本发明涉及一种pcr冻干试剂及其制备方法。
背景技术：
1、实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，简称pcr)是一种在生物学研究、医学诊断、食品安全、环境监测以及法医学等领域中广泛应用的核酸检测技术。它的主要功能是通过酶的催化作用，特异性地扩增目标dna或rna序列，从而能够在复杂的样本中检测出微量的目标序列。实时荧光pcr因其具有高灵敏度、高特异性以及定量精确等特点，已经成为分子生物学领域中最常用的核酸定量技术之一。这主要归功于它的原理和方法：通过设计特异性的引物和荧光标记的探针，它可以高度特异性地扩增并检测目标序列；通过荧光标记和实时检测，它可以在pcr反应过程中实时监测扩增过程，从而实现定量分析。
2、在医学诊断领域，实时荧光pcr在疾病诊断和治疗监控中起着至关重要的作用。例如，它可用于检测病毒载量，如hiv、hbv等，以评估疾病的活跃程度和治疗的效果；也可用于检测病原微生物，如结核杆菌、流感病毒等，以实现早期诊断和防控；还可用于肿瘤标志物的检测，以进行早期癌症筛查、治疗反应评估以及复发监测。在食品安全领域，实时荧光pcr被广泛应用于食源性病原体的检测、转基因成分的检测以及食品来源的鉴定等方面。通过高灵敏度和高特异性的核酸检测，它能够有效地提升食品质量监控的准确性和效率。此外，在环境监测和法医学等领域，实时荧光pcr也起着越来越重要的作用。例如，它可用于环境样本中微生物群落的分析，以评估环境污染和治理的效果；也可用于法医学中的人类或动物dna的鉴定，以助力犯罪侦破和法律执行。
3、然而，液态pcr试剂由于需在特定的温度条件下保存和运输，对冷链物流有较高的要求，一方面增加了保管和运输的复杂性，另一方面也增加了试剂的损耗风险。这些问题使得pcr试剂在部分地区和环境中的应用受到了限制。
4、为解决上述问题，冻干技术被引入到pcr试剂的保存和运输中，其原理是将试剂中的水分子通过物理方式移除，使试剂成为固态，能够在室温下进行长期保存和运输。然而，冻干过程可能导致试剂中活性物质的构象发生改变，从而降低试剂的活性。因此，需要在冻干过程中添加特殊的保护剂，以防止活性物质在冻干过程中受到损失。
5、现有的pcr试剂冻干保护剂通常由海藻糖、羟丙基-β-环糊精等物质组成，这些物质能够通过稳定活性物质的结构，降低活性物质在冻干过程中的损失。然而，现有的冻干保护剂并不能完全防止pcr试剂在冻干和复溶过程中的活性损失。此外，现有的冻干保护剂在极端环境下(例如，极低温度或多次冻解过程)的保护效果不佳，使得pcr试剂在这些条件下的稳定性和可用性受到限制。
6、为克服上述问题，需要研发一种新型的冻干保护剂，其不仅能够在常规条件下保护pcr试剂的活性，还能够在极端环境下提供良好的保护效果。这需要对现有冻干保护剂的组成进行改良，以增强其在各种条件下的保护效果。然而，如何选择和配比新的冻干保护剂，以及如何评价其在不同条件下的保护效果，都是需要解决的技术问题。在现有技术中，尚未出现一种能够全面保护pcr试剂，尤其是在极端环境下的保护剂。这主要是因为，既有的冻干保护剂往往在一定程度上依赖于环境条件。例如，它们可能会在低温条件下产生晶体，从而损害pcr试剂的稳定性和性能。此外，现有的保护剂也可能对pcr试剂本身产生影响，例如通过改变试剂的溶解性质或稳定性，进而影响其功能。
7、因此，需要研发一种新型的冻干保护剂，其能够在各种环境条件下(包括极端环境)保护pcr试剂的活性，同时不对试剂本身产生不良影响。更具体地说，新型保护剂需要能够在冻干过程中保护试剂的活性，防止其在极端环境下受到损害；同时，它还需要能够在试剂复溶时迅速溶解，不影响试剂的使用。此外，新型保护剂的制备过程也需要简便高效，以便于其在pcr试剂的生产和应用中得到广泛应用。
