一种原代组织细胞的提取方法

本发明涉及组织细胞提取，具体涉及一种原代组织细胞的提取方法。

背景技术：

1、在目前精准医学的趋势推动下，个体化治疗逐渐成为精准治疗的趋势。但是从病人器官组织中提取特异性的原代组织细胞，却一直是一个难题。

2、现有的原代组织细胞提取方法中采用大多转子离心破碎组织，这样细胞破坏程度较高，导致原代细胞提取效率低。

技术实现思路

1、为了克服现有技术的不足，本发明提供一种原代组织细胞的提取方法，以解决现有技术中原代细胞提取效率低的问题。

2、本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

3、一种原代组织细胞的提取方法，包括以下步骤：获取器官组织，然后采用两个具有棱状微结构的研磨平面相互旋转运动剪碎器官组织，将剪碎的器官组织用消化酶溶液消化，之后加入胎牛血清终止消化，首次离心去除上清液，再加入红细胞裂解液，吹散混匀后再次离心去除上清液，得到提取的原代细胞。

4、作为上述技术方案的进一步改进，两个所述研磨平面分别包括旋转底面和旋转顶面，所述旋转底面与旋转顶面之间通过一轴孔连接部转动连接，所述旋转底面上设置有若干类三棱柱结构的第一剪切块，所述旋转顶面上设有若干类四棱锥结构的第二剪切块，旋转底面和旋转顶面相互转动时，第一剪切块与第二剪切块交错具有剪切力，通过该剪切力剪碎器官组织。

5、作为上述技术方案的进一步改进，所述第一剪切块在旋转底面的一半径上具有多个，且多个述第一剪切块又分别以旋转底面的圆心环形阵列；所述第二剪切块在旋转顶面的一半径上具有多个，且多个述第二剪切块又分别以旋转顶面的圆心环形阵列。

6、作为上述技术方案的进一步改进，所述旋转底面以半径大小分为多个环形的剪切区域，不同剪切区域的第一剪切块环形阵列的个数不同，同一剪切区域的第一剪切块环形阵列的个数不同；所述旋转顶面也以半径大小分为多个环形的剪切区域，不同剪切区域的第二剪切块环形阵列的个数不同，同一剪切区域的第二剪切块环形阵列的个数不同。

7、作为上述技术方案的进一步改进，所述旋转底面上同一剪切区域的第一剪切块的尺寸沿半径增大方向逐渐增大；所述旋转顶面上同一剪切区域的第二剪切块的尺寸沿半径增大方向逐渐增大。

8、作为上述技术方案的进一步改进，所述消化酶溶的组成包括dmemf12、collagenaseⅰ、collagenaseⅳ、dispase和dnase。

9、作为上述技术方案的进一步改进，所述消化酶溶中collagenaseⅰ的浓度为2mg/ml，collagenaseⅳ的浓度为2mg/ml，dispase的浓度为2mg/ml，dnase的浓度为1500unit/ml。

10、作为上述技术方案的进一步改进，剪碎的器官组织在消化酶溶液中在37℃下摇床消化15min，然后加入胎牛血清终止消化。

11、作为上述技术方案的进一步改进，离心去除上清液的参数为：转速1000rpm、时间5min。

12、作为上述技术方案的进一步改进，加入的红细胞裂解液的体积为去除上清液后剩余沉淀体积的3倍。

13、本发明的有益效果是：通过两个具有棱状微结构的研磨平面相互旋转运动剪碎器官组织，经两个研磨平面中的棱状微结构交错时产生的剪切力来剪切组织，能够减轻切割软体组织时对组织细胞的挤压破坏作用，同时通过环形阵列的多个棱状微结构持续剪切，提高组织的剪碎效果，为细胞提取创造更有利条件，因此，本发明对器官组织提取原代细胞的提取率高。

技术特征：

1.一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：获取器官组织，然后采用两个具有棱状微结构的研磨平面相互旋转运动剪碎器官组织，将剪碎的器官组织用消化酶溶液消化，之后加入胎牛血清终止消化，首次离心去除上清液，再加入红细胞裂解液，吹散混匀后再次离心去除上清液，得到提取的原代细胞。

2.根据权利要求1所述的一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，两个所述研磨平面分别包括旋转底面和旋转顶面，所述旋转底面与旋转顶面之间通过一轴孔连接部转动连接，所述旋转底面上设置有若干类三棱柱结构的第一剪切块，所述旋转顶面上设有若干类四棱锥结构的第二剪切块，旋转底面和旋转顶面相互转动时，第一剪切块与第二剪切块交错具有剪切力，通过该剪切力剪碎器官组织。

3.根据权利要求2所述的一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，所述第一剪切块在旋转底面的一半径上具有多个，且多个述第一剪切块又分别以旋转底面的圆心环形阵列；所述第二剪切块在旋转顶面的一半径上具有多个，且多个述第二剪切块又分别以旋转顶面的圆心环形阵列。

4.根据权利要求3所述的一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，所述旋转底面以半径大小分为多个环形的剪切区域，不同剪切区域的第一剪切块环形阵列的个数不同，同一剪切区域的第一剪切块环形阵列的个数不同；所述旋转顶面也以半径大小分为多个环形的剪切区域，不同剪切区域的第二剪切块环形阵列的个数不同，同一剪切区域的第二剪切块环形阵列的个数不同。

5.根据权利要求4所述的一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，所述旋转底面上同一剪切区域的第一剪切块的尺寸沿半径增大方向逐渐增大；所述旋转顶面上同一剪切区域的第二剪切块的尺寸沿半径增大方向逐渐增大。

6.根据权利要求1所述的一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，所述消化酶溶的组成包括dmemf12、collagenaseⅰ、collagenaseⅳ、dispase和dnase。

7.根据权利要求6所述的一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，所述消化酶溶中collagenaseⅰ的浓度为2mg/ml，collagenaseⅳ的浓度为2mg/ml，dispase的浓度为2mg/ml，dnase的浓度为1500unit/ml。

8.根据权利要求7所述的一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，剪碎的器官组织在消化酶溶液中在37℃下摇床消化15min，然后加入胎牛血清终止消化。

9.根据权利要求1所述的一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，离心去除上清液的参数为：转速1000rpm、时间5min。

10.根据权利要求1所述的一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，加入的红细胞裂解液的体积为去除上清液后剩余沉淀体积的3倍。

技术总结
本发明公开了一种原代组织细胞的提取方法，包括以下步骤：获取器官组织，然后采用两个具有类四棱锥表面微结构的研磨平面相互旋转运动剪碎器官组织，将剪碎的器官组织用消化酶溶液消化，之后加入胎牛血清终止消化，首次离心去除上清液，再加入红细胞裂解液，吹散混匀后再次离心去除上清液，得到提取的原代细胞。本发明通过两个具有棱状微结构的研磨平面相互旋转运动剪碎器官组织，经两个研磨平面中的棱状微结构交错时产生的剪切力来剪切组织，能够减轻切割软体组织时对组织细胞的挤压破坏作用，同时通过环形阵列的多个棱状微结构持续剪切，提高组织的剪碎效果，为细胞提取创造更有利条件，提取的细胞活率高，活性好，且提取量高。

技术研发人员：王皖龙,马少华,朱雨
受保护的技术使用者：清华大学深圳国际研究生院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15