一种提高免疫功能的葡萄渣多糖及其制备方法和应用

本发明属于生物医学，尤其涉及一种提高免疫功能的葡萄渣多糖及其制备方法和应用。

背景技术：

1、目前，葡萄在全球总产量约为2338万吨，在所有水果中一直位居前五。如今葡萄酒产业已颇具规模，根据国际葡萄酒进出口组织(oiv)的数据。然而，在酿酒过程中也相应产生了大量的固体残渣(约占葡萄重量的25％)。这些主要由葡萄渣组成的固体残渣通常会作为废物排放到环境中，操作不当便会造成废物分解、气味、浸出等更加严重的环境污染。

2、近年来，植物多糖作为天然产物因其低毒、安全、高效等特点已成为最近几年的研究热点。然而，关于葡萄渣副产物中提取多糖是否具有抗氧化保肝活性研究还没有报道，其提取过程、纯化方式、结构表征和生物活性报道也很少。因此，葡萄渣多糖的商业价值以及其作为抗氧化的潜力值得进一步研究。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种提高免疫功能的葡萄渣多糖及其制备方法和应用，从而发挥葡萄渣的商业价值。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

3、本发明提供了一种提高免疫功能的葡萄渣多糖，所述葡萄渣多糖的制备方法包括如下步骤：

4、(1)将葡萄渣通过无水乙醇浸泡2h除脂，随后按照1:3的料液比加入蒸馏水采用300w超声提取40min，得到葡萄渣提取液；

5、(2)采用真空旋转蒸发浓缩的方式将葡萄渣提取液浓缩为原体积的五分之一，然后按照样品与乙醇比例为1:4加入无水乙醇在4℃下醇沉过夜；

6、(3)收集醇沉后的沉淀用蒸馏水溶解，用sevag法除去蛋白，ab-8型大孔树脂除色素；

7、(4)通过滤膜为10kda的超滤机除去小分子物质，最后真空冷冻干燥得到葡萄渣多糖。

8、优选地，所述葡萄渣多糖降低ccl4诱导的肝组织损伤；所述葡萄渣多糖降低ccl4引起的肝脏炎症；所述葡萄渣多糖降低ccl4诱导的肝组织氧化应激；降低所述葡萄渣多糖提高巨噬细胞的吞噬能力。

9、其次，本发明提供了葡萄渣多糖在制备降低ccl4诱导的肝组织损伤治疗药物中的应用。

10、优选地，所述药物可同时降低ccl4导致的肝细胞肿胀坏死和空泡化，炎性细胞浸润，以及血清中alt和ast的含量增加。

11、其次，本发明提供了葡萄渣多糖在制备抑制肝癌细胞增殖的药物中的应用，所述葡萄渣多糖由权利要求1所述的制备方法制备得到。

12、其次，本发明提供了一种用于抑制干细胞细胞增殖的组合药物，所述组合药物的核心有效成分为葡萄渣多糖和甘草甜素；

13、所述葡萄渣多糖由权利要求1所述的制备方法制备得到；

14、所述组合药物中葡萄渣多糖的浓度为10-20μg/ml，所述组合药物中甘草甜素的浓度为10-20μg/ml。

15、其次，本发明提供了葡萄渣多糖在制备降低ccl4引起的肝脏炎症治疗药物中的应用。

16、优选地，所述药物降低ccl4引起的血液中炎症因子tnf-α和il-6水平增加。

17、其次，本发明所提供的葡萄渣多糖在制备降低ccl4引起的肝脏氧化应激药物中的应用。

18、优选地，所述药物可同时降低肝损伤标志物mda含量，升高sod，cat和gsh酶活性。

19、其次，本发明提供了葡萄渣多糖在制备提高巨噬细胞吞噬能力的药物中的应用。

20、本发明的有益效果在于：

21、通过bbd响应面法优化了葡萄渣多糖的最优提取方式，通过体内动物实验发现葡萄渣多糖能抑制炎症因子tnf-α、il-6的表达；改善了cccl4急性肝损伤模型造成的肝脏形态；显著降低了肝脏指数、alt、ast的活性以及氧化应激标志物mda的含量，升高了抗氧化酶sod、cat、gsh的活性，并提高了巨噬细胞吞噬能力；

22、除此之外，本发明发现本发明制备的葡萄渣多糖能够有效的肝癌细胞的增殖，并且当其浓度在10-20μg/ml时，能够与甘草甜素产生一个协同的抑制效果，从而可以实现二者在相对较低的浓度即可实现显著的抑制效果，从而节约成本并减少毒副作用。

技术特征：

1.一种提高免疫功能的葡萄渣多糖，其特征在于，所述葡萄渣多糖的制备方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的葡萄渣多糖，其特征在于，所述葡萄渣多糖降低ccl4诱导的肝组织损伤；所述葡萄渣多糖降低ccl4引起的肝脏炎症；所述葡萄渣多糖降低ccl4诱导的肝组织氧化应激；降低所述葡萄渣多糖提高巨噬细胞的吞噬能力。

3.如权利要求1所述的葡萄渣多糖在制备降低ccl4诱导的肝组织损伤治疗药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物可同时降低ccl4导致的肝细胞肿胀坏死和空泡化，炎性细胞浸润，以及血清中alt和ast的含量增加。

5.如权利要求1所述的葡萄渣多糖在制备抑制肝癌细胞增殖的药物中的应用，其特征在于，所述葡萄渣多糖由权利要求1所述的制备方法制备得到。

6.一种用于抑制干细胞细胞增殖的组合药物，其特征在于，所述组合药物的核心有效成分为葡萄渣多糖和甘草甜素；

7.如权利要求1所述的葡萄渣多糖在制备降低ccl4引起的肝脏氧化应激药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物可同时降低肝损伤标志物mda含量，升高sod，cat和gsh酶活性。

9.如权利要求1所述的葡萄渣多糖在制备提高巨噬细胞吞噬能力的药物中的应用。

技术总结
本发明提供了一种提高免疫功能的葡萄渣多糖及其制备方法和应用，属于生物医学技术领域。本发明首先将葡萄渣通过无水乙醇除脂，随后使用蒸馏水采用300W超声提取40min，得到葡萄渣提取液；之后采用真空旋转蒸发浓缩的方式将葡萄渣提取液浓缩，同时利用乙醇进行醇沉过夜；之后收集醇沉后的沉淀用蒸馏水溶解，用Sevag法除去蛋白，AB‑8型大孔树脂除色素；并且通过滤膜为10Kda的超滤机除去小分子物质，最后真空冷冻干燥得到葡萄渣多糖。本发明所制备的多糖可以显著的降低肝损伤并抑制肝癌细胞增殖，因此有助于实现葡萄渣的变废为宝。

技术研发人员：李秋,冷翔鹏,黄小丽,刘志海,曲丽华
受保护的技术使用者：青岛农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13