一种甜菜碱柠檬酸NaDES溶剂提取黑松露中多糖的方法与流程

本发明涉及天然深共熔溶剂(nades)在植物活性成分提取，特别涉及一种甜菜碱柠檬酸nades溶剂提取黑松露中多糖的方法。

背景技术：

1、黑松露也称黑孢块菌是一种含有雄性酮及其前体的菌根性食用菌，外表崎岖不平，色泽介于深棕色与黑色之间，呈小凸起状，遍及灰色或者浅黑色与白色的纹理。

2、黑松露多数在阔叶树的根部着丝生长，散布于树底120～150厘米范围，块状主体藏于地下5～40厘米。主要分布于阿尔卑斯山脉及喜马拉雅山脉的少数地区。

3、黑松露因为散发著特殊的气味，自古便有许多人为之着迷。在欧洲通常用于顶级食材，其身价与鱼子酱、鹅肝酱等高级美食并列，号称美食“三大天王”。由于其生长条件苛刻，每年全世界产量非常稀少，故价格相当昂贵，堪比黄金，被称为餐桌上的“黑色钻石”。

4、现代科学研究数据显示黑松露含有丰富的蛋白质、18种氨基酸(包括人体不能合成的8种必需氨基酸)、不饱和脂肪酸、多种维生素、锌、锰、铁、钙、磷、硒等必需微量元素，以及鞘脂类、脑苷脂、神经酰胺、三萜、雄性酮、腺苷、松露酸、甾醇、松露多糖、松露多肽等大量的代谢产物，具有极高的营养保健价值。其中雄性酮有助阳、调理内分泌的显著功效；鞘脂类化合物在防止老年痴呆、动脉粥样硬化以及抗肿瘤细胞毒性方面有明显活性；多糖、多肽、三萜具有增强免疫力、抗衰老、抗疲劳等作用，可用于保健养身。

5、黑松露的护肤功效是相当卓越的，在现在的市面上，也有很多添加了黑松露提取物的护肤品，主打抗衰老、修复、美容养颜，从功效上讲，能使皮肤保持弹性和光泽，为肌肤提供足够的养分，让皮肤红润清透。能使皮肤细腻光滑，脸上没有小疙瘩，还可以改善面部血色。能使皮肤紧致，没有细纹，预防衰老。

6、现阶段市面上黑松露提取物多为纯水提取物，选择性差，提取效率较低，有效成分含量低，杂质多等，最终得到的产物稳定性差、活性不足，急需开发新型绿色高效的提取溶剂。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种从黑松露中高效提取多糖类化合物的制备方法。该方法利用天然深共熔溶剂(nades)耦合水浴热浸提取工艺实现黑松露中多糖类化合物的高效提取，将提取液离心过滤最终得到黑松露提取物的制备方法，并且基于提取液开展了一系列功效研究。

2、深共熔溶剂(nades)主要是由氢键供体和氢键受体以一定的摩尔比混合加热所形成的均一、透明澄清的溶剂。深共熔溶剂不仅拥有传统液体所具备的优异性能，而且制备简单，成本低，对环境友好，因其溶解性好、热稳定性高、具有良好的生物相容性和生物降解性等特点，而被广泛应用于化妆品、生物医药等领域。

3、甜菜碱是一种渗透剂，在大多数活生物体的细胞中起着重要作用，其保湿性能要优于其他的保湿剂，如透明质酸钠，因此，甜菜碱被认作是温和安全的皮肤保湿调理剂。

4、柠檬酸在护肤品中具有抗氧化、抗衰老、保湿补水、调节皮肤ph值的作用，能有效控制皮肤油脂的分泌，对于痘痘、闭口的消退有很大的辅助作用。而且其能抵抗自由基对皮肤的损害，能使皮肤变得光滑、白嫩、细腻，具有很好的美白效果。

5、为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案实现：

6、(1)黑松露清水洗净，冷冻干燥，粉碎，过筛；

7、(2)甜菜碱柠檬酸nades溶剂的制备：将甜菜碱和柠檬酸按一定的摩尔比投入反应器，再加入适当比例的水搅拌至溶液澄清后置于旋转蒸发仪上旋蒸，旋蒸残余液即为甜菜碱柠檬酸nades；向甜菜碱柠檬酸nades中加入一定量的超纯水，配制得到用于提取的甜菜碱柠檬酸nades溶剂；

