蛋白包裹自复制RNA及其制备方法与流程

本发明涉及生物领域，具体地，本发明涉及蛋白包裹自复制rna及其制备方法。

背景技术：

1、近年来基于mrna药物或mrna疫苗的开发成为人们关注的热点之一。然而，传统mrna不是很稳定，在细胞内几天内就会降解，导致不可持续的蛋白质表达水平。如果长期用于疾病治疗，可能需要患者注射大量的mrna，这可能会增加mrna治疗的毒副作用。

2、自复制rna分子可以在细胞质内进行自我复制，因此可以在很低的剂量下达到不低于传统mrna的蛋白表达水平，并且可以在一定时间内长效表达蛋白质，从而展现出比mrna更有前景的技术优势。

3、然而，针对rna分子，目前缺乏有效的递送手段，这极大地限制了自复制rna分子技术的应用。

技术实现思路

1、本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。

2、在本发明的一个方面，本发明提出了一种重组细胞。根据本发明的实施例，所述重组细胞包括：第一核酸分子，所述第一核酸分子包括自复制rna分子；第二核酸分子，所述第二核酸分子编码递送载体蛋白。

3、为了实现自复制rna分子进入细胞且稳定存在于细胞内，将其承载在递送载体上，递送载体可以携带自复制rna分子进入细胞内。

4、通过将包括自复制rna分子的第一核酸分子和编码递送载体蛋白的第二核酸分子以重组细胞的形式提供，由第二核酸分子编码表达的递送载体蛋白能够在细胞中自组装以包裹自复制rna分子，以此细胞株生产的包裹自复制rna分子的递送载体可以实现自复制rna分子的体内递送，有助于实现细胞内rna自复制，维持长效的高蛋白水平，更好地发挥作用效果。

5、在本发明的另一方面，本发明提出了一种制备前面所述重组细胞的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：使细胞携带第一核酸分子和第二核酸分子，所述第一核酸分子和第二核酸分子是如前面所述重组细胞中所限定的。

6、在本发明的又一方面，本发明提出了一种制备自复制rna分子组合物的方法。根据本发明的实施例，所述自复制rna分子包括自复制rna和递送载体蛋白，所述方法包括：培养前面所述的重组细胞；和获取所述自复制rna分子组合物。

7、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

技术特征：

1.一种重组细胞，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的重组细胞，其特征在于，所述自复制rna分子包括：

3.根据权利要求2所述的重组细胞，其特征在于，所述n蛋白、所述p蛋白、所述l蛋白的至少之一分别独立地来自弹状病毒科病毒。

4.根据权利要求2所述的重组细胞，其特征在于，所述n蛋白具有seq id no：1所示氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列，所述p蛋白具有seq id no：2所示氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列，所述l蛋白具有seq id no：3所示氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。

5.根据权利要求1所述的重组细胞，其特征在于，所述递送载体蛋白包括非人源蛋白和人源蛋白；

6.根据权利要求1所述的重组细胞，其特征在于，所述递送载体蛋白选自水疱性口炎病毒受体和/或淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒外壳蛋白。

7.根据权利要求1所述的重组细胞，其特征在于，所述第一核酸分子和所述第二核酸分子分别独立地以游离形式或者整合至基因组的形式存在于所述重组细胞中。

8.根据权利要求1所述的重组细胞，其特征在于，所述第一核酸分子和所述第二核酸分子分别独立地以质粒的形式存在于所述重组细胞中。

9.根据权利要求8所述的重组细胞，其特征在于，所述第一核酸分子和所述第二核酸分子存在于同一质粒上。

10.一种制备权利要求1～9任一项所述重组细胞的方法，其特征在于，包括：

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，包括：

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述引入是通过将所述质粒采用转染方式进行的。

13.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述第二核酸分子是以慢病毒或crispr/cas9的形式提供。

14.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述细胞选自hek 293细胞系、vero细胞系、cho-k1细胞或nih-3t3细胞。

15.一种制备自复制rna分子组合物的方法，其特征在于，所述自复制rna分子包括自复制rna和递送载体蛋白，所述方法包括：

技术总结
本发明提出了蛋白包裹自复制RNA及其制备方法，所述蛋白包裹自复制RNA是通过培养重组细胞获得的，所述重组细胞包括：第一核酸分子，所述第一核酸分子包括自复制RNA分子；第二核酸分子，所述第二核酸分子编码递送载体蛋白。由第二核酸分子编码表达的递送载体蛋白能够在细胞中自组装以包裹自复制RNA分子，由此可以实现自复制RNA分子的体内递送。

技术研发人员：吴可行
受保护的技术使用者：上海行深生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16