检测尘肺病易感基因的试剂盒及其应用的制作方法

本发明涉及基因检测，具体而言，涉及一种检测尘肺病易感基因的试剂盒及其应用。

背景技术：

1、煤尘接触与遗传因素在煤工尘肺(coal worker’s pneumoconiosis,cwp)的发生发展发挥了重要的作用。煤工尘肺不仅会影响煤工的身体健康，更会给企业带来沉重的经济负担。未来社会的发展与进步归根到底依赖于人类健康的进步，确保职业健康安全将成为基本要求，然而目前在我国传统职业安全领域侧重点在于生产安全，人类健康安全未受到足够重视。传统医疗卫生领域侧重于疾病本身的防治，往往忽视遗传因素、职业环境及职业习惯对职业人群的危害。因此积极寻找煤工尘肺的危险因素，针对性进行一级预防和个体化干预，打破基因易感性-煤尘接触-煤工尘肺这一恶性循环，对提高我国广大煤工职业人群的健康水平企业经济效益和国民经济的可持续发展有重要意义。

2、除了煤尘暴露因素，遗传易感性也有煤工尘肺的发病机制。随着分子遗传学研究的不断深入，关于cwp遗传易感性的研究已取得较大进展，流行病学调查发现，除环境因素外，个体的遗传异质性与cwp易感性密切相关。与尘肺病发病相关基因及其相关位点不断被报道，单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphisms,snps)作为第3代遗传标记，具有数量多、分布广和遗传稳定等特点，是研究煤工尘肺疾病易感基因的重要手段。因此，易感基因及其snps的早期筛查可为cwp的分子遗传学机制研究、个体危险度评估和疾病诊疗提供线索和理论依据。

3、以往snp位点的检测通常通过单个基因测序、taqman探针法、基因组测序、基因芯片等技术测定，具有耗时时间长、花费高、分析门槛高等特点，且尘肺病发病遗传分析，在市场上处于小众、数量少的一类分析，并未形成商业化的检测体系。因此，对于多发于非发达地区人群的尘肺病，如何提供一种能够快速获得检测结果、成本低、易操作的检测方法十分重要。

技术实现思路

1、本发明的主要目的在于提供一种检测尘肺病易感基因的试剂盒及其应用，以解决现有技术中无法较快得到尘肺病易感基因检测结果的问题。

2、为了实现上述目的，根据本发明的第一个方面，提供了一种检测尘肺病易感基因的试剂盒，试剂盒包括：检测尘肺病易感基因snp位点的引物及snp位点对应的限制性内切酶；尘肺病易感基因snp位点选自以下的一种或多种：rs16944、rs1800796、rs4073或rs562047；引物选自以下一种或多种：检测尘肺病易感基因snp位点为rs16944的引物，其序列为seq id no：1和seq id no：2；或检测尘肺病易感基因snp位点为rs1800796的引物，其序列为seq id no：3和seq id no：4；或检测尘肺病易感基因snp位点为rs4073的引物，其序列为seq id no：5和seq id no：6；或检测尘肺病易感基因snp位点为rs562047的引物，其序列为seq id no：7和seq id no：8。

3、进一步地，尘肺病易感基因snp位点为rs16944、rs1800796、rs4073及rs562047。

4、进一步地，限制性内切酶选自以下一种或多种：avai酶、brsbi酶、mfei酶或bsai酶。

5、进一步地，试剂盒还包括：核酸免提取裂解液及限制性内切酶buffer。

6、进一步地，试剂盒还包括说明书，说明书包括尘肺病易感基因snp模式图谱；尘肺病易感基因snp模式图谱包括9条长度不同的条带，分别为：条带1，长度为648bp，指示rs16944的碱基位点t；条带2，长度为597bp，指示rs16944的碱基位点c；条带3，长度为452bp，指示rs1800796的碱基位点c；条带4，长度为380bp，指示rs1800796的碱基位点g；条带5，长度为1800bp，指示rs4073的碱基位点t；条带6，长度为900bp，指示rs4073的碱基位点a；条带7，长度为1494bp，指示rs562047的碱基位点g；条带8，长度为1000bp，指示rs562047的碱基位点c；条带9，长度为497bp，指示rs562047的碱基位点c。

7、进一步地，说明书中还包括如下利用尘肺病易感基因snp模式图谱检测尘肺病易感基因的标准：若条带1和条带2中只存在条带1或同时存在条带1和条带2，则rs16944位点为尘肺病易感基因位点；若条带3和条带4中只存在条带4或同时存在条带3和条带4，则rs1800796位点为尘肺病易感基因位点；若条带5和条带6中只存在条带6或同时存在条带5和条带6，则rs4073位点为尘肺病易感基因位点；若条带7、条带8和条带9中只存在条带8、只存在条带9、同时存在条带8和条带9、或同时存在条带7、条带8和条带9，则rs562047位点为尘肺病易感基因位点。

8、为了实现上述目的，根据本发明的第二个方面，提供了一种利用上述的试剂盒进行尘肺病易感基因检测的方法。

9、进一步地，方法包括：针对待测样本dna，采用检测各尘肺病易感基因snp位点的引物对各尘肺病易感基因进行pcr扩增，获得各扩增产物；利用各snp位点对应的限制性内切酶对各扩增产物进行酶切，得到酶切产物；通过对各酶切产物进行电泳凝胶检测，获得待测样本dna的各snp点的电泳条带结果；将各snp点的电泳条带结果与检测标准进行比对，获得检测结果；其中，检测标准为上述的试剂盒中的标准。

10、进一步地，进行检测的样本包括人的组织液、组织物研磨液、血液、唾液、尿液或精液。

11、进一步地，进行检测的样本包括人的血清、细胞悬液或拭子处理液。

12、应用本发明的技术方案，利用本申请的试剂盒中的引物及相关限制性内切酶对snp位点rs16944、rs1800796、rs4073或rs562047中的一种或多种进行尘肺病易感基因位点的检测，通过rflp-pcr技术能够较快且准确的得到待测样本中是否存在尘肺病易感基因位点。

技术特征：

1.一种检测尘肺病易感基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述尘肺病易感基因snp位点为rs16944、rs1800796、rs4073及rs562047。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述限制性内切酶选自以下一种或多种：avai酶、brsbi酶、mfei酶或bsai酶。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：核酸免提取裂解液及限制性内切酶buffer。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括说明书，所述说明书包括尘肺病易感基因snp模式图谱；

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述说明书中还包括如下利用所述尘肺病易感基因snp模式图谱检测尘肺病易感基因的标准：

7.一种利用权利要求1-6中任一项所述的试剂盒进行尘肺病易感基因检测的方法。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，进行检测的样本包括人的组织液、组织物研磨液、血液、唾液、尿液或精液。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，进行检测的样本包括人的血清、细胞悬液或拭子处理液。

技术总结
本发明提供了一种检测尘肺病易感基因的试剂盒及其应用。其中，试剂盒包括：检测尘肺病易感基因SNP位点的引物及SNP位点对应的限制性内切酶；尘肺病易感基因SNP位点选自以下的一种或多种：rs16944、rs1800796、rs4073或rs562047；引物选自以下一种或多种：序列如SEQ ID NO：1‑8所示的引物。利用本申请的试剂盒中的引物及相关限制性内切酶对SNP位点rs16944、rs1800796、rs4073或rs562047中的一种或多种进行尘肺病易感基因位点的检测，通过RFLP‑PCR技术能够较快且准确的得到待测样本中是否存在尘肺病易感基因位点。

技术研发人员：王存飞,乔金林,陈亦然,王曙光
受保护的技术使用者：国能神东煤炭集团有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14