一种细胞生长促进剂及其应用

本发明属于生物，具体涉及一种细胞生长促进剂及其应用。

背景技术：

1、蛋白质是机体生长所必需的营养物质，科研工作者们经常通过添加胎牛血清来促进细胞的增殖或维持细胞活性。胎牛血清中包含丰富的血清白蛋白、球蛋白、纤连蛋白、转铁蛋白等蛋白质，其中牛血清白蛋白占总蛋白的比例超过50%。血清白蛋白也是机体内重要的营养物质，机体每天消耗14 g/70 kg的血清白蛋白，同时肝脏合成等量的血清白蛋白以维持平衡。在健康人体内，脂肪与蛋白提供能量比例为15:1，癌症患者中脂肪与蛋白提供能量比例为3:1-1:1。因此，血清蛋白质是细胞或机体生长的重要营养物质来源。

2、卵白蛋白（ova）是一种单体磷酸糖蛋白，由385个氨基酸残基组成，其氨基酸组成营养均衡，是优异的膳食补充剂。因此，ova是重要的营养物质来源。此外，每个ova分子有一个内部二硫键和四个游离巯基，其能与自由基直接反应，从而具有较强的抗氧化活性。卵白蛋白相比于血清白蛋白纯化方法更加简单，更易得到，其成本更低，因此寻找一种简单的方法来替代动物血清白蛋白（bsa）来促进细胞增殖或维持细胞活力将具有重要的应用价值。

3、胞吞是维持生物体生命活动的基础。胞吞是调节营养物质内化的关键过程，调节蛋白质的胞吞效率有利于提高蛋白质被机体或者细胞更多的被利用，从而有利于维持细胞的正常生长。提高白蛋白的胞吞效率，将有利于提高其营养物质的生物利用率。noah等人和gustafsson等人通过管腔给药后，在肠道中观察到卵白蛋白，表明ova可以在肠道发生细胞内吞，这为ova发挥生物学功能和营养价值提供了良好的条件。这些研究结果表明了细胞可以通过胞吞作用内化ova，从而发挥ova的营养价值。增加ova的胞吞效率可能将有助于增强其生物学功能以及其营养价值，将为ova在细胞培养基中的应用以及提高ova的营养价值提供一定的理论支持。现有技术没有合适的方法去增加细胞对ova的胞吞效率，亟需开发一种促进细胞增殖和维持细胞活力的新方法。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供一种提高细胞活力的方法及其应用，本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

2、本发明第一方面提供一种细胞生长促进剂，所述细胞生长促进剂为fe2+-卵白蛋白复合物。

3、本发明第二方面提供一种能够细胞培养基，所述细胞培养基包含本发明第一方面所述的细胞生长促进剂；所述细胞培养基中生长促进剂的浓度为1μg/ml ~1000 μg/ml，包括但不限于100μg/ml、200μg/ml、250μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml。

4、进一步的，所述细胞培养基中不含氨基酸；

5、和/或，所述细胞培养基中不含动物血清白蛋白；

6、和/或，所述细胞培养基中还包含细胞培养基辅料。

7、优选的，所述细胞培养基辅料还包括：nacl、kcl、nahco3、kh2po4、na2hpo4、葡萄糖和/或水。

8、更优选的，所述细胞培养基辅料还包括：137.93mm nacl, 5.33mm kcl, 4.17mmnahco3, 0.441mm kh2po4, 0.338mm na2hpo4, 5.56mm 葡萄糖和/或水，ph值为7.1-7.5；

