用于乳腺癌诊断或预后评估的标志检测物及其用途、试剂盒及靶向抑制剂

本公开涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种用于乳腺癌诊断或预后评估的标志检测物及其用途、试剂盒及靶向抑制剂。

背景技术：

1、乳腺癌死亡率和发病率高，严重危害女性生命健康，给家庭和社会带来沉重负担，且每年新发病例高达230万例，占所有新增恶性肿瘤的11.7％，已成为全球发病率最高的恶性肿瘤。自九十年代以来，我国乳腺癌发病率的增长速度高达全球2倍，远超欧美国家，并呈现发病年龄早、确诊时间晚、并发症多、预后生存差的问题。

2、其中，三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer，本公开中简称为tnbc)是er、pr和her2表达均为阴性的乳腺癌，约占乳腺癌病例的15％至20％，tnbc是最具挑战性的乳腺癌亚型，具有发病年龄小、恶性程度高、复发转移迅速等特点，患者起病时肿瘤负荷较重，较早出现淋巴结累及。在治疗过程中，tnbc的肿瘤生物学行为和药物敏感性不同，且对内分泌治疗和抗her2靶向治疗均不敏感，患者化疗疗效不一，患者对化疗耐药和预后不理想。因此，tnbc发生发展和耐药的分子机制尚不清楚，诊断与治疗难题亟待解决。

3、另一方面，以蒽环类和紫杉类药物为基础的化疗仍然tnbc标准治疗手段，但有效性性差影响预后，且患者经常出现化疗耐药。顺铂是第一代的铂类化疗药的代表性药物，是第一款合成铂类抗癌药物，也是目前临床上应用最多的化疗药物之一。目前，含铂治疗方案是tnbc治疗中常用的一种方案，在tnbc新辅助治疗及晚期治疗中均显示出较好的疗效。但临床治疗过程中出现的铂类药物耐药问题及其不良反应，严重影响了铂类药物的疗效，并限制其临床应用。

4、综上所述，目前缺少对于三阴性乳腺癌预后诊断和评估的方法，而且从治疗方面，铂类药物耐药问题及其不良反应，也需要得到解决。

技术实现思路

1、本公开的目的在于解决现有技术中存在的问题至少之一，更确切地，本公开旨在提供一种用于乳腺癌诊断或预后评估的标志检测物，及这种标志检测物的具体应用方式，以及一种用于乳腺癌诊断或预后评估的试剂盒。同时，基于与上述标志检测物相同的研究思路，本公开提供了一种靶向抑制剂，以期解决铂类药物的耐药问题。

2、具体的，本公开第一方面提供了一种用于乳腺癌诊断或预后评估的标志检测物，这种标志检测物包括用于检测klhl29基因或其编码蛋白的表达水平的引物。

3、可选的，这种标志检测物包括一对特异性扩增引物：

4、上游引物(f)：5’-gcagagcgaaagcgtttacag-3’

5、下游引物(r)：5’-gcaggttcgacaggacgag-3’。

6、kelch家族蛋白成员klhl29在乳腺癌，尤其是三阴性乳腺癌中发挥抑癌基因作用，可以抑制三阴性乳腺癌增殖、迁移及侵袭，同时klhl29低表达提示不良预后，可以作为三阴性乳腺癌的新的治疗靶点及预后标志物；鉴于上述，本公开第一方面提供一种标志检测物，能够有效地检测预后标志物——klhl29。可以基于其检测结果获得对于三阴性乳腺癌诊断以及预后评估的重要参考。

7、本公开第二方面提供了上述标志检测物用于制备检测试剂的用途，其中，这种检测试剂用于选自如下一种或多种用途：

8、用于预测抗乳腺肿瘤药物化疗耐药和预后，

9、用于改善抑制剂与抗乳腺肿瘤药物的联合用药。

10、可选的，通过检测试剂检测klhl29基因或其蛋白的表达水平，根据所述表达水平预测抗乳腺肿瘤药物的化疗耐药和预后，其中，较低的所述表达水平提示不良预后。

11、可选的，通过检测试剂检测klhl29基因或其蛋白的表达水平，根据表达水平调控抑制剂用量，以改善抑制剂与抗乳腺肿瘤药物的联合用药。

12、在上述用途中，乳腺肿瘤具体包括乳腺癌及其亚型，尤其是三阴性乳腺癌；抗乳腺肿瘤药物包括铂类药物，尤其是顺铂。

13、本公开第三方面提供一种用于乳腺癌诊断或预后评估的试剂盒，包括盒体，以及如前述第一方面或其可选方案中所描述的标志检测物。

14、可选的，试剂盒中还包括如下试剂中的一种或多种：

15、胃蛋白酶、组织固定液、预杂交液、寡核苷酸探针杂交液、封闭液、生物素化鼠抗地高辛、sabc-pod、生物素化过氧化物酶、depc、3％柠檬酸、2×ssc、0.5×ssc、0.2×ssc、原位杂交用pbs。

