用于检测CAEBV和IM宿主差异甲基化基因的物质、试剂盒及其应用

本发明涉及一种用于鉴别甲基化差异的引物组和试剂盒，具体地说是一种用于鉴别慢性活动性eb病毒感染和传染性单核细胞增多症宿主差异甲基化基因的引物组、试剂盒及其应用，属于生物。

背景技术：

1、eb病毒(epstein-barr virus，简称为ebv)为疱疹病毒科γ疱疹病毒亚科成员，是一种嗜人类淋巴细胞病毒，广泛分布于世界各地，全球范围内约90％以上的健康成人携带该病毒。eb病毒在口咽部上皮细胞内增殖，然后感染b淋巴细胞，这些细胞大量进入血液循环而造成全身性感染，并可长期潜伏在人体淋巴组织中。ebv感染可表现为增殖性感染和潜伏性感染。不同感染状态表达不同的抗原，增殖性感染期表达的抗原有ebv早期抗原、ebv衣壳蛋白和ebv膜抗原，潜伏感染期表达的抗原有ebv核抗原和潜伏膜蛋白。ebv与多种人类淋巴细胞性和上皮细胞性肿瘤的发生发展有关，如霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌和ebv相关胃癌等，是公认的dna肿瘤病毒。

2、ebv是传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis，简称为im)和慢性活动性ebv感染(chronic active ebv infection，简称为caebv)的病原体。im是一种急性淋巴组织增生性疾病，多见于青春期初次感染ebv后发病，其临床表现为发热、咽炎、淋巴结炎、脾大、肝功能异常、外周血中单核细胞和异型淋巴细胞大量增多。caebv是一种ebv感染b淋巴细胞及t淋巴细胞所致的一种淋巴细胞增殖性疾病。caebv通常继发于原发性ebv感染后，以发热、淋巴结病和脾肿大为主要特征。实验室检查可发现高拷贝数ebv-dna和/或异常的ebv相关抗体，病理学检查可以在受损组织内检测到ebv编码的rna和多种病毒相关蛋白，研究发现，尽早地为患者进行异基因造血干细胞移植是治愈该病的有效方法。

3、研究发现，表观遗传学修饰尤其是dna甲基化修饰在ebv感染相关疾病中发挥着重要的作用。ebv感染宿主细胞后，ebv病毒基因可能通过甲基转移酶调控宿主基因dna甲基化水平，从而参与ebv致病过程。不同ebv相关疾病中宿主基因组甲基化特征不同，因此可通过检测宿主中差异dna甲基化基因来对相应疾病进行识别和诊断，目前宿主基因组dna甲基化的改变在慢性活动性ebv感染(caebv)和传染性单核细胞增多症(im)的发生和发展中所发挥的潜在作用还尚未被研究。比较caebv与im之间宿主基因组中差异甲基化基因，从而筛选可用于临床诊断及预后的dna甲基化biomarker，并通过pathway通路分析，可进一步揭示甲基化在该疾病发生发展的机制，并作为疾病早期检测和诊断的依据具有重要的意义。

技术实现思路

1、本发明所要解决的首要技术问题在于提供一种检测待测样品人基因组中相关位点甲基化水平的物质在鉴定或辅助鉴定慢性活动性eb病毒感染和传染性单核细胞增多症中的新用途。

2、本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述检测位点的检测引物组。

3、为实现上述技术目的，本发明采用以下的技术方案：

4、检测待测样品基因组中cyfip1、ptpn6、lhpp、e2f1和rap1gap2位点甲基化水平的物质在制备鉴定或辅助鉴定慢性活动性eb病毒感染和传染性单核细胞增多症产品中的应用。

5、其中较优地，所述物质为引物组。

6、其中较优地，所述引物组选自由seq id no.1和seq id no.2的引物对、seq idno.3和seq id no.4的引物对、seq id no.5和seq id no.6的引物对、seq id no.7和seqid no.8的引物对以及seq id no.9和seq id no.10的引物对组成的引物组。

7、一种用于检测慢性活动性eb病毒感染和传染性单核细胞增多症的宿主差异甲基化基因的引物组，所述引物组用于检测甲基化位点为人基因组的cyfip1、ptpn6、lhpp、e2f1和rap1gap2位点的甲基化水平。

8、其中较优地，所述引物组选自由seq id no.1和seq id no.2的引物对、seq idno.3和seq id no.4的引物对、seq id no.5和seq id no.6的引物对、seq id no.7和seqid no.8的引物对以及seq id no.9和seq id no.10的引物对组成的引物组。

9、上述引物组在检测或辅助检测慢性活动性eb病毒感染和传染性单核细胞增多症的宿主差异甲基化水平的检测试剂或检测试剂盒中的用途。

10、一种用于检测慢性活动性eb病毒感染和传染性单核细胞增多症的宿主差异甲基化基因的试剂盒，其中包括上述的引物组。

11、与现有技术相比较，本发明具有以下的技术效果：

12、(1)本发明经过对筛选方法的优化改进，筛选得到了稳定性强特异性显著的caebv和im之间宿主差异甲基化位点。

13、(2)本发明提供了位于人基因组上的5个基因差异甲基化位点，由ebv感染引起的上述基因差异甲基化位点发生改变与caebv相关，可以通过检测上述人基因组差异甲基化位点的改变进行caebv的早期诊断。

14、(3)本发明提供的五个caebv和im之间差异甲基化位点，该五个位点特异性佳，稳定性优异，选人基因组的cyfip1(chr15 22992841–22992940bp)、ptpn6(chr12 7063598–7063888bp)、lhpp(chr 15 126300842–126301818bp)、e2f1(chr20 32267678–32267721bp)和rap1gap2(chr 172696550–2696769bp)处，可以进一步检测上述差异甲基化位点的改变进行caebv与im的早期鉴别。

15、(4)本发明提供差异甲基化位点的检测引物，可以通过所述引物对其序列进行pcr扩增及焦磷酸测序检测，检测相应基因甲基化水平，从而进行caebv与im的早期鉴别。

技术特征：

1.检测待测样品基因组中cyfip1、ptpn6、lhpp、e2f1和rap1gap2位点甲基化水平的物质在制备鉴定或辅助鉴定慢性活动性eb病毒感染和传染性单核细胞增多症产品中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：

4.一种用于检测慢性活动性eb病毒感染和传染性单核细胞增多症的宿主差异甲基化基因的引物组，其特征在于：

5.如权利要求4所述的引物组，其特征在于：

6.权利要求4或5所述的引物组在检测或辅助检测慢性活动性eb病毒感染和传染性单核细胞增多症的宿主差异甲基化水平的检测试剂或检测试剂盒中的用途。

7.一种用于检测慢性活动性eb病毒感染和传染性单核细胞增多症的宿主差异甲基化基因的试剂盒，其特征在于：

技术总结
本发明公开了检测待测样品基因组中CYFIP1、PTPN6、LHPP、E2F1和RAP1GAP2位点甲基化水平的物质在制备鉴定或辅助鉴定慢性活动性EB病毒感染和传染性单核细胞增多症产品中的应用。本发明提供了位于人基因组上的上述5个基因差异甲基化位点，由EBV感染引起的上述基因差异甲基化位点发生改变与CAEBV相关，可以通过检测上述人基因组差异甲基化位点的改变进行CAEBV的早期诊断。

技术研发人员：谢正德,王然,张林琳,艾军红,张萌
受保护的技术使用者：首都医科大学附属北京儿童医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15