一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒及其制备方法与应用

本发明属于生物制备，尤其涉及一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒及其制备方法与应用。

背景技术：

1、类外泌体样纳米颗粒(exosome-like nanoparticles，elns)是细胞所分泌的纳米级小泡，双层磷脂包围的囊泡状结构，携带独特的生物活性物质(如脂质、蛋白质、mirnas和次级代谢物等)。植物elns中蛋白含量丰富，多数为膜蛋白，可维持elns结构的稳定以及作为生物活性成分发挥作用。植物elns通常为可食用植物分泌的，具有安全可靠、副作用小的优点，还可作为药物载体。

2、目前，大量药食同源的植物被广泛用于各种疾病的治疗，而从这些植物中分离出的多糖、多酚等物质被视为治疗疾病的主要功能成分。近年来研究表明，植物中除了上述化学成分外，自身能够分泌elns。其中，软枣猕猴桃(actinidia arguta)，别名软枣子、奇异莓等，是猕猴桃科的一种多年生落叶藤本植物，其果实较小，皮薄无毛。果实中含有叶黄素、黄酮、多酚、天然肌醇和矿物质(p、ca、fe、zn等)等，具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、降低胆固醇、调节记忆力、抗糖尿病、抗过敏和抗疲劳等功能。因此，软枣猕猴桃是一种价值高、用途广、具有广阔发展前景的果实，但关于软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒(actinidia argutaexosome-like nanoparticles，aaelns)的制备和功能作用研究暂无报道。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒及其制备方法与应用，该方法制备得到的软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒结构完整、稳定性好，还具有显著的抗氧化活性。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

3、本发明提供了一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

4、将软枣猕猴桃果实的汁液进行3500～4500g离心5～15min取上清液a、上清液a6500～7500g离心15～25min取上清液b、上清液b 9500～10500g离心25～35min取上清液c、上清液c 119000～121000g离心65～75min取沉淀1，将沉淀1用无菌pbs缓冲液吹打重悬得到重悬液1，重悬液1119000～121000g离心65～75min得到沉淀2，pbs缓冲液重悬沉淀2，即得软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒。

5、优选的，所述离心的温度为2～6℃。

6、优选的，所述软枣猕猴桃果实的汁液的制备包括将软枣猕猴桃果实研磨得到。

7、本发明还提供了上述制备方法制备得到的软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒。

8、优选的，所述软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒的平均粒径为157.8nm，zeta电位为-23.07mv。

9、本发明还提供了一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒在制备抗氧化产品中的应用。

10、优选的，所述软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒具有清除abts+·和/或dpph·的活性。

11、本发明还提供了一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒在制备抗氧化损伤产品中的应用。

12、优选的，所述氧化损伤为h2o2所致的氧化损伤。

13、优选的，所述产品提高gsh-px和t-sod的活力，降低mda的含量。

14、相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：

15、本发明提供了一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒及其制备方法与应用，本发明采用超高速梯度离心的方法制备软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒，该方法操作简单、快速，制备得到的软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒结构完整性以及稳定性好，具有显著的抗氧化活性和抗氧化损伤活性，且该产品来源于可食用的软枣猕猴桃，安全性高，为抗氧化产品的筛选提供了一种更加安全可靠的新选择。

技术特征：

1.一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述离心的温度为2～6℃。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述软枣猕猴桃果实的汁液的制备包括将软枣猕猴桃果实研磨得到。

4.一种权利要求1～3任意一项所述制备方法制备得到的软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒。

5.根据权利要求4所述的软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒，其特征在于，所述软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒的平均粒径为157.8nm，zeta电位为-23.07mv。

6.权利要求4所述的软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒在制备抗氧化产品中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒具有清除abts+·和/或dpph·的活性。

8.权利要求4所述的软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒在制备抗氧化损伤产品中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述氧化损伤为h2o2所致的氧化损伤。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述产品提高gsh-px和t-sod的活力，降低mda的含量。

技术总结
本发明提供了一种软枣猕猴桃类外泌体样纳米颗粒及其制备方法与应用，属于生物制备技术领域，包括将软枣猕猴桃果实的汁液进行3500～4500g离心5～15min取上清液a、上清液a6500～7500g离心15～25min取上清液b、上清液b9500～10500g离心25～35min取上清液c、上清液c119000～121000g离心65～75min取沉淀1，将沉淀1用无菌PBS缓冲液吹打重悬得到重悬液1，重悬液1119000～121000g离心65～75min得到沉淀2，PBS缓冲液重悬沉淀2，即得。该方法操作简单、快速，制备得到的AAELNs具有显著的抗氧化活性。

技术研发人员：徐红艳,夏广军
受保护的技术使用者：延边大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14