一种累积谷胱甘肽的方法与流程

本发明属于生物工程，具体涉及一种累积谷胱甘肽的方法。

背景技术：

1、谷胱甘肽(γ-l-glutamyl-cysteinyl-glycine，gsh)，是由l-谷氨酸、l-半胱氨酸和甘氨酸组成的生物活性三肽化合物，是细胞内重要的抗氧化剂和主要的非蛋白巯基化合物(>90％)。在生物组织中，谷胱甘肽通过谷胱甘肽还原酶保持氧化型和还原型的动态平衡并发挥细胞保护、物质代谢、信息调控、调节细胞及组织的发育、对抗或诱发疾病等作用，因此，大量应用于医药保健、护肤美容、食品添加等行业。

2、目前gsh的生产方法主要有溶剂萃取法、化学合成法和生物酶催化法和生物发酵法。相比之下，生物发酵法具有反应条件温和、反应步骤简单、成本低、转化效率高、生产速率快等优势，是今后生产谷胱甘肽的主要趋势，但目前大部分研究还停留在实验室阶段，实现商业化生产的国家主要是日本。

3、分子生物学时常见的提高谷胱甘肽产量的方法，但是工程菌需要加入大量的抗生素，这在操作上是不允许的。此外，抗生素一般比较贵，这在经济上也是不允许的。最严重的是，工程菌在发酵过程中容易出现菌株退化，很难长期使用。因此，寻求其他替代的，经济的方法至关重要。表面活性剂作为一种去污剂应用于谷胱甘肽的生产已经有很多报道，其工作原理是改变细胞膜通透性使胞内的谷胱甘肽释放出来，从而，可以减弱谷胱甘肽对其合成酶的反馈抑制，最终提高产量。本方法不涉及基因操纵，且操作方便，经济适用性强。同时，由于添加的表面活性剂可以使产物释放，也降低了后续分离纯化的难度。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是提供一种能够更加高效的累积谷胱甘肽的方法。

2、为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：

3、一种累积谷胱甘肽的方法，将活化后的酵母菌在发酵培养基中进行发酵培养，然后在所述的酵母菌的生长对数期或稳定期加入制霉素和十二烷基硫酸钠(sds)，继续发酵培养得到所述的谷胱甘肽。

4、优选地，所述的发酵培养基的配方为：葡萄糖20～40g/l，酵母提取物2～8g/l，(nh4)2so4 2～8g/l，kh2po4 3～9g/l，k2so4 3～4g/l，mgso4 1～2g/l，feso4 0.006～0.01g/l，mnso4 0.006～0.01g/l。

5、优选地，所述的发酵培养基的ph为5.5～6.5。

6、优选地，进行所述的发酵培养的温度为25～35℃。

7、优选地，所述的制霉素的添加量为0.2～0.4mg/l。

8、优选地，所述的十二烷基硫酸钠的添加量为5～10mg/l。

9、优选地，所述的活化后的酵母菌的活化方法为：将先酵母菌活化培养至长出单菌落，然后将所述的单菌落进一步活化培养25～35h得到所述的活化后的酵母菌。

10、进一步优选地，进行所述的活化培养的温度为25～35℃。

11、进一步优选地，培养至长出单菌落的培养基的配方包括：0.5～1.5％w/v葡萄糖，0.2～0.8％w/v蛋白胨，0.1～0.5％w/v酵母提取物，以及使培养基呈固体的琼脂。

12、进一步优选地，进一步活化培养的培养基的配方包括：0.5～1.5％w/v葡萄糖，0.2～0.8％w/v蛋白胨，0.1～0.5％w/v酵母提取物。

13、优选地，所述的酵母菌为酿酒酵母saccharomyces cerebisiae。

14、由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优点：

15、本发明能够明显提高谷胱甘肽的生产量，提高了原料利用率，降低了生产成本。

技术特征：

1.一种累积谷胱甘肽的方法，其特征在于：将活化后的酵母菌在发酵培养基中进行发酵培养，然后在所述的酵母菌的生长稳定期加入制霉素和十二烷基硫酸钠，继续发酵培养得到所述的谷胱甘肽，

2.根据权利要求1所述的累积谷胱甘肽的方法，其特征在于：所述活化后的酵母菌在发酵培养基中进行发酵培养20小时下添加所述制霉素和所述十二烷基硫酸钠，加入后继续培养30小时收菌。

3.根据权利要求1或2所述的累积谷胱甘肽的方法，其特征在于：所述制霉素的添加量为0.4mg/l，所述十二烷基硫酸钠的添加量为10mg/l。

4.根据权利要求1所述的累积谷胱甘肽的方法，其特征在于：所述的发酵培养基的配方为：葡萄糖20～40g/l，酵母提取物2～8g/l，(nh4)2so4 2～8g/l，kh2po4 3～9g/l，k2so4 3～4g/l，mgso4 1～2g/l，feso4 0.006～0.01g/l，mnso40.006～0.01g/l。

5.根据权利要求1所述的累积谷胱甘肽的方法，其特征在于：所述的发酵培养基的ph为5.5～6.5；

6.根据权利要求1所述的累积谷胱甘肽的方法，其特征在于：所述的活化后的酵母菌的活化方法为：先将酵母菌活化培养至长出单菌落，然后将所述的单菌落进一步活化培养25～35h得到所述的活化后的酵母菌。

7.根据权利要求6所述的累积谷胱甘肽的方法，其特征在于：进行所述的活化培养的温度为25～35℃。

8.根据权利要求6所述的累积谷胱甘肽的方法，其特征在于：培养至长出单菌落的培养基的配方包括：0.5～1.5％w/v葡萄糖，0.2～0.8％w/v蛋白胨，0.1～0.5％w/v酵母提取物，以及使培养基呈固体的琼脂。

9.根据权利要求6所述的累积谷胱甘肽的方法，其特征在于：进一步活化培养的培养基的配方包括：0.5～1.5％w/v葡萄糖，0.2～0.8％w/v蛋白胨，0.1～0.5％w/v酵母提取物。

10.根据权利要求1所述的累积谷胱甘肽的方法，其特征在于：所述的酵母菌为酿酒酵母saccharomyces cerebisiae。

技术总结
本发明涉及一种累积谷胱甘肽的方法，将活化后的酵母菌在发酵培养基中进行发酵培养，然后在所述的酵母菌的生长对数期或稳定期加入制霉素和十二烷基硫酸钠(SDS)，继续发酵培养得到所述的谷胱甘肽。本发明能够明显提高谷胱甘肽的生产量，提高了原料利用率，降低了生产成本。

技术研发人员：徐继嗣
受保护的技术使用者：张家港市华天药业有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13