9、优选的，所述动物血清白蛋白包括人血清白蛋白、α血清白蛋白或牛血清白蛋白。

10、本发明第三方面提供一种细胞培养方法，在含有本发明第一方面所述的细胞生长促进剂的细胞培养基或本发明第二方面所述的细胞培养基中培养细胞。

11、本发明第四方面提供一种含有本发明第一方面所述的细胞生长促进剂药物、食品、保健食品或化妆品。

12、本发明第五方面提供一种提升细胞活力的方法，所述方法中添加本发明第一方面所述的细胞生长促进剂。

13、进一步的，所述方法在不含氨基酸或氨基酸缺乏的环境下进行。

14、进一步的，所述方法中采用本发明第一方面所述的细胞生长促进剂替代动物血清蛋白。

15、进一步的，细胞培养体系中所述fe2+的终浓度为10~100µm，添加所述卵白蛋白的终浓度为10~100 µm。

16、进一步的，所述细胞为哺乳动物细胞，优选的，所述细胞为鼠细胞、猪细胞、牛细胞、水牛细胞、绵羊细胞、山羊细胞、鹿细胞、野牛细胞、骆驼细胞、马鹿细胞、兔细胞和/或人细胞，更优选为人细胞；

17、和/或，所述细胞为上皮细胞、内皮细胞、巨噬细胞、肾小管细胞、肝实质细胞、肝细胞、心肌细胞、乳腺癌细胞、胃癌细胞、肺癌细胞、肝癌细胞、宫颈癌细胞、淋巴癌细胞、甲状腺癌细胞、食道癌细胞、肾癌细胞、胰腺癌细胞、胶质瘤细胞、黑色素瘤细胞、膀胱癌细胞或前列腺癌细胞。

18、本发明的有益效果

19、（1）本发明发现fe2+可以促进卵白蛋白的细胞内吞效率，从而提升细胞活力，促进细胞增殖，增加ova的利用度；

20、（2）本发明发现添加结合fe2+的卵白蛋白，当fe2+与卵白蛋白形成复合物时，能够在无氨基酸培养基中维持细胞活力；同时，在有氨基酸培养基中，能够促进细胞增殖。

21、（3）本发明发现在细胞培养基中，fe2+与卵白蛋白形成复合物时能够替代动物血清白蛋白的作用。

技术特征：

1.一种细胞生长促进剂，其特征在于，所述细胞生长促进剂为fe2+-卵白蛋白复合物。

2.一种细胞培养基，其特征在于，所述细胞培养基包含权利要求1所述的细胞生长促进剂；所述细胞培养基中生长促进剂的浓度为1μg/ml~1000 μg/ml。

3.根据权利要求2所述的细胞培养基，其特征在于，所述细胞培养基中不含氨基酸；

4.一种细胞培养方法，其特征在于，在含有权利要求1所述的细胞生长促进剂的细胞培养基或权利要求2或3所述的细胞培养基中培养细胞。

5.一种含有权利要求1所述的细胞生长促进剂的药物、食品、保健食品或化妆品。

6.一种提升细胞活力的方法，其特征在于，添加权利要求1所述的细胞生长促进剂。

7.如权利要求6所述的提升细胞活力的方法，其特征在于，所述方法在不含氨基酸或氨基酸缺乏的环境下进行。

8.如权利要求6所述的提升细胞活力的方法，其特征在于，所述方法中采用权利要求1所述的细胞生长促进剂替代动物血清白蛋白。

9.如权利要求6-8任一项所述的方法，其特征在于，细胞培养体系中fe2+的终浓度为10~100µm，添加所述卵白蛋白的终浓度为10~100 µm。

10.如权利要求6-8任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞为哺乳动物细胞。

技术总结
本发明涉及一种细胞生长促进剂及其应用，采用Fe<supgt;2+</supgt;与卵白蛋白形成Fe<supgt;2+</supgt;‑卵白蛋白复合物促进卵白蛋白细胞内吞，该细胞生长促进剂能够在无氨基酸的环境中维持细胞生长，在有氨基酸的环境中促进细胞增殖，并且，Fe<supgt;2+</supgt;‑卵白蛋白复合物能够在细胞培养中替代昂贵的动物血清白蛋白，该细胞生长促进剂对于细胞活力的促进效果显著，且成本低廉。

技术研发人员：任发政,张伟博,陈冲,李依璇,王鹏杰,张炎,申月敏,孙亚楠,刘思源
受保护的技术使用者：中国农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14