8、现有的技术尚未能满足上述需求。例如，海藻糖虽然在一定程度上可以保护pcr试剂，但在极端环境下，其保护效果有限。另一方面，现有的保护剂往往对试剂本身产生一定的影响，例如可能会导致试剂在复溶时产生结块，从而影响其性能。
9、鉴于此，开发一种新型的冻干保护剂，以提高pcr试剂在各种环境条件下的稳定性和可用性，是当前pcr试剂冻干技术中的重要技术课题。
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的不足，本发明所要解决的技术问题是：提供一种pcr冻干试剂及其制备方法。
2、本发明的详细技术方案如下：
3、一种pcr冻干试剂，包括pcr试剂和所述冻干保护剂，所述冻干保护剂为沙鲁胺和flounder抗冻蛋白中的至少一种。
4、优选地，所述冻干保护剂由沙鲁胺和flounder抗冻蛋白组成。
5、优选地，所述冻干保护剂由沙鲁胺和flounder抗冻蛋白按质量比(6-8):(2-4)组成。
6、优选地，所述pcr冻干试剂中所述冻干保护剂的浓度为1-18％(w/v)，更好为2-15％(w/v)，更好为3-13％(w/v)，最好为5-11％(w/v)。
7、本发明的pcr试剂可以采用本领域通用的/市售的pcr试剂。
8、本发明还提供了上述pcr冻干试剂的制备方法，包括下述步骤：
9、将pcr试剂和冻干保护剂混合均匀，得到混合液；
10、将上述混合液进行冷冻干燥处理，得到所述pcr冻干试剂。
11、本发明还提供了一种冻干保护剂，由沙鲁胺和flounder抗冻蛋白组成。
12、本发明还提供了上述冻干保护剂在pcr试剂冻干中的应用。
13、本发明的pcr冻干试剂，通过采用更强效的冻干保护剂，确保了pcr试剂在极端环境下的稳定性和活性。它们提供了方便易用的pcr试剂，适应各种实际应用场景，同时降低了运输和存储成本。这些有益效果使得pcr冻干试剂成为一种可靠且高效的选择，为医学诊断、食品安全监测、环境监测等领域的研究和应用提供了重要的技术支持。
1.一种pcr冻干试剂，包括pcr试剂和冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂为沙鲁胺和flounder抗冻蛋白中的至少一种。
2.如权利要求1所述的pcr冻干试剂，其特征在于，所述冻干保护剂由沙鲁胺和flounder抗冻蛋白组成。
3.如权利要求2所述的pcr冻干试剂，其特征在于，所述冻干保护剂由沙鲁胺和flounder抗冻蛋白按质量比(6-8):(2-4)组成。
4.如权利要求1-3任一项所述的pcr冻干试剂，其特征在于，所述pcr冻干试剂中所述冻干保护剂的浓度为1-18％(w/v)。
5.如权利要求4所述的pcr冻干试剂，其特征在于，所述pcr冻干试剂中所述冻干保护剂的浓度为2-15％(w/v)。
6.如权利要求4所述的pcr冻干试剂，其特征在于，所述pcr冻干试剂中所述冻干保护剂的浓度为3-13％(w/v)。
7.如权利要求4所述的pcr冻干试剂，其特征在于，所述pcr冻干试剂中所述冻干保护剂的浓度为5-11％(w/v)。
8.如权利要求1-7任一项所述pcr冻干试剂的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
9.一种冻干保护剂，其特征在于：由沙鲁胺和flounder抗冻蛋白组成。
10.如权利要求9所述冻干保护剂在pcr试剂冻干中的应用。