抗GPRC5D单克隆抗体及其用途的制作方法

背景技术：

1、g蛋白偶联受体c家族5组成员d(gprc5d)是g蛋白偶联受体家族的成员。gprc5d是一种跨膜蛋白。在多发性骨髓瘤患者中观察到gprc5d的过表达。特别是，其高表达与疾病和治疗的不良结果具有显著相关性。

2、鉴于其在恶性细胞上的特异性高表达，已提出对gprc5d特异性的抗体可以用于治疗恶性肿瘤，例如通过双特异性t细胞重定向抗体或通过抗体依赖性细胞毒性(adcc)。

技术实现思路

1、在本文中发现了对人gprc5d蛋白具有高亲和力的抗gprc5d抗体，包括其人源化衍生物。该抗体或其片段能够靶向表达gprc5d的癌细胞，因此可以用于治疗癌症，特别是血液癌症。

2、本公开的一个实施方案提供了一种对人g蛋白偶联受体c家族5组成员d(gprc5d)蛋白具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段包含重链可变区(vh)以及轻链可变区(vl)，所述重链可变区(vh)包含重链互补决定区cdrh1、cdrh2和cdrh3，所述轻链可变区(vl)包含互补决定区cdrl1、cdrl2和cdrl3。在一些实施方案中，cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3分别包含：(a)seq id no:29-34的氨基酸序列；(b)seq id no:42-47的氨基酸序列；(c)seq id no:54-59的氨基酸序列；或(d)seq id no:68-73的氨基酸序列。

3、在一些实施方案中，cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3分别包含seq idno:29-34的氨基酸序列。在一些实施方案中，vh包含选自由seq id no:7和35-37组成的组的氨基酸序列，vl包含选自由seq id no:8和38-41组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，vh包含seq id no:35的氨基酸序列，vl包含seq id no:38的氨基酸序列。

4、在一些实施方案中，cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3分别包含seq idno:42-47的氨基酸序列。在一些实施方案中，vh包含选自由seq id no:9和48-50组成的组的氨基酸序列，vl包含选自由seq id no:10和51-53组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，vh包含seq id no:48的氨基酸序列，vl包含seq id no:51的氨基酸序列。

5、在一些实施方案中，cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3分别包含seq idno:54-59的氨基酸序列。在一些实施方案中，vh包含选自由seq id no:61-64组成的组的氨基酸序列，vl包含选自由seq id no:16和65-67组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，vh包含seq id no:61的氨基酸序列，vl包含seq id no:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，vh包含seq id no:63的氨基酸序列，vl包含seq id no:65的氨基酸序列。

6、在一些实施方案中，cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3分别包含seq idno:68-73的氨基酸序列。在一些实施方案中，vh包含选自由seq id no:1和74-79组成的组的氨基酸序列，vl包含选自由seq id no:2和80-86组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，vh包含seq id no:76的氨基酸序列，vl包含seq id no:82的氨基酸序列。在一些实施方案中，vh包含seq id no:77的氨基酸序列，vl包含seq id no:82的氨基酸序列。

7、在一些实施方案中，所述抗体或其片段是人源化的。在一些实施方案中，所述抗体或其片段具有adcc能力。

8、在一些实施方案中，还提供了一种抗体或其片段，所述抗体或其片段进一步包含与所述抗体或其片段缀合的细胞毒性药物。

9、还提供了一种双特异性抗体，其包含本公开的抗原结合片段，以及对第二靶蛋白具有特异性的第二抗原结合片段。在一些实施方案中，第二靶蛋白选自由cd3、cd16、cd19、cd28、cd64和4-1bb组成的组。在一些实施方案中，第二靶蛋白是cd3。在一些实施方案中，第二靶蛋白是4-1bb。

10、还提供了一种治疗有需要的患者的癌症的方法，包括向所述患者施用本公开的抗体或其片段。还提供了一种治疗有需要的患者的癌症的方法，包括(a)用本公开的抗体或其片段在体外处理t细胞、自然杀伤(nk)细胞或巨噬细胞，(b)将处理过的细胞施用于患者。

