一种FDP抗原的制备方法及其应用与流程

本发明涉及生物，尤其是涉及一种fdp抗原的制备方法及其应用。

背景技术：

1、人体内的纤维蛋白原在纤溶系统激活后产生的纤溶酶的作用下，降解为x,y,d,e,碎片，成为纤维蛋白原降解产物(fgdp)。纤维蛋白原在机体内被激活后形成纤维蛋白和交联的纤维蛋白，使血液凝固。同时也激活了纤溶系统，纤维蛋白的溶解过程开始，在纤溶酶的作用下，交联的纤维蛋白除了降解产生碎片x’、y’、d’、e’外，还生成d-二聚体(d-dimer，dd)、γ-γ二聚体、dd/e、dy/yd、yy/dyd等复合物。非交联纤维蛋白和交联纤维蛋白降解产生的碎片、二聚体、多聚体和复合物统称为纤维蛋白降解产物(fbdp)。纤维蛋白原降解产物(fgdp)和纤维蛋白降解产物(fbdp)统称为纤维蛋白(原)降解产物(fdp)。

2、d-dimer和fdp的检测对与诊治凝血-纤溶系统疾病、溶血栓治疗的监测等方面有着重要的意义。d-dimer反应人体中纤溶系统活化的标志物，它是体内高凝状态和继发性纤溶亢进的重要评价指标之一。随着d-dimer和fdp检验项目在临床应用范围的扩大，制备配套d-dimer和fdp试剂盒的校准品和质控品尤为重要。

3、但是现有的fdp、d-二聚体校准品和质控品使用人血浆风险较大，且难以得到，故选用动物血浆或血清代替人血浆作为校准品和质控品的基质显得尤为迫切。目前制备fdp校准品的方式繁琐，稳定性和均匀性差，并且定标曲线的线性关系不好。因此有必要研究新的fdp和d-二聚体抗原的制备方法用于校准品和质控品以提升稳定性、均匀性和线性关系。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明第一方面提出一种fdp抗原的制备方法，制备的fdp抗原用于校准品或质控品后能够有效提高线性关系、稳定性和均匀性。

2、本发明的第二方面还提供一种d-二聚体抗原的制备方法。

3、本发明的第三方面还提供一种fdp校准品。

4、本发明的第四方面还提供一种fdp质控品。

5、本发明的第五方面还提供一种d-二聚体校准品。

6、本发明的第六方面还提供一种d-二聚体质控品。

7、本发明的第七方面还提供一种fdp校准品或质控品的应用。

8、本发明的第八方面还提供一种d-二聚体校准品或质控品的应用。

9、根据本发明的第一方面实施例提供的一种fdp抗原的制备方法，包括如下步骤：

10、将交联的纤维蛋白粉末、纤维蛋白粉末、纤维蛋白原用尿激酶和人纤溶酶原混合进行水解反应得到水解产物，所述水解产物用抑肽酶终止反应；离心、过滤即得fdp抗原；

11、其中，所述尿激酶和人纤溶酶原的浓度比为(100～600):1。

12、根据本发明实施例的fdp抗原的制备方法，至少具有如下有益效果：

13、本发明意外地发现将尿激酶和人纤溶酶原的浓度比为(100～600):1在这个范围内制备的fdp抗原用于fdp校准品或质控品时其具有与人血浆线性关系一致，且具有高的均一性和稳定性。

14、根据本发明的一些实施例，所述尿激酶和人纤溶酶原的浓度比为(200～400):1。

15、根据本发明的一些实施例，所述交联的纤维蛋白粉末、纤维蛋白粉末和纤维蛋白原的质量比为1:(0.5～1.5):(0.5～1.5)。

16、根据本发明的一些实施例，所述交联的纤维蛋白粉末通过如下方法制备：

17、将人纤维蛋白原、第一tris缓冲液、第一钙离子溶液、凝血因子xiii和第一凝血酶混合，室温搅拌得到交联的纤维蛋白；将交联的纤维蛋白用tris缓冲液洗涤、干燥、粉碎即得到交联的纤维蛋白粉末。

18、根据本发明的一些实施例，所述纤维蛋白粉末通过如下方法制备：

19、将纤维蛋白原、第二tris缓冲液、第二凝血酶和第二钙离子溶液混合生成纤维蛋白；将纤维蛋白用生理盐水洗涤、干燥、粉碎即得到纤维蛋白粉末。

20、根据本发明的一些实施例，所述第一钙离子溶液和第二钙离子溶液的浓度独立地选自20～30mmol。

21、根据本发明的一些实施例，所述离心的转速为10000～18000r/min。

22、根据本发明的一些实施例，所述水解的温度为30～40℃，时间为18～36h。

23、根据本发明的一些实施例，所述第一tris缓冲液、第二tris缓冲液和第三tris缓冲液的组分包括20～40mmol/l tris、0.9％～1.5％氯化钠、0.15％～0.3％edta、0.02％～0.2％防腐剂。

