一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂的制作方法

本发明属于干细胞培养，具体为一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂。

背景技术：

1、干细胞是21世纪生物医学界普遍关注的新研究课题，干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。干细胞培养基是作用于干细胞的培养过程中所需要的特殊培养环境，以达到干细胞的贴壁或增殖效果。

2、干细胞广泛分布于哺乳动物的各个组织器官，但干细胞的数量甚微，而在通过提取人体自身脂肪内的间充质干细胞用于毛囊活化时，由于毛囊需要活化的个数一般较多，就需要使用到较多的干细胞，因此需要将这些低含量的干细胞通过适当的方法在体外进行进一步培养扩增，目前来说，最常见的培养干细胞方法就是添加有胎牛血清的培养基，但这种培养的方法生长速度较慢，并且牛血清与人类属于异源，导致在临床的应用得到了限制，因此设计一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂来解决这种问题很有必要。

技术实现思路

1、本发明的目的在于：为解决上述背景技术中提出的问题，本发明提供了一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂，包括平衡盐溶液、细胞冻存液、dmem培养基和丝裂霉素c溶液；所述平衡盐溶液包括不含有钙和镁离子的d-hank's，且所述d-hank's内含有0.3-0.5％的明胶；所述细胞冻存液包括es细胞冻存液、mef细胞冻存液和feeder细胞冻存液，且所述es细胞冻存液包括90％es培养基和10％dmso，所述mef细胞冻存液内包括90％mef培养基和10％dmso；所述dmem培养基包括去离子水、抗氧化剂、d-葡萄糖、维生素、牛磺酸和肝素钠；所述平衡盐溶液、细胞冻存液、dmem培养基和丝裂霉素c溶液的配比为1:3:0.5:1。

3、进一步的，所述dmem培养基的去离子水中含1％的dmem粉末与0.22％nahco3。

4、进一步的，所述d-hank's内包含有0.001％酚红、1％nacl、0.08％kcl、0.1％nahco3、0.006％kh2po4和0.005％na2hpo4。

5、进一步的，所述feeder细胞冻存液包括90％的fbs和10％的dmso。

6、进一步的，每一毫升的所述mef培养基中含有1000u青霉素和1000g链霉素。

7、进一步的，每一毫升的所述es培养基中含有106u青霉素和106g链霉素。

8、进一步的，所述dmem培养基的生物素包括d-泛酸钙、烟酰胺、吡哆醇盐酸盐、核黄素、盐酸硫氨。

9、进一步的，所述dmem培养基的抗氧化剂包括维生素e、抗坏血酸棕榈酸酯、植酸、bht等含有抗氧化性的自由基。

10、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

11、本发明中的平衡盐溶液能够形成细胞组织中基本的液体，可以维持渗透压，调节ph值以及供给细胞生存所需要的能量和无机离子成分，而es培养基、mef培养基与dmem培养基则能够有利于细胞停泊于一个位置生长，并提供干细胞的环境，同时，丝裂霉素c溶液可使细胞的dna解聚以加快生长的速度，在培养的过程中，还可以根据情况对皿内进行试剂液体的更换，以保证效果的持续性，使用该试剂进行间充质干细胞的培养相比使用血牛清来说能够加速间充质干细胞生长的速度，且不会存在异源性导致临床无法使用的问题，在实际的培养过程中，大约在48小时内可提高一倍的间充质干细胞增长量，提升培养间充质干细胞的速度和效率较为明显。

技术特征：

1.一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂，其特征在于，包括平衡盐溶液、细胞冻存液、dmem培养基和丝裂霉素c溶液；

2.根据权利要求1所述的一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂，其特征在于，所述dmem培养基的去离子水中含1％的dmem粉末与0.22％nahco3。

3.根据权利要求1所述的一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂，其特征在于，所述d-hank's内包含有0.001％酚红、1％nacl、0.08％kcl、0.1％nahco3、0.006％kh2po4和0.005％na2hpo4。

4.根据权利要求1所述的一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂，其特征在于，所述feeder细胞冻存液包括90％的fbs和10％的dmso。

5.根据权利要求1所述的一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂，其特征在于，每一毫升的所述mef培养基中含有1000u青霉素和1000g链霉素。

6.根据权利要求1所述的一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂，其特征在于，每一毫升的所述es培养基中含有106u青霉素和106g链霉素。

7.根据权利要求1所述的一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂，其特征在于，所述dmem培养基的生物素包括d-泛酸钙、烟酰胺、吡哆醇盐酸盐、核黄素、盐酸硫氨。

8.根据权利要求1所述的一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂，其特征在于，所述dmem培养基的抗氧化剂包括维生素e、抗坏血酸棕榈酸酯、植酸、bht等含有抗氧化性的自由基。

技术总结
本发明涉及干细胞培养技术领域，且公开了一种用于毛囊活化的间充质干细胞培养试剂，其包括平衡盐溶液、细胞冻存液、DMEM培养基和丝裂霉素C溶液；平衡盐溶液包括不含有钙和镁离子的D‑Hank's，且D‑Hank's内含有0.3‑0.5％的明胶；细胞冻存液包括ES细胞冻存液、MEF细胞冻存液和Feeder细胞冻存液，且ES细胞冻存液包括90％ES培养基和10％DMSO，MEF细胞冻存液内包括90％MEF培养基和10％DMSO。使用本发明进行间充质干细胞的培养相比使用血牛清来说能够加速间充质干细胞生长的速度，且不会存在异源性导致临床无法使用的问题，大约在48小时内可提高一倍的间充质干细胞增长量，提升培养间充质干细胞的速度和效率较为明显。

技术研发人员：何文丽
受保护的技术使用者：上海中赛德康生物制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15