16、鉴于前述klhl29在三阴性乳腺癌中发挥抑癌基因作用的特征，进一步的，klhl29可以通过促进cul3介导的ddx3x的泛素化，进而导致细胞周期阻滞影响三阴性乳腺癌功能，由此，本公开第四方面提供一种靶向klhl29介导的信号通路的抑制剂，该抑制剂能够与抗乳腺肿瘤药物联合用药，用以改善三阴性乳腺癌治疗过程中抗乳腺肿瘤药物的耐药问题。

17、其中，上述抑制剂包括klhl29的相互作用蛋白ddx3x的抑制剂rk33。适用的抗乳腺肿瘤药物为顺铂。铂类药物与ddx3x的特异性小分子抑制剂rk33具有药物协同作用，可以显著抑制三阴性乳腺癌的肿瘤生长，为三阴性乳腺癌患者提供新的治疗选择。

18、通过上述各方面的方案，本公开至少具有如下优点有益效果：

19、首先，本公开明确了klhl29及其相互作用蛋白ddx3x在三阴性乳腺癌发生发展中的作用及分子机制，同时聚焦其临床转化价值，发现三阴性乳腺癌的潜在药物治疗靶点，并靶向目的基因参与的机制应用抑制剂进行临床转化，为乳腺癌治疗靶点的选择提供理论依据并为三阴性乳腺癌患者提供新的治疗选择。

20、具体而言，利用klhl29基因作为乳腺癌诊断或预后评估的标志物，并提供了对应的一种标志检测物，这是一种分子标志检测物，能够有效地检测klhl29基因的表达水平，可以基于其检测结果获得对于三阴性乳腺癌诊断以及预后评估的重要参考。

21、其次，对于上述标志检测物的应用，基于上述标志检测物形成检测试剂或者试剂盒，作为诊断和治疗乳腺癌，及其预后评估提供了辅助工具。具体而言，能够在治疗过程中预测抗乳腺肿瘤药物化疗耐药和预后，能够调控联合用药中抑制剂的用量，改善对于抗乳腺肿瘤药物的耐药性。

22、此外，以klhl29基因作为靶点，提供的靶向药物、靶向klhl29介导的信号通路的抑制剂，改善了抗肿瘤药物有效性差、化疗耐药和预后差的问题，有效解决了乳腺癌，尤其是三阴性乳腺癌，缺少治疗药物靶点、缺少有效治疗药物问题。

技术特征：

1.一种用于乳腺癌诊断或预后评估的标志检测物，其特征在于，所述标志检测物包括用于检测klhl29基因或其编码蛋白的表达水平的引物。

2.根据权利要求1所述的标志检测物，其特征在于，所述标志检测物包括一对特异性扩增引物：

3.一种如权利要求1所述的标志检测物的用途，其特征在于，用于制备一种检测试剂，所述检测试剂用于选自如下一种或多种用途：

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，通过所述检测试剂检测klhl29基因或其蛋白的表达水平，根据所述表达水平预测抗乳腺肿瘤药物的化疗耐药和预后，其中，较低的所述表达水平提示不良预后。

5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，通过所述检测试剂检测klhl29基因或其蛋白的表达水平，根据所述表达水平调控抑制剂用量，以改善抑制剂与抗乳腺肿瘤药物的联合用药。

6.根据权利要求3至5任一项所述的用途，其特征在于，所述乳腺肿瘤包括乳腺癌及其亚型，以及三阴性乳腺癌；所述抗乳腺肿瘤药物包括铂类药物。

7.一种用于乳腺癌诊断或预后评估的试剂盒，其特征在于，包括盒体以及如权利要求1或2所述的标志检测物。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括如下试剂中的一种或多种：

9.一种靶向klhl29介导的信号通路的抑制剂，所述抑制剂能够与抗乳腺肿瘤药物联合用药，用以改善所述抗乳腺肿瘤药物的耐药问题。

10.根据权利要求9所述的抑制剂，其特征在于，所述抑制剂包括klhl29的相互作用蛋白ddx3x的抑制剂rk33，所述乳腺肿瘤为三阴性乳腺癌，所述抗乳腺肿瘤药物为顺铂。

技术总结
本公开涉及一种用于乳腺癌诊断或预后评估的标志检测物及其用途、试剂盒及靶向抑制剂。其中的标志检测物包括用于检测KLHL29基因或其编码蛋白的表达水平的引物。其用途包括用于制备一种检测试剂，用于预测抗乳腺肿瘤药物化疗耐药和预后，或者用于改善抑制剂与抗乳腺肿瘤药物的联合用药。本公开还包括一种靶向KLHL29介导的信号通路的抑制剂。本公开中的技术方案有效解决抗乳腺肿瘤药物的化疗耐药和预后预测问题。还提供了一种抗乳腺肿瘤的靶向药物、靶向抑制剂以及一种联合用药方案，为乳腺肿瘤患者提供新的治疗选择。

技术研发人员：徐莹莹,姚礼彤,王墨之,张强,余科达,王泓皓
受保护的技术使用者：中国医科大学附属第一医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15