本发明属于生物，具体涉及使用固定化金属离子亲和层析联合通过磁性微球sumo酶切割移除标签获得融合蛋白的生物学方法。
背景技术：
1、蛋白在现今的新药开发、疾病检测、蛋白质组学研究和酶与底物反应等生命科学的多个领域广泛应用。
2、对于重组蛋白的生产所应用的表达系统可以为细菌、酵母、动物细胞、植物细胞等。有原核蛋白表达系统既是最常用的表达系统，也是最经济实惠的蛋白表达系统。酵母蛋白表达系统以甲醇毕赤酵母为代表，具有表达量高，可诱导，糖基化机制接近高等真核生物等优点。哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统主要优点是蛋白翻译后加工机制最接近体内的天然形式，最容易保留生物活性。
3、当蛋白应用于人体时，为保证药物使用的安全性，每种药物必须满足相应的质量管理标准（sfda，state food and drug administration），例如会引起危害的宿主细胞蛋白、宿主细胞核酸、内毒素和病毒等必须被去除。一步或多步纯化步骤应用于蛋白的纯化，以满足产品的质量需求。
4、目前广泛应用于蛋白纯化的方法有：金属离子螯合亲和层析(例如ni亲和层析)，亲和层析(例如蛋白a亲和层析)，离子交换层析(例如阳离子交换，阴离子交换)和混合模式离子交换，疏水相互作用，尺寸排阻层析。
5、传统的酶切方法是先使用含咪唑、还原型谷胱甘肽的洗脱液洗脱结合在金属离子螯合亲和层析柱上带ni和gst标签的重组蛋白，然后将洗脱的带ni和gst标签的重组蛋白样品置换到适合酶切的缓冲溶液中，再加入sumo酶进行酶切反应，最后再将进一步将酶切后的融合蛋白和标签通过金属离子螯合亲和层析柱进行分离。所以需要一种能够减少环境污染，操作简单、经济高效的的融合蛋白纯化和生产的操作方法。
技术实现思路
1、本发明旨在解决上述缺陷，提供一种磁性微球进行sumo酶切割的方法，利用sumo酶直接在磁性微球上酶切的方法，将融合蛋白从连接的标签上切除，然后回收融合蛋白的方法。
2、为了克服背景技术中存在的缺陷，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：这种磁性微球进行sumo酶切割的方法，通过在磁性微球上，从介于所述标签和所述融合蛋白之间的蛋白酶切割位点进行磁性微球sumo酶切割生产融合蛋白的方法，该方法包括：
3、s1、his标签蛋白纯化磁性微球和带标签的融合蛋白置于反应容器内，得到结合了带his标签的融合蛋白的磁性微球；
4、s2、用10倍his标签蛋白纯化磁性微球体积的洗杂缓冲液充分清洗步骤s1得到的结合了带his标签的融合蛋白的磁性微球；
5、s3、配制每40ng的sumo酶需要用1ml酶切缓冲液溶解，把配制好的sumo酶加到步骤s2得到的清洗完的结合了带his标签的融合蛋白的磁性微球中，轻轻混匀、并轻轻震荡反应过夜；
6、s4、用磁棒吸附步骤s3中的结合了带his标签的融合蛋白的磁性微球10min后，收集含酶切去除了标签的融合蛋白液；
7、s5、将步骤s4中用磁棒吸附的磁性微球再次通过少量缓冲液进行冲洗，获得更多的融合蛋白液。
8、根据本发明的另一个实施例，进一步包括所示步骤s1中带标签的融合蛋白与磁性微球的结合时间为5-15分钟。
9、根据本发明的另一个实施例，进一步包括所述步骤s2中洗杂缓冲液选自磷酸或其盐或三（羟基甲）氨基甲烷（tris）或其盐。
10、根据本发明的另一个实施例，进一步包括所述步骤s3中轻轻震荡反应过夜的反应条件为在2-50℃温度下酶切10-16小时。
11、根据本发明的另一个实施例，进一步包括所述步骤s3中sumo蛋白酶指源自大肠杆菌的蛋白酶。
12、根据本发明的另一个实施例，进一步包括所述带标签的融合蛋白内含有未加抑制剂、1 mm edta、10 mm edta、50 mm edta、100 mm edta、1 mm pmsf、5 mm pmsf或者10 mmpmsf不同浓度抑制剂。
13、根据本发明的另一个实施例，进一步包括所述步骤s5中少量缓冲液为带咪唑的洗脱液。
14、根据本发明的另一个实施例，进一步包括所述步骤s1中的反应容器为通量纯化仪内的深孔板孔或者离心管磁力架。
15、根据本发明的另一个实施例，进一步包括所述步骤s4中的磁棒上套设磁棒套，磁性微球通过磁棒的吸力使其吸附于磁棒套的下顶端。在使用过程中，首先在磁棒上套设磁棒套，磁棒和磁棒套在深孔板中缓慢地上下移动，将磁珠收集到磁棒套的下顶端。磁棒和磁棒套结合磁珠后，从深孔板中提起，然后转移到下一个深孔板中，磁棒脱离磁棒套，随后磁珠掉落。
16、本发明的有益效果是：这种磁性微球进行sumo酶切割纯化融合蛋白的方法能够快速的去除标签，获得融合蛋白；操作简单，适合工业化大规模生产，减少了环境污染，适用于生物技术领域，用于标签蛋白的标签去除和融合蛋白的纯化；
17、能够将纯化融合的蛋白的时间大大缩短，从原先的步骤：样品破碎、上样、洗杂、洗脱、透析、酶切、去除标签纯化，省去其中的洗脱、透析和去除标签纯化，总时长上可节约至少8 h。且省去的步骤中的洗脱和透析都需要试剂，这部分的试剂配制不仅节约了时间，更节约了成本。
1.一种磁性微球进行sumo酶切割的方法，其特征在于，该方法包括：
2.如权利要求1所述的磁性微球进行sumo酶切割的方法，其特征在于：所示步骤s1中带标签的融合蛋白与磁性微球的结合时间为5-15分钟。
3.如权利要求1所述的磁性微球进行sumo酶切割的方法，其特征在于：所述步骤s2中洗杂缓冲液选自磷酸或其盐或三（羟基甲）氨基甲烷（tris）或其盐。
4.如权利要求1所述磁性微球进行sumo酶切割的方法，其特征在于：所述步骤s3中轻轻震荡反应过夜的反应条件为在2-50℃温度下酶切10-16小时。
5.如权利要求1所述的磁性微球进行sumo酶切割的方法，其特征在于：所述步骤s3中sumo酶指源自大肠杆菌的蛋白酶。
6.如权利要求1所述的磁性微球进行sumo酶切割的方法，其特征在于：所述带标签的融合蛋白内含有未加抑制剂、1 mm edta、10 mm edta、50 mm edta、100 mm edta、1 mm pmsf、5 mm pmsf或者10 mm pmsf的不同浓度抑制剂。
7.如权利要求1所述的磁性微球进行sumo酶切割的方法，其特征在于：所述步骤s5中少量缓冲液为带咪唑的洗脱液。
8.如权利要求1所述的磁性微球进行sumo酶切割的方法，其特征在于：所述步骤s1中的反应容器为通量纯化仪内的深孔板孔或者离心管磁力架。
9.如权利要求1所述的磁性微球进行sumo酶切割的方法，其特征在于：所述步骤s4中的磁棒上套设磁棒套，磁性微球通过磁棒吸附于磁棒套下顶端。