BnAHL15基因及其在调控植株早花中的应用

本发明bnahl15基因及其在调控植株早花中的应用，尤其涉及bnahl15基因在调控植株早花中的应用，属于生物。

背景技术：

1、油菜属于十字花科芸薹属，是我国种植面积最大、分布范围广的重要油料作物之一。根据国家统计局数据，我国2020年油料播种面积为13129千公顷，其中花生占4731千公顷，油菜籽占6765千公顷，是总面积的51.52％；油料产量达到3586.4万吨，花生产量1799.3万吨，然而油菜籽产量却只有1404.9万吨，占油料作物总产量的39.17％，每年仍需从国外进口大量油菜籽。因此发展油菜生产具有重要意义。

2、开花是植物生命周期起始的关键步骤之一，开花时间的早晚直接影响植物的繁殖等。育种的一个重要目标是在不影响作物产量的情况下缩短作物生长周期，增加其他作物轮作。研究表明，水稻开花位点t1(rft1)过表达会绕过正常的营养发育促进水稻提前开花，在油菜中，有人通过杂交的方法协调油菜早开花和高产，然而目前还没有相关研究通过criapr/cas9技术特异性编辑bnaahl15基因创造早花的油菜种质资源。创造早开花种质资源，选育早熟品种，为甘蓝型油菜快速繁殖提供材料。

技术实现思路

1、针对现有技术中存在的一些不足，本发明提供了油菜bnahl15基因在调控植株早花中的应用，尤其是油菜bnahl15基因及其在促进油菜早花中的应用。

2、为达到上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：

3、本发明首先提供一种调控植株早花的油菜bnahl15基因，所述油菜bnahl15基因的核苷酸序列如seq id no：1所示。

4、进一步的，所述调控包括促进植物早花；所述的植物包括甘蓝型油菜。

5、本发明还提供一种靶向编辑所述基因的sgrna，所述sgrna核苷酸序列如seq idno：2及seq id no：3所示。

6、本发明还提供一种重组表达载体，所述重组表达载体包含所述油菜bnahl15基因。

7、进一步的，所述重组表达载体包括载体pkse401。

8、本发明还提供一种重组工程菌，所述重组工程菌包含所述油菜bnahl15基因或所述的重组表达载体。

9、进一步的，所述重组工程菌的宿主菌为农杆菌gv3101。

10、本发明还提供一种所述基因或所述重组表达载体或所述重组工程菌在促进油菜早花育种中的应用。

11、本发明提供bnahl15基因在促进油菜早花中的应用，所述bnahl15基因的核苷酸序列如seq id no：1所示。

12、进一步的，所述应用为利用criapr/cas9技术特异性编辑bnaahl15基因。

13、进一步的，所述应用中特异性靶向编辑bnaahl15基因的sgrna的核苷酸序列如seqidno：2、seq id no：3所示。

14、进一步的，所述应用通过特异性编辑bnahl15基因，使得靶位点碱基的插入或缺失实现；所述靶位点碱基的插入或缺失后得到的突变体序列如seq id no：15所示。

15、本发明还提供bnahl15基因的突变体，其特征在于，所述突变体序列如seq id no：15所示。

16、本发明还提供所述的突变体在促进油菜早花中的应用。

17、本发明还提供一种促进油菜早花的方法，具体步骤如下：

18、设计两条特异性靶向油菜bnahl15基因的sgrna，将其构建到含有cas9的基因编辑骨架(即pkse401质粒)上，然后转化载体上，通过农杆菌介导的遗传转化技术获得再生苗。cas9核酸酶在两条sgrna的引导下对bnahl15的基因组序列进行编辑，通过对再生苗中bnahl15基因序列测序确定编辑突变。表型检测结果表明，纯合突变株系的开花期相比野生型油菜提前一周左右，且种子大小(产量)并未发生改变。

19、本发明的有益效果：

20、本发明首次从油菜中克隆到一个新的与开花期相关的基因，将本发明所提供的基因在油菜中定点编辑后，与野生型相比，开花提前。本发明中bnahl15突变体系的获得为早花品种的培育提供了珍贵的基因资源，对解析植物早花分子机制有重要意义。

技术特征：

1.促进油菜早花的bnahl15基因，所述bnahl15基因的核苷酸序列如seq id no：1所示。

2.重组表达载体，所述重组表达载体包含所述bnahl15基因。

3.重组工程菌，所述重组工程菌包含权利要求1所述bnahl15基因或权利要求2所述的重组表达载体。

4.权利要求1所述bnahl15基因、或权利要求2所述的重组表达载体、

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用为利用criapr/cas9技术特异性编辑bnaahl15基因。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用中特异性靶向编辑bnaahl15基因的sgrna的核苷酸序列如seq id no：2、seq id no：3所示。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用通过特异性编辑bnahl15基因，使得靶位点碱基的插入或缺失实现；优选的，所述靶位点碱基的插入或缺失后得到的基因突变体序列如seq id no：15所示。

8.bnahl15基因的突变体，其特征在于，所述突变体序列如seq id no：15所示。

9.权利要求8所述的突变体在促进油菜早花中的应用。

10.一种促进油菜早花的方法，其特征在于，所述方法为利用criapr/cas9技术特异性编辑bnaahl15基因；优选的，所述方法包括：

技术总结
本发明涉及BnAHL15基因及其在调控植株早花中的应用，尤其是油菜BnAHL15基因在调控植株早花中的应用，属于生物技术领域。本发明首先设计特异性靶向BnAHL15基因的sgRNA，将其制成oligo二聚体并与Cas9骨架构建成基因编辑载体，通过农杆菌介导的遗传转化技术导入到甘蓝型油菜下胚轴愈伤并再生成苗，Cas9核酸酶在sgRNA的引导下将基因组上BnAHL15基因编辑，产生移码突变，引起基因编码的提前终止，表型鉴定发现纯合突变株系油菜的开花期提前，且种子大小(产量)并未发生明显改变。

技术研发人员：曹军,张伟萌
受保护的技术使用者：江苏大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16