一种炭疽杆菌PA-LF融合蛋白、ELISA试剂盒和应用

本发明属于体外诊断，具体涉及一种炭疽杆菌pa-lf融合蛋白、elisa试剂盒和应用。

背景技术：

1、炭疽(anthrax)是由炭疽杆菌(bacillus anthracis)所引起的一种烈性人畜共患病。炭疽可以通过在自然条件下接触受感染的动物及其产品而传播给人类。炭疽因其广泛分布而被认为是一种具有全球公共卫生重要性的疾病。

2、炭疽杆菌的毒力归因于两个因素，即荚膜和外毒素。炭疽杆菌的荚膜是独特的，它由聚-d-γ-谷氨酸组成，由94kb质粒pxo2编码。外毒素由三种蛋白质组成，即保护性抗原(pa)、致死因子(lf)和水肿因子(ef)，均由181kb巨型质粒pxo1编码。外毒素属于a-b毒素超家族，pa充当b部分，lf/ef充当a部分。其中b部分与细胞表面受体结合并有助于a部分在细胞内的易位。同样，抗lf抗体因其免疫反应显著且比较早出现，被认为是炭疽感染的诊断标志，而ef作为炭疽毒素中的一部分，发现针对pa和ef的免疫反应存在延迟和较低两个特点。

3、目前，应对炭疽感染的方法还主要是提前接种炭疽疫苗，市场上应用于动物上的炭疽疫苗主要是ⅱ号炭疽芽孢苗和无荚膜炭疽芽孢苗。而感染炭疽的检测方法常采用特异性抗体采用夹心法或竞争法来检测抗体。该方法无法诊断患者感染炭疽所处阶段，因此即便诊断为阳性，也无法对症给药。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种炭疽杆菌pa-lf融合蛋白，是由pa结构域2-4和lf结构域1融合得到，作为抗原制备检测炭疽抗体的试剂盒，为感染病患指导用药提供了可能。

2、本发明提供了一种炭疽杆菌pa-lf融合蛋白，氨基酸序列如seq id no:1所示。

3、本发明提供了所述炭疽杆菌pa-lf融合蛋白在制备诊断炭疽或检测炭疽杆菌抗体的试剂或试剂盒中的应用。

4、优选的，所述炭疽杆菌抗体包括机体经人工免疫产生的抗体。

5、优选的，所述人工免疫的疫苗包括ⅱ号炭疽芽孢苗和/或无荚膜炭疽芽孢苗。

6、优选的，所述试剂盒包括以下至少一种：elisa试剂盒、免疫层析试剂盒和免疫磁珠试剂盒。

7、本发明提供了一种检测炭疽杆菌抗体的elisa试剂盒，包括以下组成：

8、包被有所述炭疽杆菌pa-lf融合蛋白的检测板和酶标记的igg抗体。

9、优选的，所述炭疽杆菌pa-lf融合蛋白的浓度包括3～5μg/ml。

10、优选的，所述炭疽杆菌pa-lf融合蛋白的包被液为ph值7.3～7.5的pbs缓冲液；

11、所述包被的方法为36.8～37.2℃下孵育110～130min。

12、优选的，所述包被后，还包括对检测板进行封闭；

13、所述封闭用封闭液为含质量百分含量4％～6％脱脂奶粉的pbs缓冲液。

14、优选的，还包括以下至少一种试剂：洗涤液、稀释液、包被液、封闭液、底物液、终止液、阴性血清和阳性血清。

15、本发明提供了一种炭疽杆菌pa-lf融合蛋白，氨基酸序列如seq id no:1所示。本发明提供的融合蛋白中pa作为自然免疫和疫苗诱导免疫的主要抗原且在炭疽毒素进入机体内发挥着重要作用，因此pa是炭疽毒素复合物的核心成分，因此pa特异性抗体在在动物模型中对炭疽杆菌的保护是十分重要的，当检测炭疽杆菌抗体时，以pa作为结合抗原的一部分有利于特异性识别机体中主要炭疽杆菌抗体。同时本发明还将lf结构域1与pa结构域2-4融合，与全长lf结构域相比，不仅不会影响pa与抗体的结合，而且不会导致融合蛋白产生毒性，具有较高的安全性，另外，lf结构域1与pa融合还能识别并结合针对lf蛋白的特异性抗体，大大增加了检测的准确性的同时还降低了检测成本提高检测效率。此外，以所述pa-lf融合蛋白作为包被抗原用于炭疽杆菌抗体的检测中，为炭疽疫苗免疫动物后的抗体消长检测提供技术支持，为炭疽疫苗的免疫程序制订提供理论依据。

技术特征：

1.一种炭疽杆菌pa-lf融合蛋白，其特征在于，氨基酸序列如seq id no:1所示。

2.权利要求1所述炭疽杆菌pa-lf融合蛋白在制备诊断炭疽或检测炭疽杆菌抗体的试剂或试剂盒中的应用。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述炭疽杆菌抗体为机体经人工免疫产生的抗体。

4.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述人工免疫的疫苗包括ⅱ号炭疽芽孢苗和/或无荚膜炭疽芽孢苗。

5.根据权利要求2～4中任意一项所述应用，其特征在于，所述试剂盒包括以下至少一种：elisa试剂盒、免疫层析试剂盒和免疫磁珠试剂盒。

6.一种检测炭疽杆菌抗体的elisa试剂盒，其特征在于，包括以下组成：

7.根据权利要求6所述elisa试剂盒，其特征在于，所述炭疽杆菌pa-lf融合蛋白的浓度包括3～5μg/ml。

8.根据权利要求6所述elisa试剂盒，其特征在于，所述炭疽杆菌pa-lf融合蛋白的包被液为ph值7.3～7.5的pbs缓冲液；

9.根据权利要求8所述elisa试剂盒，其特征在于，所述包被后，还包括对检测板进行封闭；

10.根据权利要求6～9中任意一项所述elisa试剂盒，其特征在于，还包括以下至少一种试剂：洗涤液、稀释液、包被液、封闭液、底物液、终止液、阴性血清和阳性血清。

技术总结
本发明提供了一种炭疽杆菌PA‑LF融合蛋白、ELISA试剂盒和应用，属于体外诊断技术领域。本发明提供了一种炭疽杆菌PA‑LF融合蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明将LF结构域1与PA结构域2‑4融合，与全长LF结构域相比，不仅不会影响PA与抗体的结合，而且具有较高的安全性，另外，LF结构域1与PA融合还能识别并结合针对LF蛋白的特异性抗体，大大增加了检测的准确性的同时还降低了检测成本提高检测效率。此外，本发明还提供了以所述PA‑LF融合蛋白作为包被抗原制备ELISA试剂盒，用于炭疽杆菌抗体的检测中，为炭疽疫苗免疫动物后的抗体检测提供支持，为炭疽疫苗的免疫程序提供理论依据。

技术研发人员：马勋,王静,薄新文,吕双飞,刘彩霞,寇丽君,史唯地,任慧杰,钱瑞宣
受保护的技术使用者：石河子大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15