动物抑制素检测试剂盒及其应用的制作方法

本公开属于免疫诊断，具体涉及一种抑制素酶联免疫检测试剂盒及其应用。

背景技术：

1、抑制素(inhibin)是由动物性腺分泌的一种水溶性蛋白激素，属于转化生长因子β超家族(tgf-β)的一员，因其对垂体促卵泡激素(fsh)的产生与分泌具有强烈的抑制作用而得名。抑制素以αβ异二聚体的形式存在，其中β亚基又分为βa、βb、βc、βd和βe五种，目前研究较多的主要是抑制素a(αβa)和抑制素b(αβb)，二者均能抑制fsh的合成与分泌，抑制素a主要由优势卵泡及黄体分泌，抑制素b则由中小窦状卵泡分泌。

2、综上，通过检测抑制素的含量，可以评价母畜是否处在一个正常的发情周期内，并协助判断卵巢上的卵泡发育情况，同时可以评价多胎次母畜的卵巢功能，帮助决定是否淘汰不合格母畜、以节约生产成本。目前市面上常用的抑制素检测方法多为基于β亚基的化学发光免疫测定和酶联免疫吸附法，但由于β亚基在体内为多种因子共用，因此无法准确判定抑制素的含量。开发一种特异性针对抑制素α亚基的酶联免疫检测试剂盒，一定程度上可靶向检测机体抑制素的含量，随着联合诊断评价技术的发展，将有助于相关技术人员判断母畜实际生理状态。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中存在的问题，本公开的目的在于提供一种动物抑制素检测试剂盒及其应用。

2、为了实现上述目的，本公开采用以下具体方案：

3、在一方面，本公开提供了一种特异性结合抑制素α亚基的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含以下重链和轻链可变区的cdr组合：

4、包含选自氨基酸序列如seq id no.1或其任何变体所示的hcdr1、选自氨基酸序列如seq id no.2或其任何变体所示的hcdr2、选自氨基酸序列如seq id no.3或其任何变体所示的hcdr3；和包含选自氨基酸序列如seq id no.4或其任何变体所示的lcdr1、选自氨基酸序列如seq id no.5或其任何变体所示的lcdr2、选自氨基酸序列如seq id no.6或其任何变体所示的lcdr3。

5、在另一方面，本公开提供了编码上述单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸。

6、在另一方面，本公开提供了包含上述核酸的表达载体。

7、在另一方面，本公开提供了包含上述核酸或上述表达载体的细胞。

8、在另一方面，本公开提供了一种制备上述特异性结合抑制素α亚基的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，其包括以下步骤：

9、在动物腹腔内注射包含1e57细胞的细胞悬液，采集腹水，离心，沉淀，纯化制备；或

10、将上述表达载体，经大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞、昆虫细胞或杆状病毒表达，纯化获得。

11、在另一方面，本公开提供了一种动物抑制素检测试剂盒，包括盒体、设在盒体内可拆卸的酶标板以及盒体内的试剂，其中，所述酶标板的每个孔包被抗抑制素多克隆抗体，所述试剂包括上述的抗抑制素单克隆抗体、酶标抗体。

12、在另一方面，本公开提供了上述单克隆抗体或其抗原结合片段、核酸、载体、细胞、方法和/或试剂盒在判断家畜发情周期和生殖功能中的应用。

13、本公开所取得的有益效果至少如下：

14、1.本公开的动物抑制素酶联免疫检测试剂盒特异性强，能够准确灵敏地检测动物血清中抑制素的含量，最低检测限可达到0.1μg/l。

15、2.本公开的动物抑制素酶联免疫检测试剂盒中的单克隆抗体是通过将全长动物抑制素α亚基与载体蛋白偶联后，经体内免疫反应制备获得，通过该方式制备获得的单抗特异性高，进而提高该试剂盒的特异性，准确灵敏地检测体液中抑制素的含量。

16、3.本公开基于动物抑制素酶联免疫检测试剂盒的检测方法操作简单，通量高，检测时间相对可控，同时对检测场地和仪器的要求简单，相较于依赖指定医院特殊仪器的现有检测技术，极大地突破了检测限制。

技术特征：

1.一种特异性结合抑制素α亚基的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含以下重链和轻链可变区的cdr组合：

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区，其中，所述重链可变区包含如seq id no.7所示的氨基酸序列，或与seq id no.7所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区，其中，所述轻链可变区包含如seq id no.9所示的氨基酸序列，或与seq id no.9所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

4.编码权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸。

5.包含权利要求4所述核酸的表达载体。

6.包含权利要求4所述核酸或权利要求5所述载体的细胞；

7.制备权利要求1-3任一项所述的特异性结合抑制素α亚基的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，其包括以下步骤：

8.一种动物抑制素检测试剂盒，包括盒体、设在盒体内可拆卸的酶标板以及盒体内的试剂，其中，所述酶标板的每个孔包被抗抑制素多克隆抗体，所述试剂包括权利要求1-3任一项所述的抗抑制素单克隆抗体。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其中，还包括抑制素标准品，以及任选的样本处理液、洗涤液、显色液和终止液。

10.根据权利要求8所述的试剂盒，其中，所述抗抑制素多克隆抗体的包被浓度为0.1-10μg/ml，抗抑制素单克隆抗体的使用浓度为0.05-100μg/ml。

11.根据权利要求10所述的试剂盒，其中，所述抗抑制素多克隆抗体的包被浓度为2μg/ml，抗抑制素单克隆抗体的使用浓度为2μg/ml。

12.根据权利要求8-11任一项所述的试剂盒，其中，所述抗抑制素单克隆抗体带有标记；其中所述标记物为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。

13.权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、权利要求4所述的核酸、权利要求5所述的载体、权利要求6所述的细胞、权利要求7所述的方法和/或权利要求8-12任一项所述的试剂盒在判断家畜发情周期和生殖功能中的应用。

技术总结
本公开涉及一种动物抑制素检测试剂盒及其应用，具体涉及一种特异性结合抑制素α亚基的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含选自氨基酸序列如SEQ ID NO.1或其任何变体所示的HCDR1、选自氨基酸序列如SEQ ID NO.2或其任何变体所示的HCDR2、选自氨基酸序列如SEQ ID NO.3或其任何变体所示的HCDR3；和包含选自氨基酸序列如SEQ ID NO.4或其任何变体所示的LCDR1、选自氨基酸序列如SEQ ID NO.5或其任何变体所示的LCDR2、选自氨基酸序列如SEQ ID NO.6或其任何变体所示的LCDR3。采用本公开的检测试剂盒，可以同时检测大量样品，结果与动物实际生理状态吻合，因此一定程度上可以根据动物体液中抑制素的浓度来辅助判断动物所处的发情阶段，协助诊断母畜是否出现生理异常，一定程度上评价母畜的繁殖性能。

技术研发人员：张永,陈宇,杨佳乐,叶超尹,孙迪,杨军帅,洪璐,郑兴昌,周思超
受保护的技术使用者：宁波三生生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15