一种抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体31A8及其产品和应用

本发明属于细胞生物技术、免疫学领域，具体涉及一种抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体(命名为31a8)及其产品和应用。

背景技术：

1、严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndromecoronavirus 2，sars-cov-2)，属于冠状病毒乙型冠状病毒属、严重急性呼吸道综合征相关冠状病毒种的一个分型，其在复制过程中因不断适应导致了突变的不断发生，进而产生了多种变异株，致使其传播力、致病性和免疫原性均有一定的变化。因此，对新冠病毒的有效快速检测仍然是保护大众健康的有效手段之一。

2、大众广为熟知的新冠病毒检测方法主要有两种，一种是核酸检测，但因其耗时、耗力，且对操作人员、检测设备、检测环境等均有较高的要求，因此在病毒常规快速检测方面应用受限。另一种是抗原检测，其具有检测速度快、成本低、操作相对简单且可居家自行检测等优点。但是，目前市售抗原检测试剂盒的灵敏度较核酸检测还是略微差了一些。同时，由于新冠病毒不断的突变，因此亟需亲和力更好且广谱性的抗体用于抗原检测。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体31a8及其产品和应用，以解决现有的抗新型冠状病毒的单克隆抗体存在的n蛋白结合活性较低，亲和力差的问题。

2、为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

3、本发明的第一方面提供了一种抗新型冠状病毒n蛋白的单克隆抗体31a8，所述单克隆抗体31a8包括轻链和重链，所述轻链属于kappa，所述重链属于igg1；其中，所述单克隆抗体31a8轻链可变区的3个互补决定区(lcdr1～3)的氨基酸序列分别如seq id no.1～3所示，所述重链可变区的hcdr1～3的氨基酸序列分别如seq id no.10～12所示。

4、进一步，所述单克隆抗体31a8轻链可变区框架区lfr1～4具有与seq idno.4-7所示氨基酸序列至少90％序列一致性，所述重链可变区框架区hfr1～4具有与seq id no.13-16所示氨基酸序列至少90％序列一致性。

5、进一步，所述单克隆抗体31a8轻链可变区具有与seq id no.8所示的氨基酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的vl，所述重链可变区具有与seq id no.17所示的氨基酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的vh。

6、进一步，所述单克隆抗体31a8轻链可变区具有与seq id no.9所示的核苷酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的vl，所述重链可变区具有与seq id no.18所示的核苷酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的vh。

7、本发明的第二方面提供了一种新型冠状病毒感染的产品，包括第一方面所述的单克隆抗体或其功能片段，或编码本发明第一方面所述的单克隆抗体或其功能片段的核酸分子、重组表达载体、宿主细胞；其中：

8、a)核酸分子：所述核酸分子编码本发明第一方面所述的单克隆抗体或者其功能片段；

9、b)重组表达载体：所述重组表达载体包含a)中所述的核酸分子；

10、c)宿主细胞：所述宿主细胞包含b)中所述的重组表达载体；

11、d)药物偶联物，包含本发明第一方面所述的抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体或者基于其的功能片段。

12、进一步，所述重组表达载体具有与抗体可操作地连接的信号肽；

13、进一步，所述重组表达载体进一步包含转录调控原件。

14、进一步，所述产品还包括拥有执行抗原-抗体反应的试剂或者拥有检测反应的试剂；

15、进一步，用于执行抗原-抗体反应的试剂包括缓冲剂、盐、稀释液等；

16、进一步，所述药物偶联物还包含选自下列组的偶联部分：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子或者酶。

17、本发明第三方面提供了如下任一项所述的方法：

18、1)一种制备本发明第一方面所述的单克隆抗体的方法，所述方法包括：培养本发明第二方面所述的宿主细胞，任选地从所述宿主细胞和/或所述宿主细胞生长于的培养基中分离所述单克隆抗体；

19、2)一种检测样品中n蛋白的方法，所述方法包括本发明第一方面所述的单克隆抗体接触待测样本，确定所述待测样本中n蛋白的存在或者水平。

20、3)进一步，1)中所述方法还包括对所述单克隆抗体进行纯化；

21、4)进一步，所述宿主细胞选自哺乳动物细胞；

22、5)进一步，所述细胞选自293t细胞或者cho细胞或者expi293ftm细胞。

23、本发明的第四方面提供了如下任一项所述的应用：

24、1)本发明第一方面所述的单克隆抗体、本发明第二方面所述的物质在检测n蛋白中的应用；

25、2)本发明第一方面所述的单克隆抗体、本发明第二方面所述的物质在制备检测新型冠状病毒感染的产品中的应用；

26、3)本发明第一方面所述的单克隆抗体、本发明第二方面所述的物质在制备诊断新型冠状病毒感染相关疾病的产品中的应用；

27、4)本发明第一方面所述的单克隆抗体、本发明第二方面所述的物质在或者本发明第三方面所述的药物组合物在制备预防和/或治疗新型冠状病毒感染相关疾病的药物中的应用。

