一种与猪肌内脂肪沉积负相关的miRNA及其应用的制作方法

本发明涉及基因工程，尤其涉及一种与猪肌内脂肪沉积负相关的mirna及其应用。

背景技术：

1、随着生活水平的提高，人们对肉品质也有了较高的要求。肌内脂肪(intramuscular fat，简称imf)是衡量猪肉风味和嫩度的重要经济指标。提高imf含量，改善猪肉品质在猪肉生产和消费过程中具有重要意义。imf含量与多个肉质性状相关，包括嫩度、多汁性、风味和系水力。3％-4％的imf含量是肉用型猪的理想值，imf含量低于2.5％则肌肉口感变差，但自二十世纪七十年代以来，国内外育种工作者对高瘦肉率的追求，导致瘦肉型猪的imf含量降至1.5％，猪肉品质急剧下降。提高肌内脂肪含量已成为猪生产中所面临的一个严峻问题。因此，增加肌内脂肪沉积一直是猪品系选育的重要目标之一。

2、mirnas(micrornas)是长度为18-25个核苷酸的ncrna，通过与靶基因的3’-utr区结合，抑制蛋白翻译或降解mrna来调节靶基因的表达。在猪脂肪分化的研究中，mirna已被广泛报道为脂肪发育的重要调控因子。

技术实现思路

1、为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种与猪肌内脂肪沉积负相关的mirna及其应用。

2、通过高通量测序获得与主选性状及其关键基因相关的mirna作为分子标记，可以实现目标性状的早期选择，加快遗传选择进展。本发明采用差速贴壁法分离猪背最长肌中的肌内前体脂肪细胞，随后采用鸡尾酒法诱导分化肌内前体脂肪细胞，收集分化不同时期的细胞进行全转录组测序，筛选在猪肌内前体脂肪分化过程中表达量高、表达量差异显著、靶基因与脂肪沉积密切相关的mirna，最终得到一种和动物肌内脂肪沉积有关的mirna。

3、第一方面，本发明提供一种mirna，包括如下核苷酸序列：

4、uggaagacuagugauuuuguuguu。

5、第二方面，本发明提供一种茎环引物，包括：

6、ggtcgtatgcaaagcagggtccgaggtatccatcgcacgcatcgcactgcatacgaccaacaacaaaa。

7、在本发明的一种实施方式中，本发明提供一种生物材料，所述生物材料包括所述mirna，所述生物材料为表达盒、载体或转基因细胞。

8、在本发明的一种实施方式中，本发明提供一种试剂盒，所述试剂盒包括所述的mirna，或所述的茎环引物，或所述的生物材料。

9、第三方面，本发明提供所述的mirna，或所述的茎环引物，或所述的生物材料，或所述的试剂盒在靶向脂肪沉积调控因子klf4中的应用。

10、在本发明的一种实施方式中，本发明提供所述的mirna，或所述的茎环引物，或所述的生物材料，或所述的试剂盒在调控动物肌内的脂肪沉积中的应用。

11、在本发明的一种实施方式中，所述调控动物肌内的脂肪沉积为负调控动物的肌内脂肪沉积。

12、在本发明的一种实施方式中，通过提高所述动物体内所述的mirna的表达水平，降低所述动物肌肉内脂肪的水平；或通过降低动物体内所述的mirna的表达水平，提高动物肌肉内脂肪的水平。

13、在本发明的一种实施方式中，本发明提供所述的mirna，或所述的茎环引物，或所述的生物材料，或所述的试剂盒在调控动物肌内前体脂肪细胞的分化中的应用。

14、在本发明的一种实施方式中，所述调控动物肌内前体脂肪细胞的分化包括：

15、通过提高所述动物体内所述的mirna的表达水平，抑制所述动物肌内前体脂肪细胞的分化；或通过降低动物体内所述的mirna的表达水平，促进所述动物肌内前体脂肪细胞的分化。

16、本发明研究发现，调整该mirna的表达水平可以影响猪肌内前体脂肪细胞的分化，进而影响肌内脂肪的含量。

17、在本发明的一种实施方式中，所述动物为哺乳动物，优选为猪。

18、本发明具备如下有益效果：

19、本发明通过高通量测序技术和mirna-mrna联合分析，筛选到调控脂肪沉积调控因子klf4的一种mirna，通过过表达该mirna，可以显著降低动物肌肉内的脂肪水平，这可能是通过抑制多种脂肪分化因子，促进脂解因子的表达实现的。而若是抑制该mirna的表达，则相应地可以提高动物肌肉内的脂肪水平。本发明提供的mirna可以应用于动物育种中，调控动物的肌肉中的脂肪含量，尤其是应用于猪的育种，其对于养猪产业具有重要价值。

技术特征：

1.一种mirna，其特征在于，包括如下核苷酸序列：

2.一种茎环引物，其特征在于，包括：

3.一种生物材料，其特征在于，包括如权利要求1所述的mirna，所述生物材料为表达盒、载体或转基因细胞。

4.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的mirna，或权利要求2所述的茎环引物，或权利要求3所述的生物材料。

5.权利要求1所述的mirna，或权利要求3所述的生物材料，或权利要求4所述的试剂盒在靶向脂肪沉积调控因子klf4中的应用。

6.权利要求1所述的mirna，或权利要求3所述的生物材料，或权利要求4所述的试剂盒在调控动物肌内脂肪沉积中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述调控动物肌内脂肪沉积为负调控动物的肌内脂肪沉积。

8.根据权利要求6或7所述的应用，通过提高所述动物体内如权利要求1所述的mirna的表达水平，降低所述动物肌肉内脂肪的水平；或通过降低动物体内如权利要求1所述的mirna的表达水平，提高动物肌肉内脂肪的水平。

9.权利要求1所述的mirna，或权利要求3所述的生物材料，或权利要求4所述的试剂盒在调控动物肌内前体脂肪细胞的分化中的应用。

10.根据权利要求5-9任一项所述的应用，其特征在于，所述动物为哺乳动物，优选为猪。

技术总结
本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种与猪肌内脂肪沉积负相关的miRNA及其应用。所述miRNA包括如下核苷酸序列：UGGAAGACUAGUGAUUUUGUUGUU。本发明进一步提供包括所述miRNA的表达盒、载体、转基因细胞或试剂盒。本发明通过高通量测序技术和miRNA‑mRNA联合分析，筛选到一种和动物肌内脂肪含量相关的miRNA，其可以靶向脂肪沉积调控因子KLF4，影响动物肌内前体脂肪细胞的分化，进而显著影响动物肌内脂肪含量，尤其是针对猪。本发明提供的miRNA可以应用于猪养殖领域，培育适当肌内脂肪含量的猪种，具有显著的经济价值。

技术研发人员：谭露霖,许厚强,陈朝军,吴仙,李莉娜
受保护的技术使用者：贵州省畜牧兽医研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15