草莓尖孢镰刀菌PCR检测引物及其应用

本发明属于分子生物学，具体涉及一种草莓尖孢镰刀菌pcr检测引物及其应用。

背景技术：

1、草莓又名红莓、洋莓、地莓等，是蔷薇科草莓属、多年生宿根性草本植物，在园艺学中又将其划归为浆果类。草莓中的维生素c、铁、钙和磷的含量高于其他日常所见到的水果，具有较高的营养价值，草莓中所含的鞣花酸对食管癌、肝癌等常见癌症有很好的抑制作用，具有临床医疗价值，是美容养颜，防癌治癌的保健佳品，有着“水果皇后”的美称。草莓备受人们的青睐，所以也成为了重要的经济种植作物之一，它原产于南美洲，在欧洲的意大利、俄罗斯、波兰等多个国家以及我国丹东市、保定市、江苏句容市均有较大的种植面积。

2、近年来，随着人民生活质量的提高、消费水平的上升和大棚栽培技术的推广，使得草莓在我国的种植地域与种植面积有显著的增加。但随着种植年限与面积的增加，土壤污染以及土传病原真菌对草莓种植业的影响日渐明显，严重威胁着草莓的产量和品质。草莓的产量和品质受多种因素制约，其中包括主要的土传病害如根腐病、黄枯病、叶斑病以及炭疽病等，这些病害的存在对草莓均有较大的影响。多个研究表明，尖孢镰刀菌、新拟盘多毛孢等多达20种的病原真菌均可导致草莓感染根腐病。顾容榕等人在研究中指出，东北地区70％的草莓根腐病是由暹罗炭疽菌造成的；熊仕俊等人通过研究表明，引起贵州省草莓根腐病的病原菌主要为锐顶镰刀菌；在保定和兰州等地，尖孢镰刀菌、疫霉菌和新拟盘多毛孢是引起根腐病的主要病原菌。

3、土传病害病原真菌鉴定技术包括培养基菌落平板稀释法、免疫学诊断技术、常规pcr检测、实时荧光定量pcr检测、高通量测序技术；培养基菌落平板稀释法、免疫学诊断技术实验繁琐，不适合田间地块土样的快速测定，实时荧光定量pcr检测、高通量测序技术虽然测定准确，并且能定量，但检测试剂昂贵，也不适合简单常规的测定需要，常规pcr检测检测准确、快速，是一种适合的方法，目前，还未有草莓尖孢镰刀菌pcr检测的相关报道。草莓根腐病是重要的土传病害，本实验前期对土壤以及草莓病株中的病原菌进行初步检测，判断致病菌为尖孢镰刀菌，根腐病一旦大规模爆发，无快速有效方法应对，所以探究早期检测及防治技术非常关键，若早期检测技术成熟，会更大可能的减少土传病害对农作物的破坏。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种草莓尖孢镰刀菌pcr检测引物，能够在土壤中或植株幼苗时期就可以快速检测出尖孢镰刀菌。

2、一种草莓尖孢镰刀菌pcr检测引物，所述检测引物的核苷酸序列如序列表seq idno：1和seq id no：2所示。

3、所述草莓尖孢镰刀菌pcr检测引物扩增的序列如序列表seq id no：3所示。

4、所述扩增的序列来自a3817基因，表达a3817分泌蛋白。

5、所述草莓尖孢镰刀菌pcr检测引物在鉴定草莓早期根腐病中的应用。

6、本发明的有益效果：本发明使用primer premier 6软件进行引物设计，根据引物设计原则设置合适的引物pcr扩增条件，共得到六对特异性引物，最后挑选出最优的一对引物作为最终实验材料，并根据此对引物进行pcr扩增和凝胶电泳检测后对条带进行分析，最终证明该对引物具有良好的特异性，可以作为检测尖孢镰刀菌的引物；通过对田间土壤以及实验室种苗dna提取后进行验证实验，结果表明了该对特异性引物具有应用可行性。该实验在对预警种苗病害、检测土壤病原物、对草莓生长期病害的发生进行跟踪监测等方面具有重要研究价值，并且在草莓大棚土壤消毒效果评价和草莓种苗尖孢镰刀菌检测上具有一定应用前景。

技术特征：

1.一种草莓尖孢镰刀菌pcr检测引物，其特征在于，所述检测引物的核苷酸序列如序列表seq id no：1和seq id no：2所示。

2.根据权利要求1所述草莓尖孢镰刀菌pcr检测引物，其特征在于，所述草莓尖孢镰刀菌pcr检测引物扩增的序列如序列表seq id no：3所示。

3.根据权利要求2所述草莓尖孢镰刀菌pcr检测引物，其特征在于，所述扩增的序列来自a3817基因，表达a3817分泌蛋白。

4.权利要求1所述草莓尖孢镰刀菌pcr检测引物在鉴定草莓早期根腐病中的应用。

技术总结
本发明公开了草莓尖孢镰刀菌PCR检测引物及其应用。所述检测引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。本发明的对引物具有良好的特异性，可以作为检测尖孢镰刀菌的引物；通过对田间土壤以及实验室种苗DNA提取后进行验证实验，结果表明了该对特异性引物具有应用可行性。该实验在对预警种苗病害、检测土壤病原物、对草莓生长期病害的发生进行跟踪监测等方面具有重要研究价值，并且在草莓大棚土壤消毒效果评价和草莓种苗尖孢镰刀菌检测上具有一定应用前景。

技术研发人员：赵闫康,靳茜
受保护的技术使用者：保定学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13