一种银耳多糖及其应用

本发明属于多糖，具体涉及一种银耳多糖及其应用。

背景技术：

1、近年来，人民的生活水平不断提高，人们对美好生活有了更高的要求，女性对皮肤保养也越发注重，在市场需求的推动下，护肤品行业愈发聚焦于抗衰老、美白等功效。据研究表明多糖因具有良好的抗氧化、美白、吸湿、保湿等生物活性，常作为具有护肤功效物质而被添加在护肤品中。

2、银耳多糖是一种具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降血压、降血脂、增强免疫等功能，且较为安全的天然活性成分。银耳多糖可广泛用于医疗、保健、食品加工、护肤美容、畜牧养殖等多方面领域。而且原材料来源广泛，可以为银耳多糖带来更大的应用空间，对进一步研究银耳多糖的理化性质和生物活性具有重要意义。随着多糖生物活性的开发，越来越多的研究致力于多糖对皮肤保湿、抗老化或美白作用。但关于银耳多糖的研究，大多数研究停留在多糖提取工艺优化、结构表征、抗氧化、抗癌、降血脂、降血糖以及增强机体免疫活性等方面，对于银耳多糖的护肤活性研究较少或不够深入。

3、申请号为cn201410475033.1的中国专利公开了一种银耳功能性多糖的制备方法及其应用，其以市售银耳为原料，所述制备方法包括步骤：混合、水提、碱提、透析、浓缩、沉淀、润洗和干燥，其最大程度地提高了银耳多糖的得率，而根据该方法制备而得的银耳多糖能够保持较高的抗氧化活性，可以应用于抗氧化食品和药物中。该方法也仅仅提及了银耳多糖在抗氧化物食品和药物中的应用。还有申请号为cn201910829061.1的中国专利公开了一种银耳功能性成分的提取方法，采用乙醇水溶液对银耳进行浸提、离心、浓缩、干燥得到类黄酮化合物；离心后得到的银耳滤渣通过酶解、过滤，得到含有少量小分子多糖、蛋白质和聚乙酰氨基葡萄糖的混合液，以及破壁过的银耳渣。将银耳渣经缓冲水溶液重复浸提两次、过滤，滤液经复合酶作用，除去蛋白质，通过半透膜除去无机盐，超滤膜浓缩，料液分次醇沉，分别得到聚乙酰氨基葡萄糖和银耳多糖。文本中提及该工艺工艺简单，主要采用生物酶作用技术，工艺条件温和，分段提取得到类黄酮化合物、聚乙酰氨基葡萄糖、银耳多糖，所得银耳功能性成分种类多、应用范围广，充分有效地利用了银耳，有利于银耳这一资源的充分开发。其中提及的应用也是泛泛而谈，并未具体提及具体应用以及效果如何。

4、因此，研究开发银耳多糖的更多特性，拓宽银耳多糖的应用领域，为银耳资源的开发利用程度提供帮助非常有必要。

技术实现思路

1、本发明旨在解决上述技术问题，提供一种银耳多糖，其在制备护肤品、抑制黑色素瘤生长药物中的应用，有较好的功效。

2、本发明的技术方案为：

3、一种银耳多糖，其结构式为：

4、

5、本发明的银耳多糖的制备方法，包括以下步骤：

6、(1)将干制的银耳子实体粉碎后过60目筛，得到银耳干粉；将银耳干粉与蒸馏水按料液比1∶60g/ml(m/v)的比例搅拌均匀，加热煮沸2h得到多糖粗提液；待粗提液冷却至室温后，以5000r/min的转速离心5min，取上清液旋转蒸发至原上清液体积的1/10；后于浓缩液中加入其体积4倍体积浓度为95％乙醇溶液，搅拌5min后于4℃静置12h，沉淀冻干后得到银耳粗多糖ctp(其提取率为14.27％，总糖含量为82.19％，蛋白质含量为3.36％)；

7、(2)再将粗多糖ctp与蒸馏水按料液比1∶30g/ml(m/v)的比例复溶，并于复溶液中加入其重量10％的质量浓度为10％的tca(三氯乙酸法)溶液，调节ph值至2.5，最后将其置于4℃环境下，静置12h，使得蛋白质析出；然后，将溶液以5000r/min的转速离心10min，除去蛋白质沉淀，取上清液备用；往上清液中加入其1/4体积的ab-8大孔树脂，并置于50℃电磁搅拌器中，以1000r/min的速度搅拌2h进行脱色；脱色结束后进行抽滤，除去大孔树脂，上清液于8000-14000da的透析袋4℃透析3d，每隔6h换一次水；将透析后的上清液浓缩、醇沉、冻干后得到银耳精多糖rtp；

