一种海洋真菌来源的甾体衍生物及其制备方法和应用

本发明涉及医药化合物，特别涉及一种海洋真菌来源的甾体衍生物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、宫颈癌是最具破坏性的妇科肿瘤之一，且其发病呈现年轻化的趋势，对女性的身体健康具有严重的威胁，给人们的经济和生活带来了极大的负担。然而，抗宫颈癌的病理机制较为复杂，其确切抗宫颈癌药物并不多。目前宫颈癌的治疗主要包括常规的手术治疗与放、化疗，但均存在着一定的弊端，因此寻找新型抗宫颈癌药物对于改善患者预后具有重要的意义。

2、海洋微生物次生代谢产物是药物先导化合物的重要来源，然而随着微生物研究的不断深入，发现结构新颖，活性特异的化合物几率不断下降。因此，增加海洋微生物次生代谢产物的化学多样性；获得更多结构新颖的活性化合物，是海洋创新药物开发重要途径。研究发现，海洋真菌化学多样性与其菌株基因簇的表达有关，常规实验室培养条件下，其多数调控基因并没有表达，即沉默状态，当通过外界条件，激活微生物中沉默的基因簇时，刺激其产生更多结构新颖、活性显著的次生代谢产物。因此，提高化学多样性、发现海洋药物先导化合物，将为海洋天然产物和海洋药物的研究提供崭新的研究思路和方法。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种海洋真菌来源的甾体衍生物及其制备方法和应用，为寻找新型抗宫颈癌药物研发提供新的药物来源，同时该衍生物的制备方法简单，重复性好，适合工业上大规模发酵与应用。

2、本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

3、一种海洋真菌来源的甾体衍生物，其特征在于，结构式如下式所示：

4、

5、本发明还公开了一种海洋真菌来源的甾体衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

6、(1)将从海绵中分离得到的真菌拟盘多毛孢菌(pestalotiopsis sp.swmu-wz04-2)接入种子培养基中，得到种子培养液；

7、(2)添加化学表观遗传修饰剂的配制：将化学表观遗传修饰剂用蒸馏水配制成的溶液，过滤后加入固体大米发酵培养基中；

8、(3)将配制好的化学表观遗传修饰剂加入到培养基中，再将种子液接种到含化学表观修饰剂的固体大米发酵培养基中，室温，静置，避光培养30～60天，以作萃取分离用；

9、(4)提取物：收集发酵物用乙酸乙酯浸泡，提取4～6次，收集提取液，减压浓缩得到浸膏；再进行分离纯化，得到化合物。

10、进一步优选的，步骤(1)中所述的种子培养基的重量比组分为：麦芽浸膏10～30、粗海盐10～30、蒸馏水1000～2000，ph 6.0～8.0。

11、进一步优选的，步骤(2)中所述化学表观遗传修饰剂优选烟酰胺、丁酸钠、5-氮杂胞苷、5-氮-2’-脱氧胞苷、rg-108其中一种。

12、进一步优选的，步骤(3)中所述的固体大米发酵培养基重量比组分为：大米100～200、粗海盐3～10、自来水200～1000，培养时间：28～60天，静置培养温度：25～30℃。

13、进一步优选的，步骤(4)中所述的分离纯化的步骤具体为：将浸膏经过硅胶柱层析，洗脱条件为：50:1-0:100的二氯甲烷-甲醇，得到fr.1～fr.6组分；将fr.3经过硅胶层析柱洗脱，洗脱条件为：8:1的石油醚-丙酮，得到fr.3.1～fr.3.3组分；再将fr.3.3组分经过常压ods反相色谱柱洗脱，洗脱条件：90～60％甲醇-水，得到fr.3.3.1-fr.3.3.4组分，将fr.3.3.3再经过hplc液相制备得到化合物，制备条件：90～40％甲醇-水。

14、本发明还公开了一种海洋真菌来源的甾体衍生物在制备抗宫颈癌药物中的应用。

15、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

16、本发明为寻找新型抗宫颈癌药物研发提供新的药物来源。通过细胞生长曲线可以看出，不同浓度化合物均抑制肿瘤细胞hela生长，且呈现出浓度依赖性抑制肿瘤细胞生长的趋势；进行划痕实验，用化合物不同浓度处理之后，细胞划痕愈合率明显降低，说明化合物抑制了肿瘤细胞的迁移；为进一步验证该化合物对周期相关因子的调控作用，采用western blot检测化合物处理后的hela细胞，结果表明，化合物可通过下调g0/g1期相关cyclins和cdks的表达量。同时该衍生物的制备方法简单，重复性好，适合工业上大规模发酵与应用。

技术特征：

1.一种海洋真菌来源的甾体衍生物，其特征在于，结构式如下式所示：

2.根据权利要求1所述的一种海洋真菌来源的甾体衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的一种海洋真菌来源的甾体衍生物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的种子培养基的重量比组分为：麦芽浸膏10～30、粗海盐10～30、蒸馏水1000～2000，ph 6.0～8.0。

4.根据权利要求2所述的一种海洋真菌来源的甾体衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述化学表观遗传修饰剂优选烟酰胺、丁酸钠、5-氮杂胞苷、5-氮-2’-脱氧胞苷、rg-108其中一种。

5.根据权利要求2所述的一种海洋真菌来源的甾体衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的固体大米发酵培养基重量比组分为：大米100～200、粗海盐3～10、自来水200～1000，培养时间：28～60天，静置培养温度：25～30℃。

6.根据权利要求2所述的一种海洋真菌来源的甾体衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述的分离纯化的步骤具体为：将浸膏经过硅胶柱层析，洗脱条件为：50:1-0:100的二氯甲烷-甲醇，得到fr.1～fr.6组分；将fr.3经过硅胶层析柱洗脱，洗脱条件为：8:1的石油醚-丙酮，得到fr.3.1～fr.3.3组分；再将fr.3.3组分经过常压ods反相色谱柱洗脱，洗脱条件：90～60％甲醇-水，得到fr.3.3.1-fr.3.3.4组分，将fr.3.3.3再经过hplc液相制备得到化合物，制备条件：90～40％甲醇-水。

7.权利要求1所述的一种海洋真菌来源的甾体衍生物在制备抗宫颈癌药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种海洋真菌来源的甾体类衍生物及其制备方法和应用。本发明从海南三亚水域一种海绵中分离得到一株海洋内生真菌Pestalotiopsissp.SWMU‑WZ04‑2.通过化学表观遗传修饰策略，对其进行放大发酵，从中分离得到一种具有抗宫颈癌活性的5/7/8/5四环甾体衍生物新骨架。本发明为寻找新型抗宫颈癌药物研发提供新的药物来源，同时该衍生物的制备方法简单，重复性好，适合工业上大规模发酵与应用。

技术研发人员：雷辉,毕晓旭,张丹,牛红,陈斯玮,傅秀娟,罗禹
受保护的技术使用者：西南医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13