一种杂交瘤细胞株及其产生的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体和抗体的应用

本发明属于免疫学和农药残留检测，尤其涉及一种杂交瘤细胞株及其产生的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体和抗体的应用。

背景技术：

1、6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine，6-ba)，分子式c12h11n5，是一种目前国内外都在广泛使用的外源性植物生长调节剂。6-ba属于人工合成的细胞分裂素的一种，与植物内源性激素具有相似的结构和性质。由于在促进植物细胞生长，抑制蛋白质和叶绿素的分解方面有明显作用，且会诱导芽的分化，因此被用作植物促长剂和果蔬保鲜剂的主要成分，并广泛应用于农业、果树栽培和园艺等领域。然而，6-ba的过量摄入会导致人体的皮肤黏膜、消化系统、生殖系统和神经系统受到刺激和损伤，出现恶心呕吐等现象，更严重的是还有可能导致性早熟和诱发癌症。近几年的毒豆芽事件就是由于在豆芽生产过程中添加了无根剂等过量的添加剂致使人体受到损害，而无根剂的主要成分正是6-ba，研究发现能缩短豆芽的生长周期使其粗壮且无根。2021年欧盟委员会发布(eu)2021/1841号条例，修订6-ba在某些产品中的最大残留量为0.01mg/kg。但商家在利益的驱使下，仍在豆芽的生产过程中违法添加6-ba，毒豆芽事件频发，对食品安全造成严重威胁。

2、目前，对于6-ba已报道的一系列残留量的检测方法，包括高效液相色谱法(hplc)，电化学检测法，重叠的二阶散射和频率双散射光谱法和共振瑞利散射法，液相色谱－质谱联用法(lc-ms)，热分解质谱法等。上述方法具有一定的灵敏度和准确度，但同时存在着仪器昂贵、速度不快、操作繁琐、高通量不够、不能现场检测等技术瓶颈，严重影响了在现场快速检测和实际批量分析中的应用。对于快速筛查6-ba的分析方法，目前还都不成熟，探究原因，高特异性、高灵敏的优良功能性生物材料的获得是限制其发展的主要瓶颈。因此，制备高特异性、高敏感性抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体，获得性能优良的生物功能材料，对于解决小分子快检技术瓶颈背后的核心问题，建立6-苄基腺嘌呤现场即时并行检测技术，具有重大的理论和现实意义。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种杂交瘤细胞株及其产生的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体和抗体的应用。

2、本发明提供了一种产生抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体的杂交瘤细胞株6-ba-3f9，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号cctcc no:c2022236。

3、本发明提供了一种抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体，由所述的杂交瘤细胞株6-ba-3f9产生。

4、本发明提供了述的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体在检测6-苄基腺嘌呤中的应用。

5、本发明提供了所述的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体在制备6-苄基腺嘌呤检测产品中的应用。

6、优选的，所述检测产品为免疫检测产品。

7、优选的，所述免疫检测产品包括酶联免疫试剂盒、胶体金层析试纸条、倏逝波荧光免疫传感器。

8、本发明提供了一种检测6-苄基腺嘌呤的酶联免疫试剂盒，所述酶联免疫试剂盒包括所述的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体。

9、本发明提供了检测6-苄基腺嘌呤的胶体金层析试纸条，所述胶体金层析试纸条包括所述的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体。

10、优选的，所述抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体包被在胶体金层析试纸条的结合垫上。

11、本发明提供了一种检测6-苄基腺嘌呤的倏逝波荧光免疫传感器配套使用的试剂，所述试剂包括所述的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体。

12、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明提供的杂交瘤细胞株6-ba-3f9分泌产生的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体效价为1:1638400，亚型为igg1，亲和常数ka＝3.5×109l/mol，对6-苄基腺嘌呤半抑制率ic50为0.81μg/l，与6-苄基腺嘌呤的交叉反应率为100.00％，与4-氯苯氧乙酸、赤霉素等植物生长调节剂的交叉反应率均小于0.01％。本发明提供的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体能够用于6-苄基腺嘌呤的检测，将其应用于制备检测6-苄基腺嘌呤的酶联免疫试剂盒、胶体金层析试纸条和倏逝波荧光免疫传感器，能够达到快速且灵敏地检测食品和环境中的6-苄基腺嘌呤的目的。本发明提供的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体的质量具有很强的可控性和可重复性，并对所得抗体特性进行了初步分析及鉴定，为特异、灵敏的6-苄基腺嘌呤免疫测定方法的进一步建立和应用提供了实验依据和基础原料。

技术特征：

1.一种产生抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体的杂交瘤细胞株6-ba-3f9，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号cctccno:c2022236。

2.一种抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的杂交瘤细胞株6-ba-3f9产生。

3.权利要求2所述的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体在检测6-苄基腺嘌呤中的应用。

4.权利要求2所述的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体在制备6-苄基腺嘌呤检测产品中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述检测产品为免疫检测产品。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述免疫检测产品包括酶联免疫试剂盒、胶体金层析试纸条、倏逝波荧光免疫传感器。

7.一种检测6-苄基腺嘌呤的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述酶联免疫试剂盒包括权利要求2所述的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体。

8.一种检测6-苄基腺嘌呤的胶体金层析试纸条，其特征在于，所述胶体金层析试纸条包括权利要求2所述的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体。

9.根据权利要求8所述的胶体金层析试纸条，其特征在于，所述抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体包被在胶体金层析试纸条的结合垫上。

10.一种检测6-苄基腺嘌呤的倏逝波荧光免疫传感器配套使用的试剂，其特征在于，所述试剂包括权利要求2所述的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体。

技术总结
本发明提供了一种杂交瘤细胞株及其产生的抗6‑苄基腺嘌呤单克隆抗体和抗体的应用，属于免疫学和农药残留检测技术领域，所述杂交瘤细胞株6‑BA‑3F9，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:C2022236；抗6‑苄基腺嘌呤单克隆抗体效价为1:1638400，亚型为IgG<subgt;1</subgt;，对6‑苄基腺嘌呤半抑制率IC<subgt;50</subgt;为0.81μg/L。本发明提供的抗6‑苄基腺嘌呤单克隆抗体能够用于6‑苄基腺嘌呤的检测，将其应用于制备检测6‑苄基腺嘌呤的酶联免疫试剂盒、胶体金层析试纸条和倏逝波荧光免疫传感器，能够达到快速且灵敏地检测食品和环境中的6‑苄基腺嘌呤的目的。

技术研发人员：李玉静,李春生,李雪冬,李紫然,张妍,李贺杰,刘静静,张静
受保护的技术使用者：河北交通职业技术学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13