8、(3)将黑松露粉末按一定的固液比加入到甜菜碱柠檬酸nades溶剂中，恒温水浴处理得到提取液；

9、(4)提取液离心，取上层清液过滤，去除多余杂质，获得提取液；

10、优选的，步骤(1)中，冷冻干燥时间为2-5h，干燥温度在-40℃--60℃,粉碎得到的黑松露粉末需进行60目的过筛操作。

11、优选的，步骤(2)中甜菜碱、柠檬酸以摩尔比1:0.2-1:5投入反应器。

12、优选的，步骤(2)中在旋蒸温度为30-60℃，旋蒸时间为1-8h。

13、优选的，步骤(2)中，向透明粘稠液体中加入一定量的超纯水配制得到浓度为1-90％的甜菜碱柠檬酸nades溶剂。

14、优选的，步骤(3)中，提取时甜菜碱柠檬酸nades溶剂与黑松露粉末的重量体积比为1g:5-50ml，在温度30-80℃恒温水浴下处理0.5-3h。

15、优选的，步骤(4)中离心参数为5000-10000r/min，离心5-20min。滤膜为0.45um有机相滤膜。

16、本发明用制备出的甜菜碱柠檬酸nades耦合水浴热浸提取工艺对黑松露多糖类化合物进行提取，得到的黑松露提取物中多糖类化合物产率高3.65g/ml，是水提的2.16倍，是50％乙醇提取的14.6倍，是50％丁二醇提取的13.83倍。

17、上述所制备得到的黑松露提取物，主要成分为多糖类化合物、甜菜碱柠檬酸nades、水，可以作为一种新型食药妆原料，发挥优异的抑菌消炎、抗氧化、抗皱、透皮易渗透等功效。

18、本发明与现有的技术相比具有如下的有益效果：

19、本发明甜菜碱柠檬酸nades溶剂原子经济性100％，绿色经济，生物相容性好，可以作为黑松露中多糖类化合物的提取溶剂。通过耦合水浴热浸提取工艺的方式，有效破坏植物细胞壁，有效提高提取物中多糖类化合物的含量。同时甜菜碱柠檬酸nades无需分离，可作为提取物中的一种功效成分，协同多糖类化合物，发挥抑菌消炎、抗氧化、抗皱、促渗等功效。

技术特征：

1.一种甜菜碱柠檬酸nades溶剂提取黑松露中多糖的方法，其特征在于，所述甜菜碱柠檬酸nades溶剂提取黑松露中多糖的方法，具体步骤如下：

2.如权利要求1所述的甜菜碱柠檬酸nades溶剂提取黑松露中多糖的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述冷冻干燥时间为2-5h，干燥温度在-40℃--60℃,粉碎得到的黑松露粉末需进行60目的过筛操作。

3.如权利要求1所述的甜菜碱柠檬酸nades溶剂提取黑松露中多糖的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，所述甜菜碱、柠檬酸以摩尔比1:0.2-1:5投入反应器。

4.如权利要求1所述的甜菜碱柠檬酸nades溶剂提取黑松露中多糖的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，所述旋蒸温度为30-60℃，旋蒸时间为1-8h。

5.如权利要求1所述的甜菜碱柠檬酸nades溶剂提取黑松露中多糖的方法，所述步骤（2）中，向透明粘稠液体中加入一定量的超纯水配制得到浓度为1-90%的甜菜碱柠檬酸nades溶剂。

6.如权利要求1所述的甜菜碱柠檬酸nades溶剂提取黑松露中多糖的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，提取时，所述甜菜碱柠檬酸nades溶剂与黑松露粉末的重量体积比为1g:5-50ml，在温度30-80℃恒温水浴下处理0.5-3h。

7.如权利要求1所述的甜菜碱柠檬酸nades溶剂提取黑松露中多糖的方法，其特征在于，所述步骤（4）中，所述离心参数为5000-10000r/min，离心5-20min。滤膜为0.45um有机相滤膜。

8.如权利要求1所述的甜菜碱柠檬酸nades溶剂提取黑松露中多糖的方法，其特征在于，所述甜菜碱柠檬酸nades溶剂提取黑松露中多糖的提取液用于一系列功效研究，包括细胞毒性、斑帖、化妆品常规九项和抗氧化性测试，其结果表明黑松露提取物应用于化妆品，具有优异的抗氧化、抗皱、透皮易渗透功效。

技术总结
本发明公开了一种甜菜碱柠檬酸NaDES溶剂提取黑松露中多糖的方法，通过耦合水浴热浸提取工艺的方式，有效破坏植物细胞壁，有效提高提取物中多糖类化合物的含量，实现黑松露中多糖类化合物的高效提取，甜菜碱柠檬酸NaDES溶剂能够加速破坏黑松露植物细胞的细胞壁，增加细胞膜的通透性,促使黑松露中的多糖类化合物高效流出，并且甜菜碱柠檬酸NaDES溶剂本身具有一定的抗炎、抑菌功效，无需进一步的分离，最终得到的黑松露提取物具有优异的抗氧化、抗皱、透皮易渗透等功效。

技术研发人员：胡惠,胡明铭,李远彬,陈一凡,韩褒,杨广珍,潘明,张嘉恒
受保护的技术使用者：河南澳爱丝生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13