黄芪甲苷的提取测定和应用

本发明涉及中药提取，尤其是涉及黄芪甲苷的提取和应用。

背景技术：

1、黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪干燥的根。黄芪始载于《神农本草经》，黄芪性味甘、微温，归脾、肺经，为补气要药。中医认为，黄芪能补一身之气，兼有升阳，固表止汗，排脓生肌，利水消肿，安胎益血的作用。对于贫血、浮肿、体虚多汗、胎动不安、子宫脱垂、气血两亏、阴虚不足等都有卓著的疗效。

2、黄芪主要含有多糖、黄酮类化合物及三萜皂苷，其中黄芪的主要活性成分为黄芪皂苷，而黄芪甲苷为黄芪皂苷的主要成分。黄芪甲苷对于小鼠t，b淋巴细胞的增殖以及抗体生成有着重要的促进功能，能够体现出对细毛免疫以及促进细胞发展的作用。其次黄芪甲苷也可以抑制肿瘤增殖、侵袭、促进肿瘤细胞凋亡，另一方面在多药耐药及调节免疫抗瘤方面也具有显著效果。黄芪甲苷具有抗脏器纤维化作用，可以通过多种生长因子、细胞因子和多条细胞信号通路等共同参与、相互作用参与抗纤维化。黄芪甲苷可通过多种信号传导途径发挥多种药理作用，包括抗炎，抗纤维化，抗氧化应激，抗哮喘，抗糖尿病，免疫调节和心脏保护作用。

3、黄芪甲苷是黄芪的主要功效成分，亦是黄芪检测的标志物。总观黄芪甲苷的提取方法主要有水提取酸沉淀法、超声法、超滤法、醇提取酸沉淀法、微波提取法等，而常用的为水提取酸沉淀法。黄芪甲苷常作为药物制剂中主要的功效成分，因此，聚焦于分析黄芪甲苷提取最优化、检测及发挥作用机理进行探究是非常必要的。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种黄芪甲苷的提取方法，本发明的提取方法提取率高，同时提取物对于结肠癌细胞的凋亡有较强的抑制作用。

2、本发明提供了一种黄芪甲苷的提取方法，包括如下步骤：

3、a)待测样品采用饱和正丁醇萃取，得到正丁醇相；

4、b)将正丁醇相依次采用碱液洗涤、饱和正丁醇洗涤，蒸干溶剂，析出得到晶体；

5、c)晶体水溶液采用spe柱净化，即得。

6、优选的，步骤a)所述萃取次数为2～4次。

7、优选的，步骤a)所述待测样品和饱和正丁醇质量体积比为1g:40～60(ml)。

8、优选的，步骤b)所述碱液为氢氧化钠溶液；所述碱液的浓度为1wt％～1.5wt％。

9、优选的，步骤b)所述碱液洗涤的次数为1～2次；所述饱和正丁醇洗涤的次数为1～2次。

10、优选的，步骤c)所述采用spe柱净化具体为：晶体水溶液上样后，采用甲醇洗脱。

11、优选的，步骤a)待测样品为黄芪水提物；所述黄芪水提物的制备方法具体为：黄芪采用水进行煎煮得到。

12、优选的，所述黄芪采用水的质量比为1：(8～12)；所述提取的时间为1～2h；所述提取的次数为1～3次。

13、本发明提供了一种黄芪甲苷提取物，由上述技术方案任意一项所述的方法提取得到。

14、本发明提供了上述的黄芪甲苷提取物在制备治疗结肠癌细胞凋亡抑制剂中的应用。

15、与现有技术相比，本发明提供了一种黄芪甲苷的提取方法，包括如下步骤：a)待测样品采用饱和正丁醇萃取，得到正丁醇相；b)将正丁醇相依次采用碱液洗涤、饱和正丁醇洗涤，蒸干溶剂，析出得到晶体；c)晶体水溶液采用spe柱净化，即得。本发明采用上述饱和正丁醇萃取结合特定洗涤方式等最终使得黄芪甲苷的提取率高，同时高效液相色谱法对黄芪甲苷进行定性定量测定，此外，检测了黄芪甲苷提取物在细胞中的疗效，结果表示此黄芪甲苷提取物结肠癌细胞的凋亡有较强的抑制作用。

技术特征：

1.一种黄芪甲苷的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)所述萃取次数为2～4次。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)所述待测样品和饱和正丁醇质量体积比为1g:40～60(ml)。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b)所述碱液为氢氧化钠溶液；所述碱液的浓度为1wt％～1.5wt％。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b)所述碱液洗涤的次数为1～2次；所述饱和正丁醇洗涤的次数为1～2次。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)所述采用spe柱净化具体为：晶体水溶液上样后，采用甲醇洗脱。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)待测样品为黄芪水提物；所述黄芪水提物的制备方法具体为：黄芪采用水进行煎煮得到。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述黄芪采用水的质量比为1：(8～12)；所述提取的时间为1～2h；所述提取的次数为1～3次。

9.一种黄芪甲苷提取物，其特征在于，由权利要求1～8任意一项所述的方法提取得到。

10.权利要求9所述的黄芪甲苷提取物在制备治疗结肠癌细胞凋亡抑制剂中的应用。

技术总结
本发明提供了一种黄芪甲苷的提取方法，包括如下步骤：A)待测样品采用饱和正丁醇萃取，得到正丁醇相；B)将正丁醇相依次采用碱液洗涤、饱和正丁醇洗涤，蒸干溶剂，析出得到晶体；C)晶体水溶液采用SPE柱净化，即得。本发明采用上述饱和正丁醇萃取结合特定洗涤方式等最终使得黄芪甲苷的提取率高，同时对所提取到的黄芪甲苷进行了定性定量检测，通过对黄芪甲苷方法的线性范围、检出限、重复性和准确度的评价，确认此测定方法准确性和可靠性，可用于药物制剂样品含量测定中的黄芪甲苷的测定。此外，对于提取得到的黄芪甲苷进行细胞活力分析，发现对于结肠癌细胞的凋亡有较强的抑制作用。

技术研发人员：刘国彦,段林杉,李茵,王丹,刘艳玲,丁晨淳
受保护的技术使用者：厦门大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15