一种抗Glypican3抗体及其应用的制作方法

本发明涉及生物医药，特别是涉及一种抗glypican 3抗体及其应用。

背景技术：

1、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,hcc)是肝癌(liver cancer)中最常见的组织学亚型，是第六大常见癌症，也是导致癌症相关死亡的第四大原因。

2、目前，hcc的临床管理还存在相当大的挑战。只有15％-20％的hcc病例在早期被诊断出可能适合于治愈性治疗，例如手术切除、肝脏移植、经皮乙醇注射局部消融、微波消融和射频消融等。与此同时，大多数hcc患者存在潜在的慢性肝病，这类人群的手术切除治疗充满了各种潜在并发症的可能性。此外，还有很多患者被诊断为无法手术切除的晚期hcc。hcc患者5年生存率只有大约18％，如果癌细胞已经扩散到周围组织或身体的远端部位，则5年生存率会分别降低到大约11％和5％。

3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,gpc3)是硫酸乙酰肝素蛋白聚糖家族的一员，可在控制细胞分裂和生长调节方面发挥作用。glypican 3在健康组织中很少表达，但在很多实体瘤如hcc中高度表达。在hcc中，glypican 3常被用作诊断和预后的生物标志物。glypican 3在肿瘤组织中的特异性表达，其可接近的表面位置以及其在肿瘤转化中涉及的各种信号传导途径中的作用使其成为包括hcc在内的几种实体瘤的免疫治疗的理想靶点。

4、目前，处于临床前与临床阶段的靶向glypican 3的hcc疗法主要包括多肽疫苗、单克隆抗体以及嵌合抗原受体t细胞免疫疗法等。

5、嵌合抗原受体t细胞(chimeric antigen receptor t cells,car-t)疗法是近年来一种革命性的癌症免疫细胞疗法。通过基因转导的方法使t细胞表达嵌合抗原受体，得到具有肿瘤特异性的car-t细胞，特异性地追踪识别并杀伤肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的目的。

6、因此，将抗glypican 3的嵌合抗原受体基因通过基因转导方法导入t细胞所制备的glypican 3car-t，可特异性识别表达glypican 3的hcc细胞并将其杀死，从而实现其抗肿瘤作用，对靶向glypican 3的免疫治疗方法具有较大的临床转化价值。

技术实现思路

1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种抗glypican 3抗体及其应用，用于解决现有技术中的问题。

2、为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种抗glypican 3抗体，代号为b6和b51，或分别称为glypican 3-vhh-b6和glypican 3-vhh-b51，所述抗glypican 3抗体包括重链可变区，所述抗glypican 3抗体具有如下技术特征中的一个或多个；

3、<1>重链可变区包括氨基酸序列如seq id no.1所示的cdr-h1；

4、<2>重链可变区包括氨基酸序列如seq id no.2所示的cdr-h2；

5、<3>重链可变区包括氨基酸序列如seq id no.3所示的cdr-h3。

6、本发明还提供一种分离的多肽，所述多肽包括跨膜域、胞内域和胞外域，所述胞外域包括所述的抗glypican 3抗体。

7、本发明还提供一种嵌合抗原受体免疫细胞，所述嵌合抗原受体免疫细胞表达膜结合的所述的分离的多肽。

8、如上所述，本发明的抗glypican 3抗体及其应用，具有以下有益效果：

9、(1)本发明的抗glypican 3抗体仅包括重链可变区具备高亲和力和特异性，能够高效靶向glypican 3抗原，且结构简单，易于制备；

10、(2)本发明中，利用所述抗glypican 3抗体构建嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体能够高效靶向glypican 3；

11、(3)本发明的嵌合抗原受体细胞能够特异性识别glypican 3阳性肿瘤细胞，并进行高效杀伤，同时还能释放细胞因子如ifn-γ因子等发挥细胞杀伤作用。

技术特征：

1.一种抗glypican 3抗体，其特征在于，所述抗glypican 3抗体包括重链可变区，所述抗glypican 3抗体具有如下技术特征中的一个或多个；

2.根据权利要求1所述的抗glypican 3抗体，其特征在于，所述重链可变区还包括框架区，所述框架区包括框架区fr1～fr4，所述框架区fr1～fr4的氨基酸序列选自seq id no.4～7或seq id no.23中任意所示的序列。

3.根据权利要求2所述的抗glypican 3抗体，其特征在于，所述抗glypican 3抗体包括如下特征：

4.根据权利要求1所述的抗glypican 3抗体，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.8或seq id no.24所示。

5.根据权利要求1所述的抗glypican 3抗体，其特征在于，所述抗glypican 3抗体为纳米抗体或单链抗体。

6.权利要求1～5任一所述的抗glypican 3抗体在制备或筛选肿瘤治疗药物中的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述肿瘤为表达glypican 3的肿瘤；优选的，所述肿瘤选自肝癌、卵巢癌、肺癌、黑色素瘤、胃癌或甲状腺癌；优选的，所述肿瘤治疗药物为嵌合抗原受体细胞。

8.一种分离的多肽，所述多肽包括跨膜域、胞内域和胞外域，所述胞外域包括权利要求1～5任一所述的抗glypican 3抗体。

9.根据权利要求8所述的多肽，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项：

10.一种分离的多核苷酸，其特征在于，编码权利要求1～5任一所述的抗glypican 3抗体或权利要求8～9任一所述的多肽。

11.一种核酸构建体，其特征在于，含有编码权利要求8～9任一所述的分离的多肽的多核苷酸。

12.根据权利要求11所述的核酸构建体，其特征在于，所述核酸构建体为慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺相关病毒载体中的任意一种。

13.一种慢病毒，其特征在于，所述慢病毒由权利要求11或12所述的核酸构建体经病毒包装而成。

14.一种慢病毒载体系统，其特征在于，所述慢病毒载体系统包括权利要求11或12所述的核酸构建体以及辅助质粒或宿主细胞。

15.一种嵌合抗原受体免疫细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体免疫细胞表达膜结合的权利要求8～9任一所述的分离的多肽。

16.根据权利要求14所述的嵌合抗原受体免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞选自t淋巴细胞、b淋巴细胞、nk细胞、肥大细胞或巨噬细胞中的任意一种。

17.权利要求8～9任一所述的分离的多肽、权利要求15～16任一所述的嵌合抗原受体免疫细胞在制备或筛选肿瘤治疗药物中的用途。

18.根据权利要求17所述的用途，其特征在于，所述肿瘤为表达glypican 3的肿瘤；优选的，所述肿瘤选自肝癌、卵巢癌、肺癌、黑色素瘤、胃癌或甲状腺癌。

19.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求15～16任一所述的嵌合抗原受体免疫细胞和药学上可接受的载体或辅料。

技术总结
本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种抗Glypican 3抗体及其应用，所述抗Glypican 3抗体代号为B6和B51，所述抗Glypican 3抗体包括重链可变区，所述抗Glypican 3抗体重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的CDR‑H1，如SEQ ID No.2所示的CDR‑H2和如SEQ ID No.3所示的CDR‑H3。所述抗Glypican 3抗体具备高亲和力和特异性，能够有效靶向肿瘤抗原Glypican 3，利用所述抗Glypican 3抗体制备嵌合抗原受体，并进一步制备嵌合抗原受体细胞，所述嵌合抗原受体细胞能够高效杀伤肿瘤细胞，且具备高特异性。

技术研发人员：狄升蒙,石磊,赵佐瞬,余学军,范艳秋,李照润
受保护的技术使用者：华道（上海）生物医药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14