24、根据本发明的一些实施例，所述防腐剂包括叠氮钠或柳硫汞纳中的一种。

25、根据本发明的第二方面实施例提供的一种d-二聚体抗原的制备方法，包括如下步骤：

26、将上述任一项方法制备的fdp抗原通过分子筛纯化，即得d-二聚体抗原；

27、根据本发明的一些实施例，所述分子筛选自sephacryl s200、sephacryl s-300、superdex 200。

28、本发明第三方面提供一种fdp校准品，将上述任一项方法制备的fdp抗原和羊血清基质按照体积比1:(50～70)进行混合即得。

29、本发明第四方面提供一种fdp质控品，将上述任一项方法制备的fdp抗原和羊血清基质按照体积比1:(135～1435)进行混合即得。

30、由此，采用羊血清基质的定标曲线的线性关系好，相关系数大于0.99。能够采用羊血清基质替代人血浆，有利于商业大规模开发和生产；另外，通过上述方法制备的fdp抗原用于制备校准品或质控品，其校准品或质控品的均一性和稳定性都非常高。

31、本发明第五方面提供一种d-二聚体校准品，将上述任一项方法制备的d-二聚体抗原和羊血清基质按照体积比1:(80～100)进行混合即得。

32、本发明第六方面提供一种d-二聚体质控品，将上述任一项方法制备的d-二聚体抗原和羊血清基质按照体积比1:(210～1330)进行混合即得。

33、由此，采用羊血清基质的定标曲线的线性关系好，相关系数大于0.99。能够采用羊血清基质替代人血浆，有利于商业大规模开发和生产；另外，通过上述方法制备的d-二聚体抗原用于制备校准品或质控品，其校准品或质控品的均一性和稳定性都非常好。

34、本发明第七方面提供上述所述的fdp校准品或质控品在制备fdp检测试剂盒中的应用。

35、本发明第八方面提供上述所述的d-二聚体校准品或质控品在制备d-二聚体检测试剂盒中的应用。

36、本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。

技术特征：

1.一种fdp抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的fdp抗原的制备方法，其特征在于，所述尿激酶和人纤溶酶原的浓度比为(200～400):1；和/或

3.根据权利要求1所述的fdp抗原的制备方法，其特征在于，所述交联的纤维蛋白粉末通过如下方法制备：

4.一种d-二聚体抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.一种fdp校准品，其特征在于，将权利要求1～3任一项方法制备的fdp抗原和羊血清基质按照体积比1:(50～70)进行混合即得。

6.一种fdp质控品，其特征在于，将权利要求1～3任一项方法制备的fdp抗原和羊血清基质按照体积比1:(135～1435)进行混合即得。

7.一种d-二聚体校准品，其特征在于，将权利要求4所述的制备方法制备的d-二聚体抗原和羊血清基质按照体积比1:(80～100)进行混合即得。

8.一种d-二聚体质控品，其特征在于，将权利要求4所述的制备方法制备的d-二聚体抗原和羊血清基质按照体积比1:(210～1330)进行混合即得。

9.权利要求5所述的fdp校准品或权利要求6所述的fdp质控品在制备fdp检测试剂盒中的应用。

10.权利要求7所述的d-二聚体校准品或权利要求8所述的d-二聚体质控品在制备d-二聚体检测试剂盒中的应用。

技术总结
本发明公开了一种FDP抗原的制备方法及其应用，其FDP抗原的制备方法，包括如下步骤：将交联的纤维蛋白粉末、纤维蛋白粉末、纤维蛋白原用尿激酶和人纤溶酶原混合进行水解反应得到水解产物，所述水解产物用抑肽酶终止反应；离心、过滤即得FDP抗原；其中，尿激酶和人纤溶酶原的浓度比为(100～600):1。本发明意外地发现将尿激酶和人纤溶酶原的浓度比为(100～600):1在这个范围内制备的FDP抗原用于FDP校准品或和质控品时其具有与人血浆线性关系一致，且具有高的均一性和稳定性。

技术研发人员：焦东燕,李小英,邓大永,王玉玉,燕伟匣,马翔飞,梁美丽,刘芳,王晓红
受保护的技术使用者：保定天岳生物工程有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14