一种具有抗炎活性的化合物及其提取分离方法和应用与流程

本发明属于中医药，具体为一种具有抗炎活性的化合物及其提取分离方法和应用。

背景技术：

1、二色补血草(limonium bicolor(bunge.)kuntze)是白花丹科补血草属植物，别名燎眉蒿、补血草、扫帚草、匙叶草、血见愁、秃子花、苍蝇花等。二色补血草的药用部位为其干燥根或全草，具有补气血、健脾胃和活血止血的功效，主治病后体弱、胃脘痛、消化不良、月经不调、崩漏、带下和尿血等症。现代药理学研究表明，二色补血草具有补血止血、抗菌、抗氧化和抗肿瘤等活性。

2、目前临床上常用的抗炎药主要有两类：非甾体抗炎药和甾体类抗炎药。虽然这两类抗炎药都有很好的临床应用效果，但长期大量使用均会产生一系列不良反应或副作用，如胃粘膜损伤、肝脏损伤、肾脏损害等，应用时间长亦可产生耐受性。因此寻找新的高效低毒的抗炎药物仍将是抗炎药物研究的热点领域。

3、小胶质细胞(bv-2)作为中枢神经系统内的免疫细胞，既可通过吞噬脑组织中的病原体及有害颗粒对神经元起保护作用，又可在致炎因子的作用下，激活成反应性小胶质细胞，分泌炎性细胞因子对神经元起毒性作用，是治疗神经炎症及神经退行性疾病的一个重要靶点。

4、巨噬细胞(raw264.7)是一种组织内的白血球，源自单核细胞，巨噬细胞和单核细胞皆为吞噬细胞，在机体内参与非特异性防卫和特异性防卫(细胞免疫)，它们的主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用(即吞噬以及消化)，并激活淋巴球或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应。巨噬细胞和小胶质细胞能够被多种炎症性因子所激活，如细胞因子、细菌脂多糖lps、细胞外基质蛋白以及其他化学介质等。lps是十分重要的致炎因子，它能够刺激体内的巨噬细胞和小胶质细胞合成和释放多种内源性活性因子，进而诱发炎症。

5、江西中医药大学申请的公开号为cn111281921a发明专利申请公开了一种治疗感冒、肺炎、肠炎、肾炎的肺形草银翘解毒消炎组合物，发挥了中医药治疗肺炎并伴有肠炎和肾炎辩证论治、病证结合的特点与优势，提供了一种治疗感冒、肺炎、肠炎、肾炎的肺形草银翘解毒消炎组合物的制备方法及其在制备治疗感冒、肺炎、肠炎、肾炎药物中的应用，提供了肺形草银翘解毒消炎组合物新的制备工艺及其具体新用途和新功效。

6、目前，国内外学者对中药二色补血草的研究主要是提取物，对其所含化学成分的具体药理活性研究较少，多与其他药材配伍使用，成分复杂，其作用机制尚不明确，较少见有关二色补血草成分抗炎的相关文献，因此，从分离鉴定其中的单体化合物入手，找到其发挥各药效的有效成分，以便进行深入的研究与开发利用，是具有十分重要意义的。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供一种具有抗炎活性的新化合物及其在制备抗炎药物中的应用。用这种方法制备的该化合物具有抑制lps诱导的raw264.7、bv-2细胞中no的释放，显示良好的抗炎活性，可用于开发抗炎的相关药物。

2、为了达到本发明的上述目的，本发明采用的具体技术方案为：

3、一种具有抗炎活性的新化合物，其结构式如下：

4、

5、本发明还涉及一种具有抗炎活性的化合物的提取分离方法，包括以下步骤：

6、(1)将二色补血草粉碎，用醇溶剂提取，萃取，浓缩，得浸膏；

7、(2)将浸膏经硅胶柱色谱1分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，浓缩，得组分a；

8、(3)将组分a经硅胶柱色谱2分离，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，浓缩，得组分b；

9、(4)将组分b经半制备色谱分离，即得化合物。

10、优选地，步骤(1)中所述醇溶剂的质量浓度为70％-90％；所述醇溶剂与二色补血草的质量比为8-15：1；所述提取为回流提取，提取次数为1-3次，每次提取1-3小时。

11、优选地，步骤(1)中所述萃取为依次用石油醚和二氯甲烷萃取，萃取次数分别为1-3次；所述浸膏为二氯甲烷层浸膏。

12、优选地，步骤(2)中所述硅胶柱色谱1中硅胶粒度为200-300目；所述浸膏与硅胶的质量比为1:10-20；所述梯度洗脱为依次用体积比为100:0、(98.5-99.5):(0.5-1.5)、(96.5-97.5):(2.5-3.5)、(94.5-95.5):(4.5-5.5)的氯仿-甲醇混合溶液洗脱，每个梯度洗脱4-6个保留体积，合并(96.5-97.5):(2.5-3.5)洗脱部位。

