自离体的包皮组织取得人类间质干细胞的方法及其用途与流程

本公开内容关于一种分离及扩增间质干细胞(mesenchymal stem cell，msc)及从其衍生细胞群的方法。

背景技术：

1、间质干细胞具有良好的分化能力，能够被进一步诱导分化为骨骼细胞、软骨细胞和脂肪细胞，为再生医学材料主要应用的细胞之一。再者，间质干细胞具有抗发炎调节免疫能力的功效，广泛应用于临床治疗疾病。

2、目前可从各种组织分离间质干细胞，其包含但不限于新生儿组织(例如：人类脐带的华通氏胶(wharton’s jelly))、骨髓、周边血液、胎盘、脐带血脂肪组织和牙齿等，但于制备过程中分离并增殖间质干细胞的效果有限，通常需经10-30天才能培养出足够量的间质干细胞，进而用于后续分化及相关应用。

3、因此，相关领域亟需发展一种新颖制备间质干细胞的方法，以制备足以用于后续治疗用途的间质干细胞。

技术实现思路

1、
技术实现要素：
旨在提供本公开内容的简化摘要，以使阅读者对本公开内容具备基本的理解。此发明内容并非本公开内容的完整概述，且其用意并非在指出本发明实施例的重要/关键元件或界定本发明的范围。

2、本发明所提出的方法可以有效率地从离体的包皮组织中分离及培养出人类间质干细胞，大幅改善背景技术培养人类间质干细胞耗时且产能有限的缺陷。

3、据此，本公开内容的第一个态样是关于一种提供人类间质干细胞的方法。该方法包含以下步骤：

4、(a)将离体的包皮组织置于一第一培养基中，其中该第一培养基是角质细胞培养基且不含血清；

5、(b)将经步骤(a)培养的该包皮组织切碎后，于36-37°℃下以一消化酶处理至少2小时；

6、(c)提供一第一培养盘，其含有一第二培养基，其中该第二培养基是角质细胞培养基且有添加血清；

7、(d)将经步骤(b)处理的该切碎的包皮组织置入一滤杯中，再将该滤杯置于该第一培养盘中，将该滤杯连同该第一培养盘于37℃下培养至少12小时；以及

8、(e)收集该第一培养盘上的该人类间质干细胞。

9、依据本发明一实施方式，所述方法更包含以下步骤：

10、(f)将所述滤杯置于第二培养盘上，其中所述第二培养盘含有第二培养基，将滤杯连同第二培养盘于37℃下培养至少2小时，以及

11、(g)收集第二培养盘上的人类间质干细胞。

12、依据本发明一具体的实施方式，所述方法更包含步骤：

13、(a1)在进行步骤(a)之前，以生理食盐水清洗所述离体的包皮组织。

14、依据一具体实施方式，所述方法中的消化酶为胶原蛋白酶(collagenase)和蛋白酶(protease)。

15、在上述任一实施方式中，所采用的第二培养基中可更包含至少3％(体积％)的维他命c、至少10％(体积％)的血清、至少1％(体积％)的抗生素和/或至少3％(体积％)的乙酰半胱氨酸(n-acetylcystein)。

16、依据本发明较佳的实施方式，以上述任一实施方式取得的人类间质干细胞对cd34和cd45细胞表面标记呈现阴性反应，且对cd73、cd90及cd105细胞表面标记呈现阳性反应。

17、此外，本公开内容也关于人类间质干细胞或其未分化子代在制备药物的用途，所述药物可用以治疗亟需治疗的个体的疾病或病症。

18、根据本公开内容的实施方式，所述人类间质干细胞是实质上纯的人类间质干细胞。

19、根据本公开内容的实施方式，实质上纯的人类间质干细胞可经诱导分化成软骨细胞、骨骼细胞及脂肪细胞。

20、根据本公开内容的实施方式，可藉由自体移植人类间质干细胞来治疗的疾病或病症是选自由骨疾病或软骨疾病、神经变性疾病、心脏疾病、肝脏疾病、癌症、自体免疫疾病、移植物抗宿主疾病(graft versus host disease，gvhd)或伤口愈合与组织再生疾病。

21、此外，本发明的又一态样关于利用上述任一实施方式所取得的人类间质干细胞治疗亟需治疗的个体的疾病或病症的方法。所述治疗方法包含对个体投予有效量的根据本公开内容方法所制备的人类间质干细胞。

22、根据本公开内容的实施方式，可于3天或更短的期间、2天或更短的期间、或1天或更短的期间，持续对个体投予有效量的人类间质干细胞或其分化子代。

23、在参阅下文实施方式后，本发明所属技术领域中具有通常知识者当可轻易了解本发明的基本精神及其他发明目的，以及本发明所采用的技术手段与实施态样。

技术特征：

1.一种自一离体的包皮组织取得人类间质干细胞(mesenchymal stem cells)的方法，包含：

2.如权利要求1所述的方法，还包含：

3.如权利要求1所述的方法，还包含：

4.如权利要求1所述的方法，其中所述消化酶为胶原蛋白酶(collagenase)和蛋白酶(protease)。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述第二培养基还包含至少3％(体积％)的维他命c。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述第二培养基还包含至少10％(体积％)的血清。

7.权利要求5所述的方法，其中所述第二培养基还包含至少1％(体积％)的抗生素。

8.如权利要求5所述的方法，其中所述第二培养基还包含至少3％(体积％)的乙酰半胱氨酸(n-acetylcystein)。

9.如权利要求1至8所述的任一种方法，其中所述人类间质干细胞对cd34和cd45细胞表面标记呈现阴性反应，且对cd73、cd90及cd 105细胞表面标记呈现阳性反应。

10.一种人类间质干细胞或其未分化子代在制备一药物的用途，所述药物可用以治疗一亟需治疗的个体的一疾病或病症，其中所述人类间质干细胞是依据权利要求1至9所述的任一种方法制备而成。

11.如权利要求10所述的用途，其中所述人类间质干细胞可分化成软骨细胞、骨骼细胞或脂肪细胞。

12.如权利要求10所述的用途，其中所述疾病或病症是骨或软骨疾病、神经变性疾病、心脏疾病、肝脏疾病、癌症、自体免疫疾病、移植物抗宿主疾病(graft versus hostdisease，gvhd)或伤口愈合与组织再生疾病。

技术总结
本公开内容是一种用以制备人类间质干细胞(hMSCs)的方法。该方法包含以下步骤：将离体的包皮组织置于一第一培养基中培养，且第一培养基不含血清；将经培养的包皮组织切碎，再以消化酶处理；将经处理后的包皮组织倒入一滤杯中；接着，将滤杯置于第一培养盘中，其中所述第一培养盘含有添加血清的第二培养基，将滤杯连同第一培养盘于37℃下培养至少12小时；以及收集第一培养盘上的人类间质干细胞。

技术研发人员：熊仲川
受保护的技术使用者：熊仲川
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15