一种梨的矮化性状SSR分子标记、引物、试剂盒及其应用

本发明属于分子标记及种质资源鉴别，具体涉及一种梨的矮化性状ssr分子标记、引物、试剂盒及其应用。

背景技术：

1、梨属于多年生木本植物，树体高大。为了便于农事操作，生产上往往通过修剪控制树高，也有通过特殊砧木调控梨树株高的相关操作。通过矮化品种选育可以有效控制株高，与修剪、砧木嫁接等方法相比，可以明显减少人工成本，是梨树育种的重要方向之一。

2、分子标记可以实现目标性状的快速检测，在目标性状筛选、材料鉴定等方面具有明显技术优势。‘青矮1’是以西洋梨矮化种质‘lenainvert’自然授粉实生后代与白梨杂交选育出的一个梨矮化种质资源，‘青矮1’节间缩短，约为正常节间长度的二分之一，株型矮化明显，叶片增大、增厚，根系、花芽与果实发育正常，‘青矮1’短节间性状表现出显性基因控制的质量性状特征，具有重要的育种应用价值。

3、在育种过程中多需要对育种样本中是否携带‘青矮1’的矮化性状调控基因以及是否为矮化性状进行鉴定，然而目前‘青矮1’的矮化性状无法通过种子、果实、叶片等组织或器官表型进行判断，仅能够通过节间表型进行人工分辨，鉴定周期长，效率和准确度均较低。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种梨的矮化性状ssr分子标记、引物、试剂盒及其应用，所述梨的矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr可以准确判断待测样本中是否为矮化性状以及是否携带梨矮化基因，较常规鉴定方法更加高效和便捷。

2、本发明提供了一种梨的矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr，所述矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr的核苷酸序列如seq id no.1所示。

3、优选的，所述pydwarf1-ssr的重复单元为gga，重复单元的数量为3。

4、本发明还提供了一种扩增上述技术方案所述矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr的引物，所述引物的正向引物pydwarf1-ssr-f和反向引物pydwarf1-ssr-r的核苷酸序列分别如seq id no.2和seq id no.3所示。

5、本发明还提供了一种扩增上述技术方案所述矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr的试剂盒，所述试剂盒包括上述技术方案所述的引物和pcr扩增试剂。

6、优选的，所述pcr扩增试剂包括taqdna聚合酶、dntps、缓冲试剂和mg2+。

7、本发明还提供了上述技术方案所述的矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr、所述的引物或所述的试剂盒在梨的矮化基因或含有梨的矮化基因的种质的鉴定中的应用。

8、本发明还提供了一种鉴定梨的矮化基因的方法，包括如下步骤：

9、以上述技术方案所述的引物对待测梨树样本的基因组dna进行pcr扩增，得到pcr扩增产物；

10、将所述pcr扩增产物进行电泳检测，得到pcr扩增产物的电泳条带；

11、根据所述pcr扩增产物的电泳条带进行结果判定；

12、当所述pcr扩增产物的电泳条带含有大小为88bp的带型时，所述待测梨树样本中含有梨矮化基因，为节间缩短的矮化表型；

13、当所述pcr扩增产物的电泳条带不含有大小为88bp的带型时，所述待测梨树样本中不含有梨矮化基因，非节间缩短的矮化表型。

14、优选的，所述pcr扩增的体系以25μl计，包括如下组分：10×buffer2.5μl、25mmmgcl21.5μl、2.5mmdntps2μl、taqdna聚合酶0.2μl、基因组dna 20ng、正向引物0.5μl、反向引物0.5μl和余量超纯水。

15、优选的，所述pcr扩增的程序为：94℃预变性3min；94℃变性1min，56℃退火1min，72℃延伸1min，循环35次；72℃终延伸7min。

16、优选的，所述电泳检测包括非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。

17、有益效果：

18、本发明提供了一种梨的矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr，所述矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr的核苷酸序列如seq id no.1所示。本发明所述矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr与梨的矮化性状基因紧密连锁，无需任何表型信息，只需以从梨任意组织提取得到的基因组dna为模板，即可通过分子标记带型，准确判断对应梨树是否携带梨矮化基因，实现梨相关遗传材料和产品的高效、便捷鉴定。

技术特征：

1.一种梨的矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr，所述pydwarf1-ssr的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.根据权利要求1所述的矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr，其特征在于，所述矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr的重复单元为gga，重复单元的数量为3。

3.一种扩增权利要求1或2所述矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr的引物，其特征在于，所述引物的正向引物pydwarf1-ssr-f和反向引物pydwarf1-ssr-r的核苷酸序列分别如seq id no.2和seq id no.3所示。

4.一种扩增所述权利要求1或2所述矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3所述的引物和pcr扩增试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述pcr扩增试剂包括taqdna聚合酶、dntps、缓冲试剂和mg2+。

6.权利要求1或2所述的矮化性状ssr分子标记pydwarf1-ssr、权利要求3所述的引物或权利要求4或5所述的试剂盒在梨的矮化基因或含有梨的矮化基因的种质的鉴定中的应用。

7.一种鉴定梨的矮化基因的方法，其特征在于，包括如下步骤：

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述pcr扩增的体系以25μl计，包括如下组分：10×buffer2.5μl、25mmmgcl21.5μl、2.5mmdntps2μl、taqdna聚合酶0.2μl、基因组dna20ng、正向引物0.5μl、反向引物0.5μl和余量超纯水。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述pcr扩增的程序为：94℃预变性3min；94℃变性1min，56℃退火1min，72℃延伸1min，循环35次；72℃终延伸7min。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述电泳检测包括非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。

技术总结
本发明属于分子标记及种质资源鉴别技术领域，具体涉及一种梨的矮化性状SSR分子标记PyDwarf1‑SSR、引物、试剂盒及其应用。本发明所述矮化性状SSR分子标记PyDwarf1‑SSR与梨的矮化性状基因紧密连锁，无需任何表型信息，只需以从梨任意组织提取得到的基因组DNA为模板，即可通过分子标记带型，准确判断对应梨树是否携带梨矮化基因，实现梨相关遗传材料和产品的高效、便捷鉴定。

技术研发人员：王月志,李文珏,杜辰飞,蔡丹英,魏春艳,戴美松,施泽彬
受保护的技术使用者：浙江省农业科学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15