8、(3)将精多糖多糖rtp配制成5mg/ml的多糖溶液，过0.45μm的水性滤膜后使用离子交换柱对其进行分离，填料为deae-52纤维素，填料要先用蒸馏水浸泡后进行酸洗，再进行碱洗后进行装柱，后用超纯水洗至中性；先用超纯水按洗脱流速平衡好填料与洗脱液的接触面；以超纯水以及0.1m、0.3m、0.5m的nacl溶液作为流动相进行梯度洗脱，流速为1.5ml/min，每管10ml，使用自动部分收集器收集洗脱液，用苯酚-硫酸法测定洗脱液糖含量，绘制对应的洗脱曲线，合并同一洗脱峰下的各管洗脱液，用蒸馏水透析3d，浓缩、冻干后得到单一洗脱峰的多糖样品；

9、(4)将deae-52纤维素柱层析分离得到的单一洗脱峰组分，以超纯水复溶为5mg/ml的多糖样液，并过0.45μm的水性滤膜；在490nm处用苯酚-硫酸法测量每根管的吸光度，并绘制了洗脱曲线，如图1所示，得到了一个唯一的洗脱峰，洗脱液浓度为0.5m nacl溶液，将该峰下收集的洗脱液合并，浓缩、透析、冷冻干燥后获得分离纯化的银耳多糖tp组分；将deae-52纤维素柱层析得到的单一洗脱峰银耳多糖tp组分继续以sephadex g-200凝胶过滤柱洗脱，用0.5m的nacl溶液以0.5ml/min的流速连续洗脱；收集每根管20min；同样，对单一洗脱峰组分进行合并收集洗脱液，透析、冻干后得到银耳均一多糖tp1组分(其分子量568385da，总糖含量为86.38％，糖醛酸含量为34.35％)。

10、本发明还提供所述银耳多糖在制备护肤品中的应用，优选地，本发明所述银耳多糖在制备具有美白活性和/或抑制弹性蛋白酶活性功能护肤品中的应用。通过酪氨酸酶抑制实验，银耳多糖展现出良好的酪氨酸酶抑制活性，表明银耳多糖是具有美白作用潜质的生物大分子原料。在弹性蛋白酶抑制实验中，银耳多糖也展现出了较强的抑制能力。

11、本发明还提供所述银耳多糖在制备抑制黑色素瘤细胞生成和/或生长药物中的应用，所述黑色素瘤的细胞包括黑色素瘤细胞b16-f10，本发明所述银耳多糖还提供在制备抑制黑色素瘤细胞内黑色素的生成药物中的应用，本发明还提供所述银耳多糖在制备抑制黑色素瘤细胞内酪氨酸酶活性药物中的应用。通过试验，在探究银耳多糖对黑色素瘤细胞的影响中，申请人发现，银耳多糖不会对b16-f10细胞的生长形态产生影响，且对b16-f10细胞的增殖具有显著效果，进一步的实验同样表明，银耳多糖对b16-f10细胞内黑色素的生成具有抑制作用，对b16-f10细胞内的酪氨酸酶活性具有明显抑制效果。

12、由于采用上述技术方案，本发明的有益效果为：

13、本发明的银耳多糖可以用来制备护肤品，具有美白等良好功效，还能够抑制黑色素瘤生长，抑制黑色素瘤内黑色素的生成，可以用来制备抑制黑色素瘤生长药物，有利于银耳多糖在护肤领域产品的开发，拓宽银耳多糖的应用领域，为银耳资源的开发利用程度提供帮助。

技术特征：

1.一种银耳多糖，其特征在于，其结构式为：

2.如权利要求1所述银耳多糖在制备护肤品中的应用。

3.如权利要求1所述银耳多糖在制备具有美白活性和/或抑制弹性蛋白酶活性功能护肤品中的应用。

4.如权利要求1所述银耳多糖在制备抑制黑色素瘤生成和/或生长药物中的应用。

5.如权利要求4的应用，其特征在于，所述黑色素瘤的细胞包括黑色素瘤细胞b16-f10。

6.如权利要求4所述银耳多糖在制备抑制黑色素瘤细胞内黑色素的生成药物中的应用。

7.如权利要求4所述银耳多糖在制备抑制黑色素瘤细胞内酪氨酸酶活性药物中的应用。

技术总结
本发明属于多糖技术领域，具体涉及一种银耳多糖，其结构式为：本发明还提供了所述银耳多糖在制备护肤品中的应用、在制备抑制黑色素瘤生成和/或生长药物中的应用等。本发明的银耳多糖具有较好的美白活性和/或抑制弹性蛋白酶活性，能够在护肤品中应用，还能够抑制黑色素瘤生长，可用来制备药物。

技术研发人员：何雪梅,尹可宏,唐雅园,孙健,张雪春,王振兴,陈茜,韦珍
受保护的技术使用者：广西壮族自治区农业科学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14