一种戊型肝炎病毒的收集方法

本发明涉及病毒提纯、收集，尤其涉及一种戊型肝炎病毒的收集方法。

背景技术：

1、由于分泌到细胞培养基中的戊型肝炎病毒(hev)感染能力较弱，所以通常从细胞中裂解收集感染性更强的hev颗粒，目前hev的收集方法的报道相对较少，而已有报道的从细胞中收集病毒的方法(如反复冻融法)存在收集得到的病毒液中细胞碎片等杂质过多的问题，导致病毒液的纯度较低。因而，将现有的从细胞中收集病毒的方法应用于收集hev时，存在细胞碎片等杂质过多的问题。

2、因此，现有技术还有待于改进和发展。

技术实现思路

1、鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种hev的收集方法，旨在解决现有关于hev的收集方法的报道相对较少，将现有的反复冻融法应用于收集hev时存在细胞碎片过多的问题。

2、本发明的技术方案如下：

3、本发明的第一方面，提供一种hev的提纯方法，其中，包括：

4、步骤a、培养含有hev的慢性感染细胞系，用胰酶消化后，进行第一次离心，去除上清，用细胞培养基重悬，得到第一混合液；

5、步骤b、将所述第一混合液进行冷冻，然后进行解冻；

6、步骤c、重复所述步骤b若干次，得到第二混合液；

7、步骤d、将所述第二混合液进行第二次离心，取上清，进行过滤后，得到第三混合液；

8、步骤e、将所述第三混合液以22000～40000rpm的转速进行第三次离心，得到所述hev。

9、可选地，所述步骤a中，所述第一次离心采用的转速为1500～2000rpm，所述第一次离心采用的时间为5～15min。

10、可选地，所述步骤b具体包括：

11、将所述第一混合液在-80～-60℃的温度下冷冻30～60min，然后在室温下进行解冻。

12、可选地，所述步骤c中，重复步骤b三次，得到所述第二混合液。

13、可选地，所述步骤d中，所述第二次离心采用的温度为2～8℃，所述第二次离心采用的转速为4000～5000rpm，所述第二次离心采用的时间为20～30min。

14、可选地，所述步骤d中，采用孔径为0.22μm的滤膜进行过滤。

15、可选地，所述步骤e中，所述第三次离心采用的温度为2～8℃，所述第三次离心采用的时间为2～4h。

16、可选地，所述步骤e具体包括步骤：

17、将所述第三混合液以22000～40000rpm的转速进行第三次离心；

18、将所述第三次离心后得到的沉淀加入细胞完全培养基，进行重悬，取上清，得到所述戊型肝炎病毒溶液。

19、有益效果：本发明提供的收集方法，能够去除细胞在裂解过程中产生的大量细胞碎片，能够快速、简单且高效地提纯细胞中的hev粒子，提高hev的滴度。

技术特征：

1.一种戊型肝炎病毒的收集方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的戊型肝炎病毒的收集方法，其特征在于，所述步骤a中，所述第一次离心采用的转速为1500～2000rpm，所述第一次离心采用的时间为5～15min。

3.根据权利要求1所述的戊型肝炎病毒的收集方法，其特征在于，所述步骤b具体包括：

4.根据权利要求3所述的戊型肝炎病毒的收集方法，其特征在于，所述步骤c中，重复步骤b三次，得到所述第二混合液。

5.根据权利要求1所述的戊型肝炎病毒的收集方法，其特征在于，所述步骤d中，所述第二次离心采用的温度为2～8℃，所述第二次离心采用的转速为4000～5000rpm，所述第二次离心采用的时间为20～30min。

6.根据权利要求1所述的戊型肝炎病毒的收集方法，其特征在于，所述步骤d中，采用孔径为0.22μm的滤膜进行过滤。

7.根据权利要求1所述的戊型肝炎病毒的收集方法，其特征在于，所述步骤e中，所述第三次离心采用的温度为2～8℃，所述第三次离心采用的时间为2～4h。

8.根据权利要求1所述的戊型肝炎病毒的收集方法，其特征在于，所述步骤e具体包括步骤：

技术总结
本发明公开一种戊型肝炎病毒的收集方法，其中，包括：步骤A、培养含有戊型肝炎病毒的慢性感染细胞系，用胰酶消化后，进行第一次离心，去除上清，用细胞培养基重悬，得到第一混合液；步骤B、将所述第一混合液进行冷冻，然后进行解冻；步骤C、重复所述步骤B若干次，得到第二混合液；步骤D、将所述第二混合液进行第二次离心，取上清，进行过滤后，得到第三混合液；步骤E、将所述第三混合液以22000～40000rpm的转速进行第三次离心，得到所述戊型肝炎病毒。本发明提供的收集方法，能够去除细胞在裂解过程中产生的大量细胞碎片，能够快速、简单且高效地提纯细胞中的戊型肝炎病毒粒子，提高戊型肝炎病毒的滴度。

技术研发人员：王艺瑾,王春玲
受保护的技术使用者：南方科技大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15