28、进一步，所述产品包括试剂盒。

29、进一步，所述试剂盒包括：胶体金免疫检测试剂盒、化学发光检测试剂盒、放射免疫检测试剂盒、酶联免疫检测试剂盒、荧光免疫检测试剂盒、微流控芯片。

30、进一步，所述新型冠状病毒为sars-cov-2。

31、进一步，所述新型冠状病毒感染相关疾病为covid。

32、进一步，所述新型冠状病毒感染相关疾病为covid-19。

33、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

34、本发明公开了一种抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体，命名为31a8，并明确的给出了其轻链和重链的可变区互补决定区氨基酸序列，所述轻链属于kappa，所述重链属于igg1，所述轻链可变区的3个互补决定区(lcdr1-3)的氨基酸序列分别如seq id no.1～3所示，所述重链可变区的hcdr1-3的氨基酸序列分别如seq id no.10～13所示，同时公开了轻链可变区的四个框架区(lfr1-4)和重链可变区的四个框架区(hfr1-4)的氨基酸序列。经实验证明，本发明中所提供的单克隆抗体31a8与新型冠状病毒具有较好的结合活性，且特异性强，能够用于临床检测新型冠状病毒sars-cov-2。

技术特征：

1.一种抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体，其特征在于，包括轻链和重链，所述轻链属于kappa，所述重链属于igg1；其中：

2.根据权利要求1所述的抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体，其特征在于，该抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体的轻链可变区框架区lfr1、lfr2、lfr3和lfr4的氨基酸序列分别如seq id no.4、seq id no.5、seq id no.6及seq id no.7所示；

3.根据权利要求1或2所述的抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体，其特征在于，该抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体的轻链可变区具有与seq id no.8所示的氨基酸序列至少90％序列一致性；该抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体的重链可变区具有与seq id no.17所示的氨基酸序列至少90％序列一致性。

4.根据权利要求3所述的抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体，其特征在于，该抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体的轻链可变区具有与seq id no.8所示的氨基酸序列95％的序列一致性；该抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体的重链可变区具有与seq id no.17所示的氨基酸序列95％的序列一致性。

5.根据权利要求1或2所述的抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体，其特征在于，编码该抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体的轻链可变区的核酸具有与seq id no.9所示的核苷酸序列至少90％序列一致性；编码该抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体的重链可变区的核酸具有与seq id no.18所示的核苷酸序列至少90％序列一致性。

6.根据权利要求5所述的抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体，其特征在于，编码该抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体的轻链可变区的核酸具有与seq id no.9所示的核苷酸序列95％序列一致性；编码该抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体的重链可变区的核酸具有与seqid no.18所示的核苷酸序列95％序列一致性。

7.一种检测新型冠状病毒感染的产品，其特征在于，包括：

8.权利要求1～6中任意一项所述的抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体在制备检测新型冠状病毒感染的产品中的应用，其特征在于，所述产品包括检测试剂、试剂盒或检测试纸。

9.权利要求1～6中任意一项所述的抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体及权利要求7所述的检测新型冠状病毒感染的产品在制备诊断与新型冠状病毒感染相关的疾病的产品中的应用，其特征在于，所述产品包括诊断试剂、试剂盒或诊断试纸。

10.如权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括：胶体金免疫检测试剂盒、化学发光检测试剂盒、放射免疫检测试剂盒、酶联免疫检测试剂盒、荧光免疫检测试剂盒和微流控芯片。

技术总结
本发明公开了一种抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体31A8及其产品和应用，属于细胞生物技术、免疫学领域。抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体31A8的轻链属于kappa，所述重链属于IgG1，所述轻链可变区的3个互补决定区(LCDR1‑3)的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1～3所示，所述重链可变区的HCDR1‑3的氨基酸序列分别如SEQ ID No.10～13所示，同时公开了轻链可变区的四个框架区(LFR1‑4)和重链可变区的四个框架区(HFR1‑4)的氨基酸序列。经实验证明，本发明中所提供的单克隆抗体31A8与新型冠状病毒具有较好的结合活性，且特异性强，能够用于临床检测新型冠状病毒SARS‑COV‑2。

技术研发人员：张娅玲,闫亚平,霍佳瑶,郝文斌,张宇森,戚雯静,冯馨蓉
受保护的技术使用者：陕西师范大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13