一种增强人卵巢癌顺铂耐药性的piRNA标志物及其在检测和治疗中的应用

本发明涉及生物工程，尤其涉及生物标志物在预测、诊断及治疗卵巢癌顺铂耐药中的应用。

背景技术：

1、卵巢癌是最致命的妇科恶性肿瘤，五年生存率仅为30-40％，其标准化疗方案为以铂类为基础的联合化疗方案，但大多数患者最终会面临化疗耐药的难题，预测甚至逆转卵巢癌铂类药物的耐药性对于提高患者临床疗效和预后具有十分重要的意义。有研究发现与piwi蛋白相互作用的rna(piwi-interacting rna,pirna)在恶性肿瘤的发生发展、耐药中发挥重要作用。公开号为cn108486247a的发明专利，涉及pirna-54265在结直肠癌的诊治和预后评价方面的应用。公开号为cn112646892b的发明专利，公开了pirna-651、pirna-17458和pirna-20485三者联合作为乳腺癌早期筛查及诊断标志物。目前没有pirna在卵巢癌铂类药物耐药性预测及靶向治疗应用的相关报道，寻找有效的标志物pirna作为卵巢癌铂类耐药的预测分子及靶向治疗的靶标，对提高患者的临床疗效具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是提供一种增强人卵巢癌顺铂耐药性的标志物pirna-1919609，能特异性区分卵巢癌顺铂耐药和敏感人群，还可作为卵巢癌靶向治疗的靶标，用于制备提高化疗疗效的辅助药物。

2、为了解决该技术问题，本发明通过以下技术方案实现：

3、一种增强人卵巢癌顺铂耐药的标志物pirna-1919609，核苷酸序列如seq id no.1所示，其反义序列如seq id no.2所示，通过使用bgiseq umi small rna测序对原发性卵巢癌组织标本、卵巢癌铂类耐药组织标本、卵巢癌铂类敏感组织标本和正常卵巢组织标本进行测序，通过交集筛选分析不同组间差异表达的pirna，并扩大组织标本验证，发现pirna-1919609在耐药细胞及耐药癌组织中差异表达最为显著，并发现上调pirna-1919609表达后卵巢癌细胞增殖能力增强、凋亡减弱，下调pirna-1919609表达能够改变卵巢癌对铂类药物的化疗敏感性。临床病理分析显示pirna-1919609高表达患者复发时间更短。

4、本发明的第一方面是提供一种增强人卵巢癌顺铂耐药性的标志物pirna-1919609，核苷酸序列如seq id no.1所示。

5、进一步，pirna-1919609作为抑制剂应用，有效核苷酸序列为原序列的反向互补序列即反义序列/反义链，以该序列为基础或作为有效成分，任何形式的修饰应用，均应受到保护，即seq id no.1-2所示序列及其应用均应在本发明的保护范围之内。

6、本发明的第二方面是提供pirna-1919609作为卵巢癌患者对铂类药物化疗敏感性评价标志物方面的应用。

7、优选地，标志物pirna-1919609应用于卵巢癌患者癌组织、血清、腹水、尿液标本，通过检测其表达水平从而预测对铂类药物的化疗敏感性。

8、本发明的第三方面是提供调控人卵巢癌对顺铂的耐药性、人卵巢癌凋亡通路、细胞周期、糖代谢、自噬等的药物或试剂。

9、优选地，所述产品包含有效剂量的pirna-1919609核苷酸类似物或其生物活性功能片段及变体，和/或干扰pirna-1919609表达的试剂，和/或干扰pirna-1919609调控的靶基因表达的试剂。

10、本发明的第四方面是提供治疗人卵巢癌药物、提高卵巢癌对铂类药物化疗效果的辅助药物或试剂。

11、优选地，所述产品包含有效剂量的pirna-1919609反义链或其生物活性功能片段及变体，和/或抑制pirna-1919609表达的药物或试剂，和/或干扰pirna-1919609调控的靶基因表达的药物或试剂。

12、本发明的第五方面是提供一种人卵巢癌铂类耐药诊断试剂，所述的人卵巢癌铂类耐药诊断试剂能够检测人卵巢癌样本中pirna-1919609表达或免疫检测方法检测pirna-1919609调控的靶基因的表达情况。

13、优选地，基于高通量测序和/或定量pcr和/或探针杂交方法检测卵巢癌患者癌组织、血清、腹水、尿液等体液标本中pirna-1919609表达或基于免疫方法检测上述样本中pirna-1919609调控的靶基因的表达情况，优选采用northern杂交方法、表达谱芯片、核酶保护分析技术、rake法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测上述样本中pirna-1919609表达；采用elisa和/或胶体金试纸条检测上述样本中pirna-1919609调控的靶基因的表达，从而评估患者对铂类药物的化疗敏感性。

