与食道鳞状细胞癌相关的诊断标志物及其应用的制作方法

本申请属于分子生物学，尤其涉及一种与食道鳞状细胞癌相关的诊断标志物及其应用。

背景技术：

1、食管癌(esophageal carcinoma)是常见的消化道肿瘤，在特定地理位置和某些种族中患病率较高。食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,escc)约占全球食管癌病例的80％，在东亚和非洲若干地区的发病率尤其高。escc平均5年的生存率在10～41％之间，这种不良预后源于食管中存在广泛的淋巴网络，加上缺乏保护性浆膜，导致早期区域性肿瘤进展和转移。此外，escc患者在早期阶段通常无症状，这样容易导致诊断延迟。

2、目前，escc的诊断方法包括内窥镜检测和非内窥镜检测。内窥镜检测包括常规白光内窥镜检查、色素内窥镜检查、内窥镜检查和窄带成像、经鼻内镜检查、内吞镜检查等。不同内镜检查的检测条件各不相同，且内镜检查最大的缺点是只能用于晚期分化食管癌检测，对早起食管癌的判断效益差。非内窥镜检测方法包括血液中自身抗体、循环肿瘤细胞(ctc)等筛查。基于食管鳞状发育不良的证据更为有限，因此用于筛查食管癌的自身抗体还远未临床应用，而循环肿瘤细胞的存在预示着进入癌症疾病晚期，因此循环肿瘤细胞检测不是早期癌症的合适筛查方式。

3、微小rna(mirna)是一类小的非编码rna，长度约为20～25个核苷酸，通过转录干扰下游靶基因mrna的翻译抑制来调节基因表达。mirna参与大多数生物学事件，包括人类癌症如escc的肿瘤发生。由于mirna在体液中的稳定性和高丰度，以及在各种生物条件下的独特表达谱，循环mirna正在成为非侵入性“液体活检”方法的有吸引力的候选者。

技术实现思路

1、本申请的目的在于提供一种食道鳞状细胞癌相关的诊断标志物及其应用，旨在解决如何更好地提高食道鳞状细胞癌检测的敏感度和特异性的技术问题。

2、为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：

3、第一方面，本申请提供一种与食道鳞状细胞癌相关的诊断标志物，包括hsa-mir-26a-5p、hsa-mir-151a-3p、hsa-mir-181a-5p以及hsa-mir-320a-3p。

4、本申请实施例提供一组针对食道鳞状细胞癌的诊断标志物，具体是血清microrna，包括hsa-mir-26a-5p、hsa-mir-151a-3p、hsa-mir-181a-5p以及hsa-mir-320a-3p。通过对该组诊断标志物表达水平进行体外检测，可以诊断食道鳞状细胞癌，而且具有很好的敏感度和特异性，在食道鳞状细胞癌的诊断领域中具有很好的应用。

5、第二方面，本申请实施例提供一种检测本申请实施例第一方面的诊断标志物的试剂在制备食道鳞状细胞癌诊断产品中的应用。

6、基于针对包括hsa-mir-26a-5p、hsa-mir-151a-3p、hsa-mir-181a-5p以及hsa-mir-320a-3p的诊断标志物的表达水平进行体外检测，可以诊断食道鳞状细胞癌，而且具有很好的敏感度和特异性，因此，检测上述诊断标志物的试剂可以用于制备食道鳞状细胞癌诊断产品。

7、在一些实施例中，试剂包括：

8、检测hsa-mir-26a-5p的第一逆转录引物，以及第一扩增引物对和第一探针；

9、检测hsa-mir-151a-3p的第二逆转录引物，以及第二扩增引物对和第二探针；

10、检测hsa-mir-181a-5p的第三逆转录引物，以及第三扩增引物对和第三探针；

11、检测hsa-mir-320a-3p的第四逆转录引物，以及第四扩增引物对和第四探针。

12、针对与食道鳞状细胞癌相关的四种血清microrna，设计相应的逆转录引物和扩增引物和探针，从而实现检测。

13、在一些实施例中，试剂还包括：阳性质控品和阴性质控品。

14、阳性质控品检测结果为阳性，阴性质控品检测结果为阴性；利用阴性质控品可以排除试剂或环境污染导致的假阳性结果，而阳性质控品能监测试剂性能或人员操作是否正常，用来排除假阴性结果。

