一种适用于植物样本的总DNA的快速抽提方法与流程

本发明涉及dna抽提，具体说是一种适用于植物样本的总dna的快速抽提方法。

背景技术：

1、随着现在分子生物学的高速发展，个体分子鉴定已经应用到植物组织培养的植株鉴定等领域，一种快速简单实用的植物组dna抽提方法有助于上述实验的顺利展开。传统的植物总dna的抽提方法需要用到有毒试剂β-巯基乙醇，实验安全性低下。传统的植物总dna的抽提方法需要用到限制性试剂氯仿，采购的制约性会在极大程度上干扰研究活动的正常展开。

2、传统的植物总dna的抽提方法步骤复杂用时较长，在进行大量样本处理时需要耗费较多的时间和人力成本；为了有效提高实验过程的安全性和实效性以及规避采购风险，需要一种新型可用的提取植物总dna的方法取代原有方法；

3、综上所述，本申请提出一种适用于植物样本的总dna的快速抽提方法。

技术实现思路

1、为了弥补现有技术的不足，本发明提出了一种适用于植物样本的总dna的快速抽提方法，具体包括以下几个步骤：

2、s1、材料研磨；取200mg植物叶片样本置于液氮中，研磨成粉末状后转入2.0ml离心管中备用；

3、s2、提取液萃取；

4、a.在步骤s1中所得的研磨后的粉末状叶片样本中加入700μl裂解液，随后将离心管放置到涡旋仪震荡10s以使粉末均匀分散；

5、b.将步骤s2a中的离心管在常温下，13000rpm离心5min，静置后取500μl上清液到新的离心管中；

6、c.在s2b步骤中加入上清液的离心管中加入等体积的异丙醇，室温沉降5min；常温下，13000rpm离心10min，倒掉上清液获得dna沉淀；

7、s3、dna沉淀的洗涤和溶解；

8、a.第一次洗涤dna沉淀，在步骤s2c中得的dna沉淀中加入75％的乙醇，轻弹离心管底部，使dna沉淀重悬，于常温下12000rpm离心10min，倒掉上清液，获得dna沉淀；

9、b.第二次洗涤dna沉淀，在步骤s3a步骤中得的dna沉淀中加入75％的乙醇，轻弹离心管底部，使dna沉淀重悬，于常温下12000rpm离心10min，弃尽上清液；将离心管至于烘箱中37度干燥15min或室温干燥1h。

10、作为本申请的一种优选方案，所述s2a中裂解液的组分为2％ ctab，1.4m nacl，20mm edta，100mm tris-hcl。

11、作为本申请的一种优选方案，在s3b步骤中第二次洗涤dna沉淀前，离心管内部加入6μlrna酶(20mg/ml)。

12、作为本申请的一种优选方案，在s3b中离心管放入烘箱中37度干燥15min或室温干燥1h后，向干燥后的dna中加入50μl的ddh2o。

13、作为本申请的一种优选方案，在步骤s3a中抽提出dna之后，在s3步骤之前对离心管中加入甲醇溶液洗涤沉淀，甲醇溶液洗涤次数为1-3次，沉淀时长15-30min，倒出沉淀后的上清液。

14、作为本申请的一种优选方案，经过甲醇溶液洗涤沉淀之后，使用dtt丙酮对沉淀后的dna洗涤沉淀，随后对离心管内部抽提。

15、作为本申请的一种优选方案，其中甲醇和dtt丙酮洗涤沉淀时，首先甲醇与dna沉淀配比为1：1；其中dtt丙酮与dna沉淀配比为1：1。

16、本发明的有益效果如下：

17、1.本发明的一种适用于植物样本的总dna的快速抽提方法，弃用有毒试剂β-巯基乙醇，提高了实验的安全性；使用单一溶液萃取植物样本的中的dna，简化了操作步骤，提高实验效率。最终获得的dna可用于下游的分子生物学实验。

技术特征：

1.一种适用于植物样本的总dna的快速抽提方法，其特征在于：具体包括以下几个步骤：

2.根据权利要求1所述的一种适用于植物样本的总dna的快速抽提方法，其特征在于：所述s2a中裂解液的组分为2％ctab，1.4m nacl，20mm edta，100mm tris-hcl。

3.根据权利要求1所述的一种适用于植物样本的总dna的快速抽提方法，其特征在于：在s3b步骤中第二次洗涤dna沉淀前，离心管内部加入6μlrna酶(20mg/ml)。

4.根据权利要求3所述的一种适用于植物样本的总dna的快速抽提方法，其特征在于：在s3b中离心管放入烘箱中37度干燥15min或室温干燥1h后，向干燥后的dna中加入50μl的ddh2o。

5.根据权利要求4所述的一种适用于植物样本的总dna的快速抽提方法，其特征在于：在步骤s3a中抽提出dna之后，在s3步骤之前对离心管中加入甲醇溶液洗涤沉淀，甲醇溶液洗涤次数为1-3次，沉淀时长15-30min，倒出沉淀后的上清液。

6.根据权利要求5所述的一种适用于植物样本的总dna的快速抽提方法，其特征在于：经过甲醇溶液洗涤沉淀之后，使用dtt丙酮对沉淀后的dna洗涤沉淀，随后对离心管内部抽提。

7.根据权利要求5或6所述的一种适用于植物样本的总dna的快速抽提方法，其特征在于：其中甲醇和dtt丙酮洗涤沉淀时，首先甲醇与dna沉淀配比为1：1；其中dtt丙酮与dna沉淀配比为1：1。

技术总结
本发明涉及DNA抽提技术领域，具体说是一种适用于植物样本的总DNA的快速抽提方法，通过添加甲醇溶液洗涤沉淀，甲醇溶液洗涤次数为1‑3次，沉淀时长15‑30min，倒出沉淀后的上清液；通过使用甲醇溶液对DNA沉淀物质进行洗涤沉淀，甲醇溶液会与矮牵牛W115的叶片样本中产生的多糖融合，随后重复使用甲醇溶液洗涤1‑3次，将矮牵牛W115的叶片样本中的多糖物质充分分离；并且弃用有毒试剂β‑巯基乙醇，提高了实验的安全性；使用单一溶液萃取植物样本的中的DNA，简化了操作步骤，提高实验效率。最终获得的DNA可用于下游的分子生物学实验。

技术研发人员：杨鹏,贺其其
受保护的技术使用者：上海迈其生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14