miR-9及其类似物在制备诊断和/或治疗细胞炎症的药物中的应用

本发明属于分子检测，具体涉及mir-9及其类似物在制备诊断和/或治疗细胞炎症的药物中的应用。

背景技术：

1、microrna(mirna)是一种小的非编码rna，能够对细胞生长、分化和发病机制相关的基因表达进行转录后调控。研究发现，microrna-9(mir-9)靶向炎症趋化因子受体cxcr4，通过与cxcr4的c-x-c基序相互作用，介导相关信号通路，能够抑制高糖诱导的人脐静脉内皮损伤过程中的细胞凋亡。相反地，由链脲佐菌素诱导糖尿病的小鼠模型中，mir-9在肾小球足细胞表达水平会下降。这些发现表明了mir-9可能与肾小球足细胞损伤存在相关性。此外，据报道，cxcr4能提高硫氧还蛋白互作蛋白(txnip)和nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nlrp3)的表达水平，从而影响下游炎性因子的分泌。敲除cxcr4可降低txnip水平，体现txnip是cxcr4信号传导的下游效应蛋白。综上所述，cxcr4可能通过调控txnip/nlrp3炎性小体信号轴触发炎症反应。

2、黄曲霉毒素b1(afb1)属于真菌次级代谢物，是最常见的环境致癌物，被国际癌症研究机构(iarc)列为人类i类致癌物，危害性极强。尽管afb1经肝微粒体酶代谢，但残留部分则由肾脏排泄，表明afb1必然会是诱导肾功能性障碍的重要原因之一。由此可见，明确afb1诱导肾脏炎症的具体分子机制迫在眉睫。以前人的研究结果为基础，mir-9下调能否通过cxcr4/txnip/nlrp3炎性小体通路参与afb1诱导的肾小球足细胞炎症，仍有待阐明。rela(又称p65)是nf-κb的一个亚基，由p105前体和p52衍生的转录因子，它与nf-κb亚单位p50结合形成rela-p50异源二聚体，用于核易位，并在代谢障碍、肿瘤发生、病毒感染等方面发挥重要作用。已有研究发现，rela还参与调控mirna的基因表达。但是，rela是否参与了调控mir-9的表达，进而导致afb1诱导的肾小球足细胞炎症，还有待继续探索。因此，尽早地研发出靶向性强，有效且合适的治疗药物及诊断试剂是目前面对afb1诱导肾小球足细胞炎症的首要措施。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供mir-9及其类似物在制备诊断和/或治疗细胞炎症的药物中的应用，明确mir-9与趋化因子受体cxcr4的关系，并在体外和体内模型中发现mir-9的低表达与afb1诱导的肾小球足细胞炎症密切相关。

2、本发明提供了一种增加mir-9和/或mir-9类似物的含量或表达量的试剂在制备诊断和/或治疗细胞炎症的工具中的应用。

3、优选的，所述增加mir-9和/或mir-9类似物的含量或表达量的试剂包括以下至少一种：恢复mir-9表达的试剂、mir-9类似物、包含mir-9的表达载体和mir-9激动剂。

4、优选的，所述mir-9类似物的引物包括核苷酸序列如seq id no.45所示的上游引物和seq id no.46所示的下游引物。

5、优选的，所述细胞炎症包括afb1诱导的细胞炎症。

6、优选的，所述治疗包括以下至少一项：(1)拮抗afb1诱导的rela和e3泛素连接酶trim7的相互作用；

7、(2)沉默e3泛素连接酶trim7的表达；

8、(3)拮抗趋化因子受体cxcr4/txnip/nlrp3信号轴诱导细胞炎症；

9、(4)恢复或增加转录因子rela的表达；

10、(5)抑制转录因子rela泛素化降解；

11、(6)抑制cxcr4基因表达。

12、本发明还提供了一种诊断afb1诱导细胞炎症的试剂，包括检测mir-9的表达量的试剂。

13、优选的，还包括检测rela、trim7和cxcr4/txnip/nlrp3信号轴相关分子的表达量的试剂。

14、优选的，所述细胞炎症包括肾小球足细胞炎症。

15、优选的，所述检测mir-9的表达量包括检测基因表达量、mrna表达量或蛋白质表达量。

16、本发明还提供了一组测定mir-9表达量的引物，包括核苷酸序列如seq idno.3所示的上游引物和seq id no.4所示的下游引物。

17、有益效果：本发明提供了一种增加mir-9和/或mir-9类似物的含量或表达量的试剂在制备诊断和/或治疗细胞炎症的工具中的应用。本发明中，mir-9可以通过抑制其靶基因趋化因子受体cxcr4的表达，调控txnip/nlrp3信号轴诱导肾小球足细胞炎症；afb1能够促进rela和e3泛素连接酶trim7相互作用，增加转录因子rela泛素化降解，继而下调mir-9的表达，从而调控其对cxcr4的抑制作用。因此，恢复mir-9的表达可以拮抗上游信号，阻断炎症反应的发生；或者设计并合成mir-9的类似物(mimics)，或通过载体表达mir-9，同样可以抑制afb1对肾小球足细胞的促炎作用。

技术特征：

1.一种增加mir-9和/或mir-9类似物的含量或表达量的试剂在制备诊断和/或治疗细胞炎症的工具中的应用。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述增加mir-9和/或mir-9类似物的含量或表达量的试剂包括以下至少一种：恢复mir-9表达的试剂、mir-9类似物、包含mir-9的表达载体和mir-9激动剂。

3.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述mir-9类似物的引物包括核苷酸序列如seq id no.45所示的上游引物和seq id no.46所示的下游引物。

4.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述细胞炎症包括afb1诱导的细胞炎症。

5.根据权利要求1或4所述应用，其特征在于，所述治疗包括以下至少一项：(1)拮抗afb1诱导的rela和e3泛素连接酶trim7的相互作用；

6.一种诊断afb1诱导细胞炎症的试剂，其特征在于，包括检测mir-9的表达量的试剂。

7.根据权利要求6所述试剂，其特征在于，还包括检测rela、trim7和cxcr4/txnip/nlrp3信号轴相关分子的表达量的试剂。

8.根据权利要求6或7所述试剂，其特征在于，所述细胞炎症包括肾小球足细胞炎症。

9.根据权利要求6或7所述试剂，其特征在于，所述检测mir-9的表达量包括检测基因表达量、mrna表达量或蛋白质表达量。

10.一组测定mir-9表达量的引物，其特征在于，包括核苷酸序列如seq idno.3所示的上游引物和seq id no.4所示的下游引物。

技术总结
本发明公开了miR‑9及其类似物在制备诊断和/或治疗细胞炎症的药物中的应用，属于分子检测技术领域。本发明提供了一种增加miR‑9和/或miR‑9类似物的含量或表达量的试剂在制备诊断和/或治疗细胞炎症的工具中的应用。本发明AFB1能够促进RelA和E3泛素连接酶TRIM7相互作用，增加转录因子RelA泛素化降解，继而下调miR‑9的表达，从而调控其对CXCR4的抑制作用。因此，恢复miR‑9的表达可以拮抗上游信号，阻断炎症反应的发生；或者设计并合成miR‑9的类似物，或通过载体表达miR‑9，同样可以抑制AFB1对肾小球足细胞的促炎作用。

技术研发人员：吴文达,徐宝才,秦子慧,张杰,李图帅,孟笑杰
受保护的技术使用者：合肥工业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15