抗穆勒氏管激素抗体、检测穆勒氏管激素的试剂和试剂盒的制作方法

本发明涉及抗体，具体而言，涉及一种抗穆勒氏管激素抗体、检测穆勒氏管激素的试剂和试剂盒。

背景技术：

1、抗穆勒氏管激素(anti-mullerian hormone，amh)是转化生长因子β超家族中的一员，由professor alfred jost于1974年首先发现。它由两个70kd的蛋白亚基通过二硫键组成的二聚糖蛋白，相对分子质量为140kd，其主要作用是影响卵泡的成长和分化。人类编码amh的基因位于19p13.3号染色体，大小2.4～2.8kb，含有5个外显子。研究表明，amh的n端区域对保持蛋白完整活性起关键作用，在代谢运输过程中，amh的特定位点(451位氨基酸)可以被切开，形成前体片段(pro-amh，26-451aar)以及成熟片段(mature amh，452-560aar)，而切开的两个片段能够再通过非共价键的形式连接在一起。

2、amh在性腺器官发育过程中起着重要作用，是男女性腺功能的重要标记物之一。在男性胎儿的塞尔托利氏细胞中，转录因子sox-9(transcription factor sox-9，sox9)可激活amh与抗穆勒激素受体ii型(anti-mullerian hormone receptor type ii，amhr2)相结合并导致雄性胚胎中的穆勒氏管退化，从而阻止输卵管、子宫和阴道上部的形成，使男性生殖管道正常发育。而在女性胚胎中穆勒氏管将分化为子宫管和输卵管。amh也是女性的窦前卵泡和小窦卵泡颗粒细胞的产物，从青春期开始，血清中amh水平随时间慢慢降低，并在更年期降低到elisa法检测不到的水平。amh的正常值界于2-6.8ng/ml之间，数值越高，代表卵子存量越丰沛，适合受孕的黄金期较长，数值越低则卵巢功能越差。35岁过后amh值会开始急剧下降，当低于0.7ng/ml时，表示卵子库存量已严重不足，几乎难以受孕。若数值大于6.8时，可考虑有多囊性卵巢症候群的体质。使用排卵针剂、药物时，卵巢也容易反应过度而排出过多的卵子，造成卵巢过度刺激症候群。因此可通过检测amh水平来判断卵子存量及卵巢功能，并可以作为体外受精联合胚胎移植术(ivf)的卵巢反应性、多囊性卵巢综合征(pcos)、卵巢过度刺激综合症(ohss)的诊断依据。

3、目前国内外临床上检测amh的常用方法有酶联免疫吸附法(elisa)、电化学发光法和化学发光法。其中elisa方法耗时长、灵敏度低、背景值高、易造成假阳性和假阴性结果，并且需要专业人员进行操作。电化学发光法和化学发光法如罗氏的elecsys amh检测仪目前逐渐替换elisa法，但价格昂贵，不适合单人份和小批量检测用，加上需要专门的仪器使用人员，维修和检测成本均较高，不适合大范围推广使用。

4、上述方法都需要借助抗amh的单克隆抗体，因此，本领域技术人员对于有良好活性和亲和力的抗穆勒氏管激素抗体存在着强烈需求。

技术实现思路

1、本申请提供一种抗体或其功能性片段，为穆勒氏管激素的检测提供重要的原料来源，且有良好的活性和亲和力。

2、为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包括hcdr1、hcdr2、hcdr3和lcdr1、lcdr2、lcdr3，所述hcdr1、hcdr2、hcdr3为与seq id no:17、18任一所示重链可变区的hcdr1、hcdr2、hcdr3一致的氨基酸序列；所述lcdr1、lcdr2、lcdr3为与seq id no:19、20、21、22任一所示轻链可变区的lcdr1、lcdr2、lcdr3一致的氨基酸序列。

3、为了实现上述目的，根据本发明的第二个方面，提供了一种抗体或其功能性片段，包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区氨基酸序列如seq id no:17、18任一所示；所述轻链可变区氨基酸序列如seq id no:19、20、21、22任一所示。

4、为了实现上述目的，根据本发明的第三个方面，提供了一种抗体或其功能性片段，包括重链和/或轻链，所述重链的氨基酸序列如seq id no:23、24任一所示；所述轻链的氨基酸序列如seq id no:25、26、27、28任一所示。