15、在一些实施例中，食道鳞状细胞癌诊断产品包括诊断试剂盒。

16、通过诊断试剂盒能对人体体液、血液等样品进行检测，从而实现对与食道鳞状细胞癌相关的上述诊断标志物检测。

17、第三方面，本申请实施例提供一种针对食道鳞状细胞癌的诊断产品，包括检测本申请实施例第一方面的诊断标志物的试剂。

18、基于针对包括hsa-mir-26a-5p、hsa-mir-151a-3p、hsa-mir-181a-5p以及hsa-mir-320a-3p的诊断标志物的表达水平进行体外检测，可以诊断食道鳞状细胞癌，而且具有很好的敏感度和特异性，因此，包括检测上述诊断标志物的试剂的诊断产品可以用于食道鳞状细胞癌。

19、在一些实施例中，试剂包括：

20、检测hsa-mir-26a-5p的第一逆转录引物，以及第一扩增引物对和第一探针；

21、检测hsa-mir-151a-3p的第二逆转录引物，以及第二扩增引物对和第二探针；

22、检测hsa-mir-181a-5p的第三逆转录引物，以及第三扩增引物对和第三探针；

23、检测hsa-mir-320a-3p的第四逆转录引物，以及第四扩增引物对和第四探针。

24、针对与食道鳞状细胞癌相关的四种血清microrna，诊断产品中包括了设计相应的逆转录引物和扩增引物和探针，从而实现检测。

25、在一些实施例中，试剂还包括：阳性质控品和阴性质控品。

26、阳性质控品检测结果为阳性，阴性质控品检测结果为阴性；利用阴性质控品可以排除试剂或环境污染导致的假阳性结果，而阳性质控品能监测试剂性能或人员操作是否正常，用来排除假阴性结果。

27、在一些实施例中，诊断产品包括诊断试剂盒。

28、诊断试剂盒能对人体体液、血液等样品进行检测，从而实现对与食道鳞状细胞癌相关的上述诊断标志物检测。

29、在一些实施例中，诊断试剂盒还包含回归模型：logit(p)＝k1×(ct(hsa-mir-181a-5p)－ct(hsa-mir-151a-3p))+k2×(ct(hsa-mir-26a-5p)－ct(hsa-mir-320a-3p))+k3。

30、基于诊断试剂盒中的上述回归模型，可以得到，logit(p)越大，食道鳞状细胞癌的风险越大。

技术特征：

1.一种与食道鳞状细胞癌相关的诊断标志物，其特征在于，包括hsa-mir-26a-5p、hsa-mir-151a-3p、hsa-mir-181a-5p以及hsa-mir-320a-3p。

2.检测如权利要求1所述的诊断标志物的试剂在制备食道鳞状细胞癌诊断产品中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括：

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂还包括：阳性质控品和阴性质控品。

5.如权利要求2-4任一项所述的应用，其特征在于，所述食道鳞状细胞癌诊断产品包括诊断试剂盒。

6.一种针对食道鳞状细胞癌的诊断产品，其特征在于，包括检测如权利要求1所述的诊断标志物的试剂。

7.如权利要求6所述的诊断产品，其特征在于，所述试剂包括：

8.如权利要求6所述的诊断产品，其特征在于，所述试剂还包括：阳性质控品和阴性质控品。

9.权利要求6-8任一项所述的诊断产品，其特征在于，所述诊断产品包括诊断试剂盒。

10.如权利要求9所述的诊断产品，其特征在于，所述诊断试剂盒还包含回归模型：logit(p)＝k1×(ct(hsa-mir-181a-5p)－ct(hsa-mir-151a-3p))+k2×(ct(hsa-mir-26a-5p)－ct(hsa-mir-320a-3p))+k3；其中，k1取值-1.0～4.0，k2取值-1.0～2.0，k3取值30～50。

技术总结
本申请涉及属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种与食道鳞状细胞癌相关的诊断标志物及其应用。与食道鳞状细胞癌相关的诊断标志物包括：hsa‑miR‑26a‑5p、hsa‑miR‑151a‑3p、hsa‑miR‑181a‑5p以及hsa‑miR‑320a‑3p。通过对该组诊断标志物表达水平进行体外检测，可以诊断食道鳞状细胞癌，而且具有很好的敏感度和特异性，因此，在食道鳞状细胞癌的诊断领域中具有很好的应用。

技术研发人员：徐涛,傅华阳,巫丽花,王先超
受保护的技术使用者：晶准生物医学（深圳）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15