硅胶柱色谱洗脱得到具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a。
18、本发明还提供了一种上述的具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a或采用上述制备方法得到的具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a在制备抗肿瘤药物中应用。
19、本发明提供的具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a,其结构如式i所示。本发明的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a对人类对人类乳腺癌细胞mcf-7、肺癌细胞a-549、结肠癌细胞sw-480肝癌细胞smmc-7721以及白血病细胞hl-60具有显著的细胞毒活性。其中,penrhizovarin a对白血病细胞hl-60、肺癌细胞a-549和结肠癌细胞sw-480的细胞毒活性优于阳性对照顺铂(cisplatin)。penrhizovarin a对肝癌细胞smmc-7721和乳腺癌细胞mcf-7的细胞毒活性与阳性对照顺铂相当。此为抗肿瘤活性研究以及制备预防或治疗肺癌的药物奠定了基础。
20、本发明提供的具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a为宽药青藤内生青霉属真菌的代谢产物,可以通过微生物发酵制备得到,制备方法具有培养条件温和、培养基配制简单易行、发酵时间短、易于大规模生产等优势,不仅符合现代环保和低碳经济的需求,还能够利用其开发成预防或治疗人类癌症药物解决了原料问题。
21、本发明提供的具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a能够应用于制备抗肿瘤药物,为开发特异性预防或治疗肿瘤提供了新化合物或先导化合物,也为医用工业提供有应用价值的新药源分子。
22、生物保藏说明
23、青霉属内生真菌(penicillium.sp),保藏于中国典型培养物保藏中心(chinacenter for type culture collection,简称cctcc);保藏单位地址:湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内;保藏时间:2023年03月27日,保藏号:cctcc no:m2023416。
1.一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a,其特征在于,具有式i所示的结构:
2.一种如权利要求1所述的具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarina的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
3.如权利要求2所述的一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarina的制备方法,其特征在于,步骤s1中,所述发酵培养基的制作原料中含有马铃薯,发酵方式为固体发酵。
4.如权利要求2所述的一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarina的制备方法,其特征在于,步骤s1中的发酵温度为20~25℃,发酵时间为28~30d。
5.如权利要求2所述的一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarina的制备方法,其特征在于,步骤s2中,青霉属真菌发酵物与醇的质量体积比为(60~90)g:(100~160)ml。
6.如权利要求2所述的一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarina的制备方法,其特征在于,步骤s3中,所述色谱纯化为:
7.如权利要求6所述的一种具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarina的制备方法,其特征在于,所述硅胶柱色谱洗脱为:
8.一种如权利要求1所述的具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarina或采用权利要求2~7任意一项所述制备方法得到的具有肿瘤细胞毒活性的吲哚二萜类化合物penrhizovarin a在制备抗肿瘤药物中应用。