5、为了实现上述目的，根据本发明的第四个方面，提供了一种抗体偶联物，所述抗体偶联物包括上述的抗体或其功能性片段。

6、为了实现上述目的，根据本发明的第五个方面，提供了一种试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述的抗体或其功能性片段或上述的抗体偶联物。

7、为了实现上述目的，根据本发明的第六个方面，提供了一种检测穆勒氏管激素的方法，包括：a)在足以发生抗体/抗原结合反应的条件下，使上述的抗体或其功能性片段、抗体偶联物，或者试剂或试剂盒与待检测样品中的穆勒氏管激素接触形成免疫复合物；和b)检测所述免疫复合物的存在，所述复合物的存在指示所述测试样品中所述抗原的存在。

8、为了实现上述目的，根据本发明的第七个方面，提供了一种核酸，所述核酸编码上述的抗体或其功能性片段。

9、为了实现上述目的，根据本发明的第八个方面，提供了一种载体，所述载体包括上述的核酸。

10、为了实现上述目的，根据本发明的第九个方面，提供了细胞，所述细胞包括上述的核酸、载体或表达上述的抗体或其功能性片段。

11、为了实现上述目的，根据本发明的第十个方面，提供了一种制备上述抗体或其功能性片段的方法，所述方法包括培养上述的细胞。

12、为了实现上述目的，根据本发明的第十一个方面，提供了一种上述的抗体或其功能性片段、抗体偶联物、试剂或试剂盒在检测或制备检测穆勒氏管激素产品中的用途。

技术特征：

1.一种抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包括hcdr1、hcdr2、hcdr3和lcdr1、lcdr2、lcdr3，其特征在于，所述hcdr1、hcdr2、hcdr3为与seq id

2.根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述可变区的hcdr1，hcdr2，hcdr3，lcdr1，lcdr2或lcdr3由kabat、chothia、imgt、abm或contact任意一种系统或多种系统组合定义；

3.一种抗体或其功能性片段，包含重链可变区和/或轻链可变区，其特征在于，所述重链可变区氨基酸序列如seq id no:17、18任一所示；所述轻链可变区氨基酸序列如seq idno:19、20、21、22任一所示。

4.根据权利要求1或3所述的抗体或其功能性片段，所述重链可变区和轻链可变区的组合选自如下任意一组合：

5.根据权利要求1至4任一所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段还包含恒定区；

6.一种抗体或其功能性片段，包括重链和/或轻链，其特征在于，所述重链的氨基酸序列如seq id no:23、24任一所示；所述轻链的氨基酸序列如seq id no:25、26、27、28任一所示。

7.一种抗体偶联物，其特征在于，所述抗体偶联物包括权利要求1至6任一项所述的抗体或其功能性片段；

8.一种试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括权利要求1至6任一项所述的抗体或其功能性片段或权利要求7所述的抗体偶联物。

9.一种检测穆勒氏管激素的方法，其特征在于，包括：

10.一种核酸，其特征在于，其编码权利要求1至6任一项所述的抗体或其功能性片段。

11.一种载体，其特征在于，其含有权利要求10所述的核酸。

12.一种细胞，其特征在于，其含有权利要求10所述的核酸或权利要求11所述的载体。

13.一种制备权利要求1-6任一项所述的抗体或其功能性片段的方法，其特征在于，其包括：培养权利要求12所述的细胞。

14.权利要求1-6任一项所述的抗体或其功能性片段、权利要求7所述的抗体偶联物，或者权利要求8所述的试剂或试剂盒在检测或制备检测穆勒氏管激素产品中的用途。

技术总结
本发明公开了抗穆勒氏管激素的抗体或检测穆勒氏管激素的试剂和试剂盒，涉及抗体领域。本发明公开的抗穆勒氏管激素抗体包括重链互补决定区和轻链互补决定区，该抗体为穆勒氏管激素的检测提供了重要的原料来源，且具有良好的亲和力和活性。

技术研发人员：钟冬梅,孟媛,梁碧,唐丽娜
受保护的技术使用者：东莞市朋志生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/12/2