11、在一些实施方案中，所述癌症是血液癌症，比如表达gprc5d的b细胞癌(例如，多发性骨髓瘤)。

1.一种对人g蛋白偶联受体c家族5组成员d(gprc5d)蛋白具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段包含重链可变区(vh)以及轻链可变区(vl)，所述重链可变区(vh)包含重链互补决定区cdrh1、cdrh2和cdrh3，所述轻链可变区(vl)包含互补决定区cdrl1、cdrl2和cdrl3，其中所述cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3分别包含：

2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3分别包含seq id no:42-47的氨基酸序列。

3.根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述vh包含选自由seq id no:9和48-50组成的组的氨基酸序列，所述vl包含选自由seq id no:10和51-53组成的组的氨基酸序列。

4.根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述vh包含seq id no:48的氨基酸序列，所述vl包含seq id no:51的氨基酸序列。

5.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3分别包含seq id no:29-34的氨基酸序列。

6.根据权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述vh包含选自由seq id no:7和35-37组成的组的氨基酸序列，所述vl包含选自由seq id no:8和38-41组成的组的氨基酸序列。

7.根据权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述vh包含seq id no:35的氨基酸序列，所述vl包含seq id no:38的氨基酸序列。

8.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3分别包含seq id no:54-59的氨基酸序列。

9.根据权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述vh包含选自由seq id no:61-64组成的组的氨基酸序列，所述vl包含选自由seq id no:16和65-67组成的组的氨基酸序列。

10.根据权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述vh包含seq id no:61的氨基酸序列，所述vl包含seq id no:65的氨基酸序列。

11.根据权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述vh包含seq id no:63的氨基酸序列，所述vl包含seq id no:65的氨基酸序列。

12.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述cdrh1、cdrh2、cdrh3、cdrl1、cdrl2和cdrl3分别包含seq id no:68-73的氨基酸序列。

13.根据权利要求12所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述vh包含选自由seq idno:1和74-79组成的组的氨基酸序列，所述vl包含选自由seq id no:2和80-86组成的组的氨基酸序列。

14.根据权利要求12所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述vh包含seq id no:76的氨基酸序列，所述vl包含seq id no:82的氨基酸序列。

15.根据权利要求12所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述vh包含seq id no:77的氨基酸序列，所述vl包含seq id no:82的氨基酸序列。

16.根据权利要求1-15任一项所述的抗体或其片段，其是人源化的。

17.根据权利要求1-16任一项所述的抗体或其片段，其具有adcc能力。

18.根据权利要求1-16任一项所述的抗体或其片段，进一步包含与所述抗体或其片段缀合的细胞毒性药物。

19.一种双特异性抗体，包含权利要求1-16任一项所述的抗原结合片段，以及对第二靶蛋白具有特异性的第二抗原结合片段。

20.根据权利要求19所述的双特异性抗体，其中所述第二靶蛋白选自由cd3、cd16、cd19、cd28、cd64和4-1bb组成的组。

21.根据权利要求19所述的双特异性抗体，其中所述第二靶蛋白是cd3。

22.一种治疗有需要的患者的癌症的方法，包括向所述患者施用权利要求1-21任一项所述的抗体或其片段。

23.一种治疗有需要的患者的癌症的方法，包括(a)用权利要求1-21任一项所述的抗体或其片段体外处理t细胞、自然杀伤(nk)细胞或巨噬细胞，(b)将所述处理过的细胞施用于所述患者。

24.根据权利要求23所述的方法，进一步包括，在步骤(a)之前，从个体分离所述t细胞、所述nk细胞或所述巨噬细胞。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述t细胞、所述nk细胞或所述巨噬细胞从所述患者中分离。

26.根据权利要求23所述的方法，其中所述t细胞是肿瘤浸润性t淋巴细胞、cd4+t细胞、cd8+t细胞或其组合。

27.根据权利要求22-26任一项所述的方法，其中所述癌症是血液癌症。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述血液癌症是表达gprc5d的b细胞癌。

29.根据权利要求28所述的方法，其中所述表达gprc5d的b细胞癌是多发性骨髓瘤。