一种用于制备三聚体融合蛋白的三聚体标签及其应用的制作方法

本发明涉及生物制药，尤其涉及一种用于制备三聚体融合蛋白的三聚体标签及其应用。

背景技术：

0、技术背景

1、trimer-tag(蛋白质三聚体化)技术可以将任意目的蛋白三聚体化，从而可以靶向天然依赖蛋白质三聚体化功能的一些靶点或者用于制备新型疫苗。使用trimer-tag技术平台能够获得稳定的共价连接的三聚体病毒抗原蛋白或者配体蛋白，但是trimer-tag三聚化蛋白主要针对一些天然构象为三聚化的目的蛋白，包括一些病毒蛋白(新冠s蛋白、呼吸合胞病毒和流感病毒等)和疾病生物学靶点(ox40、tnfsf和tl1a/dr3等)，目前其研发管线包括六种trimer-tagtm亚单位候选疫苗、四种trimer-tagtm肿瘤治疗候选产品以及三种fc融合蛋白候选产品。该技术开发的三聚体化蛋白对三聚体依赖性疾病靶点具有很强的有效性及良好的安全性，目前三聚体蛋白高度依赖trimer-tag技术，制备三聚体融合蛋白难以脱离该技术平台。

2、寻找新的三聚体标签用于三聚体蛋白，摆脱对trimer-tag的技术依赖，具有重要的研究价值。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中的问题，本发明的目的之一在于提供一种用于制备三聚体融合蛋白的三聚体标签，所述标签为ebolavirus gp或monofoil-4p，所述ebolavirus gp的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述monofoil-4p的氨基酸序列如seq id no.2所示。

2、本发明还提供一种多核苷酸，其编码如上所述的三聚体标签ebolavirus gp或编码三聚体标签monofoil-4p。

3、一种表达载体，其包含如上所述的多核苷酸。

4、一种宿主细胞，其包含如上所述的表达载体。

5、优选的，所述宿主细胞为表达外源蛋白的宿主细胞，如细菌、酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞等。

6、本发明还提供一种融合蛋白，其包括如上所述的ebolavirus gp或monofoil-4p任一项三聚体标签，以及连接在所述ebolavirus gp或monofoil-4p氨基酸序列n端的mbp标签。

7、本发明还提供三聚体标签ebolavirus gp或monofoil-4p在制备三聚体化目的蛋白中的应用或在制备三聚体重组蛋白疫苗中的应用。

8、本发明的有益效果在于：

9、本发明提供的两个三聚体标签ebolavirus gp和monofoil-4p，ebolavirus gp是针对埃博拉病毒gp2蛋白设计的一个n-三聚体肽，monofoil-4p是从头设计的一个蛋白，晶体结构显示其为三聚体形式。实验证明，两个三聚体标签均能够将目的蛋白三聚体化，从而可以靶向天然依赖蛋白质三聚体化功能的一些靶点或者用于制备新型疫苗。

技术特征：

1.一种用于制备三聚体融合蛋白的三聚体标签，其特征在于，所述标签为ebolavirusgp或monofoil-4p，所述ebolavirus gp的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述monofoil-4p的氨基酸序列如seq id no.2所示。

2.一种多核苷酸，其编码如权利要求1所述的三聚体标签ebolavirus gp或编码三聚体标签monofoil-4p；编码所述三聚体标签ebolavirus gp的多核苷酸序列如seq id no.3所示，编码所述三聚体标签monofoil-4p的多核苷酸序列如seq id no.4所示。

3.一种表达载体，其包含如权利要求2所述的任一种多核苷酸。

4.一种宿主细胞，其包含如权利要求3所述的表达载体。

5.如权利要求4所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为表达外源蛋白的宿主细胞，其选自细菌、酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞中的任意一种。

6.一种融合蛋白，其包含如权利要求1所述的ebolavirus gp或monofoil-4p任一项三聚体标签，以及连接在所述ebolavirus gp或monofoil-4p氨基酸序列n端的mbp标签。

7.如权利要求1所述的三聚体标签ebolavirus gp或monofoil-4p在制备三聚体化目的蛋白中的应用。

8.如权利要求1所述的三聚体标签ebolavirus gp或monofoil-4p在制备三聚体重组蛋白疫苗中的应用。

技术总结
本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及一种用于制备三聚体融合蛋白的三聚体标签及其应用。所述标签为Ebolavirus GP或Monofoil‑4P，所述Ebolavirus GP的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述Monofoil‑4P的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。实验证明，本发明提供的两个三聚体标签均能够将目的蛋白三聚体化，从而可以靶向天然依赖蛋白质三聚体化功能的一些靶点或者用于制备新型疫苗，具有广阔的应用前景。

技术研发人员：尚玉花,赵丹
受保护的技术使用者：安徽金百奥生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13