13、优选地，步骤(3)中所述硅胶柱色谱2中硅胶粒度为300-400目；所述组分a与硅胶的质量比为1:40-60；所述梯度洗脱为依次用体积比为100:0、(94-96):(4-6)、(89-91):(9-11)、(84-86):(14-16)、(79-81):(19-21)、(74-76):(24-26)和0:100的石油醚-乙酸乙酯混合溶液洗脱，合并0:100洗脱部位。

14、优选地，步骤(4)所述色谱中的填料为为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-水溶液。

15、优选地，步骤(4)中所述分离条件为：甲醇:水(v:v)＝(35-45):(55-65)，流速0.8-1.2ml/min，柱温22-28℃，吸收波长为205-215nm和249-259nm，所述化合物的保留时间tr＝6.5-7.5min。

16、进一步优选地，所述分离条件为甲醇:水(v:v)＝40:60、流速1ml/min、柱温25℃、吸收波长为210nm和254nm，所述化合物的保留时间tr＝7.15min。

17、本发明还涉及上述具有抗炎活性的化合物或上述提取分离方法得到的化合物在制备抗炎产品中的应用。

18、与现有技术相比，本发明的有益效果：

19、(1)本发明中所述二色补血草新化合物的分离和药理活性研究未被现有论文期刊所报道；

20、(2)本发明提供来源于二色补血草的新化合物及一种针对本发明新化合物的提取分离方法，采用醇提取、硅胶柱层析和hplc进行分离纯化与制备，成功提取分离出新的化合物，该方法操作步骤仅为四步，操作方法简便及快速，且经该方法分离得到的化合物纯度较高，均大于96.0％；

21、(3)本发明中的化合物具有显著的抗炎活性，因此本发明新化合物及其衍生物可以作为其他化合物合成先导物，以及新药开发和药理活性研究的原料，亦可用于制备抗炎等药物。

技术特征：

1.一种具有抗炎活性的化合物，其结构式如下：

2.一种如权利要求1所述的化合物的提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的提取分离方法，其特征在于，步骤(1)中所述醇溶剂的质量浓度为70％-90％；所述醇溶剂与二色补血草的质量比为8-15：1；所述提取为回流提取，提取次数为1-3次，每次提取1-3小时。

4.根据权利要求2所述的提取分离方法，其特征在于，步骤(1)中所述萃取为依次用石油醚和二氯甲烷萃取，萃取次数分别为1-3次；所述浸膏为二氯甲烷层浸膏。

5.根据权利要求2所述的提取分离方法，其特征在于，步骤(2)中所述硅胶柱色谱1中硅胶粒度为200-300目；所述浸膏与硅胶的质量比为1:10-20；所述梯度洗脱为依次用体积比为100:0、(98.5-99.5):(0.5-1.5)、(96.5-97.5):(2.5-3.5)、(94.5-95.5):(4.5-5.5)的氯仿-甲醇混合溶液洗脱，每个梯度洗脱4-6个保留体积，合并(96.5-97.5):(2.5-3.5)洗脱部位。

6.根据权利要求2所述的提取分离方法，其特征在于，步骤(3)中所述硅胶柱色谱2中硅胶粒度为300-400目；所述组分a与硅胶的质量比为1:40-60；所述梯度洗脱为依次用体积比为100:0、(94-96):(4-6)、(89-91):(9-11)、(84-86):(14-16)、(79-81):(19-21)、(74-76):(24-26)和0:100的石油醚-乙酸乙酯混合溶液洗脱，合并0:100洗脱部位。

7.根据权利要求2所述的提取分离方法，其特征在于，步骤(4)所述色谱中的填料为为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-水溶液。

8.根据权利要求2所述的提取分离方法，其特征在于，步骤(4)中所述分离条件为：甲醇:水(v:v)＝(35-45):(55-65)，流速0.8-1.2ml/min，柱温22-28℃，吸收波长为205-215nm和249-259nm，所述化合物的保留时间tr＝6.5-7.5min。

9.根据权利要求8所述的提取分离方法，其特征在于，所述分离条件为甲醇:水(v:v)＝40:60、流速1ml/min、柱温25℃、吸收波长为210nm和254nm，所述化合物的保留时间tr＝7.15min。

10.一种权利要求1所述的具有抗炎活性的化合物或权利要求2-9任一项所述的提取分离方法得到的化合物在制备抗炎产品中的应用。

技术总结
本发明属于中医药技术领域，涉及一种具有抗炎活性的化合物及其提取分离方法和应用。采用醇提取、硅胶柱层析和HPLC进行分离纯化与制备，成功提取分离出新的化合物，该方法操作步骤仅为四步，操作方法简便及快速，且经该方法分离得到的化合物纯度均大于96％，研究表明本化合物可显著抑制脂多糖(LPS)引起的小鼠巨噬细胞RAW246.7和小胶质细胞BV‑2中NO的水平，具有显著的抗炎活性，因此本发明新化合物及其衍生物可以作为其他化合物合成先导物，以及新药开发和药理活性研究的原料，亦可用于制备抗炎等药物，具有良好的经济效益和应用前景。

技术研发人员：杨隆河,余思宇,蔡兵,张芳,乐卿清,何西文
受保护的技术使用者：自然资源部第三海洋研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15