一组含有核糖体结合位点的连接序列及应用

本发明属于生物工程，具体涉及一组表达二甲苯单加氧酶含有核糖体结合位点的连接序列及应用。

背景技术：

1、5-甲基吡嗪-2-羧酸(mpca)是一种重要的医药中间体，主要用于合成降血糖药物、降血脂药物以及治疗结核病药物。目前工业化生产的方法主要是化学合成，过程中使用了许多有毒有害物质，对环境造成严重污染。生物合成法能够有效避免这些问题，其中利用来源于pseudomonasputidaatcc 33015中三个氧化酶(二甲苯单加氧酶、苯甲醇脱氢酶和苯甲醛脱氢酶)可以将底物2,5－二甲基吡嗪(dmp)逐步氧化，最终生物合成mpca。苯甲醛脱氢酶由基因xylc编码(ncbi编号：hxe35_rs00455)，二甲苯单加氧酶含有两个亚基分别由xylm、xyla编码(ncbi编号：hxe35_rs00450、hxe35_rs00445)，苯甲醇脱氢酶由基因xylb编码(ncbi编号：hxe35_rs00440)。这4个基因在菌株pseudomonasputida atcc 33015中的质粒pwwo(ncbi编号：nc_003350)中成簇排列。因而利用大肠杆菌异源表达这三个酶，是高效生物合成mpca的一条可行路线。

2、基于上述问题，发明人设计了一组包含核糖体结合位点连接序列，从而显著地提高了重组大肠杆菌转化dmp形成mpca的转化率和效率。

技术实现思路

1、本发明的目的在设计一组高效表达二甲苯单加氧酶的连接序列以及重组大肠杆菌的构建方式及应用。

2、所述的一组连接序列是指基因xylc与xylm的连接序列seq id no 1(rbs1)和基因xylm与xyla的连接序列seq id no 2(rbs2)。

3、所述重组大肠杆菌的构建与应用是指将xylc、xylm、xyla、xylb插入pet28a的ncoi和not i酶切位点，并导入大肠杆菌bl21(de3)中，该重组大肠杆菌能高效转化dmp合成mpca。

1.一组含有核糖体结合位点的连接序列及应用，其特征在于，利用该连接序列构建的重组大肠杆菌可以高效转化2,5－二甲基吡嗪生成5－甲基吡嗪－2－羧酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的一组连接序列是指基因xylc与xylm的连接序列seqidno1和基因xylm与xyla的连接序列seqidno2。