14、优选地，用于荧光定量pcr的检测方法包含用于特异性检测pirna-1919609的引物，其逆转录引物如seq id no.3所示，正向引物序列如seq id no.4所示，反向引物如seqid no.5所示；基于探针杂交的检测方法包括与pirna-1919609的核酸序列杂交的探针；所述免疫检测方法包括与pirna-1919609调控基因表达蛋白特异性结合的抗体。

15、本发明的有益效果

16、本发明首次发现pirna-1919609核苷酸序列如seq id no.1所示，其反义序列如seq id no.2所示，并在正常卵巢组织及卵巢癌组织、铂敏感及铂耐药卵巢癌组织中差异表达，因此，pirna-1919609可以作为诊断卵巢癌铂类耐药的分子标志物，用以区分铂类药物敏感、铂类耐药的卵巢癌患者。敲低pirna-1919609的表达后能够抑制卵巢癌细胞的增殖、增强其对对顺铂的化疗敏感性并促进凋亡，因此，pirna-1919609可作为卵巢癌治疗靶点，并用于卵巢癌治疗和铂类化疗的辅助治疗药物，提高患者治疗效果，改善生存预后。

技术特征：

1.一种增强人卵巢癌顺铂耐药性的标志物pirna-1919609，其特征在于：所述标志物pirna-1919609的核苷酸序列如seq id no.1所示，核苷酸反义序列如seq id no.2所示。

2.按照权利要求1所述的标志物pirna-1919609作为卵巢癌患者预测铂类药物化疗敏感性评价标志物方面的应用。

3.按照权利要求1所述的标志物pirna-1919609应用于卵巢癌患者癌组织、血清、腹水、尿液标本，通过检测其表达水平从而预测对铂类药物的化疗敏感性。

4.按照权利要求1所述的标志物pirna-1919609用于制备一种调控人卵巢癌对顺铂的耐药性、人卵巢癌凋亡通路、细胞周期、糖代谢、自噬等的药物或试剂，其特征在于：包含有效剂量的pirna-1919609核苷酸类似物或其生物活性功能片段或变体和/或干扰pirna-1919609表达的试剂和/或干扰pirna-1919609调控的靶基因表达的试剂。

5.按照权利要求1所述的标志物pirna-1919609用于制备治疗人卵巢癌药物、提高卵巢癌化疗效果的辅助药物或试剂，其特征在于：包含有效剂量的pirna-1919609反义核苷酸链或其生物活性功能片段及变体，和/或抑制pirna-1919609表达的药物或试剂，和/或干扰pirna-1919609调控的靶基因表达的药物或试剂。

6.按照权利要求1所述的标志物pirna-1919609用于制备人卵巢癌铂类耐药诊断试剂，其特征在于：所述人卵巢癌铂类耐药诊断试剂能够检测人卵巢癌样本中pirna-1919609表达或免疫检测方法检测pirna-1919609调控的靶基因的表达情况。

7.按照权利要求6所述的人卵巢癌铂类耐药诊断试剂，其特征在于：基于高通量测序和/或定量pcr和/或探针杂交方法检测卵巢癌患者癌组织、血清、腹水、尿液标本中pirna-1919609表达或基于免疫方法检测上述样本中pirna-1919609调控的靶基因的表达情况，采用northern杂交方法、表达谱芯片、核酶保护分析技术、rake法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测上述样本中pirna-1919609表达；采用elisa和/或胶体金试纸条检测上述样本中pirna-1919609调控的靶基因的表达。

8.按照权利要求6所述的人卵巢癌铂类耐药诊断试剂，其特征在于：所述的基于荧光定量pcr的检测方法包含用于特异性检测pirna-1919609的引物，其逆转录引物如seq idno.3所示，正向引物序列如seq id no.4所示，反向引物如seq id no.5所示；所述的基于探针杂交的检测方法包括与pirna-1919609的核苷酸序列杂交的探针；所述免疫检测方法包括与pirna-1919609调控基因表达的蛋白特异性结合的抗体。

技术总结
本发明公开了一种增强人卵巢癌顺铂耐药性的标志物piRNA‑1919609，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸反义序列如SEQ ID NO.2所示；在卵巢癌耐药组织中高表达并在卵巢癌细胞系中具有促进顺铂耐药的作用，因此piRNA‑1919609可作为预测卵巢癌化疗敏感性的生物标志物及靶向药物靶点，从而为卵巢癌耐药的预测和治疗提供新思路。

技术研发人员：阳志军,周露,田丹,赵冰冰,李状,俸艳英
受保护的技术使用者：广西医科大学附属肿瘤医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15