一种适用于滑液囊支原体的培养基及其制备方法

本发明涉及病原微生物培养技领域，尤其涉及一种适用于滑液囊支原体的培养基及其制备方法。

背景技术：

1、滑液囊支原体是感染禽类的一种重要的致病性支原体。ms感染主要引起家禽关节炎、滑膜炎、气囊炎、生殖道炎，可导致病鸡明显的跛行，生长发育迟缓、产蛋量下降等，而且感染禽会终生带菌，难以根除，给养鸡业造成重大经济损失。由于ms基因组中缺少很多必须的编码氨基酸和辅助因子生物合成的基因，从而导致能量代谢缓慢，陷型某些营养辅助因子、氨基酸和脂类。需要从外界获取多种营养物质促进代谢繁殖，造成其培养基营养成分复杂，培养条件苛刻。目前，ms培养基面临着成本高，效率低的问题。

2、针对现有技术的不足，此方法提供一种鸡滑液囊支原体(wvu1853)培养基及其制备方法，既减少了血清等成分的使用，降低了外源异物对鸡只的过敏反应，降低了企业的生产成本，同时添加几种促进支原体生长的氨基酸，提高了鸡滑液囊支原体的活菌滴度。此方法活菌滴度和分离的敏感性远高于现有技术的培养基，更适合鸡滑液囊支原体的分离鉴定和疫苗生产。

技术实现思路

1、本发明的目的是解决现有技术存在的以下问题：

2、滑液囊支原体是感染禽类的一种重要的致病性支原体。ms感染主要引起家禽关节炎、滑膜炎、气囊炎、生殖道炎，可导致病鸡明显的跛行，生长发育迟缓、产蛋量下降等，而且感染禽会终生带菌，难以根除，给养鸡业造成重大经济损失。由于ms基因组中缺少很多必须的编码氨基酸和辅助因子生物合成的基因，从而导致能量代谢缓慢，陷型某些营养辅助因子、氨基酸和脂类。需要从外界获取多种营养物质促进代谢繁殖，造成其培养基营养成分复杂，培养条件苛刻。目前，ms培养基面临着成本高，效率低的问题。

3、为解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种适用于滑液囊支原体的培养基及其制备方法，该培养基的组分包括：超纯水100ml、氯化钠0.5g、氯化钾0.04g、七水合硫酸镁0.02g、十二水合磷酸氢二钠0.16g、磷酸二氢钾0.02g、葡萄糖1.0g、蛋白胨1g、酵母浸粉0.25g、1％酚红0.1ml以及辅助成分。

4、进一步的，所述辅助成分包括以下质量组分组成：鸡胚提取物、猪血清、80万单位/ml青霉素、1％nad、甘氨酸、赖氨酸、胆固醇、精氨

5、进一步的，所述培养基的制备方法如下：

6、步骤一：按照基础培养基配方组分配方配制六份基础培养基；

7、步骤二：灭菌：放置于高温高压灭菌锅中114℃30min蒸汽灭菌。

8、步骤三：添加辅助成分：鸡胚提取物2％-5％、猪血清0.5-3％、80万单位/ml青霉素1-4ml、1％nad1g、甘氨酸0.005-0.03g、赖氨酸0.002-0.0175g、胆固醇0.1-0.7、精氨酸0.005-0.030g，以不同比例组分分为六份并分别添加至基础培养基内。

9、步骤四：使用5mol/lnaoh溶液调节鸡滑液囊支原体cee培养基，ph至7.4-7.6，于4℃条件下保存。

10、进一步的，所述步骤三中的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物1％、猪血清0.5％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％nad1g、甘氨酸0.005g、赖氨酸0.002g、胆固醇0.1g、精氨酸0.005g。

11、进一步的，所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物2％、猪血清1.0％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％nad1g、甘氨酸0.010g、赖氨酸0.005g、胆固醇0.3g、精氨酸0.010g。

12、进一步的，所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物2.5％、猪血清1.5％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％nad1g、甘氨酸0.015g、赖氨酸0.0075g、胆固醇0.4g、精氨酸0.015g。

13、进一步的，所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物3％、猪血清2％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％nad1g、甘氨酸0.020g、赖氨酸0.0100g、胆固醇0.5g、精氨酸0.020g。

14、进一步的，所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物3.5％、猪血清2.5％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％nad1g、甘氨酸0.025g、赖氨酸0.0150g、胆固醇0.6、精氨酸0.025g。

15、进一步的，所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物4％、猪血清3％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％nad1g、甘氨酸0.030g、赖氨酸0.0175g、胆固醇0.7、精氨酸0.030g。

16、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

17、本发明针对现有技术的不足，用鸡胚提取物(cee)代替一定比例的动物血清，提供一种鸡滑液囊支原体培养基及其制备方法，减少了动物血清等成分的使用，降低了外源异物对鸡的过敏反应，降低了企业的生产成本。添加几种氨基酸(甘氨酸、赖氨酸、胆固醇和精氨酸)，同时添加几种促进支原体生长的氨基酸，提高了鸡滑液囊支原体的活菌滴度。更适合鸡滑液囊支原体的分离鉴定和疫苗生产。

技术特征：

1.一种适用于滑液囊支原体的培养基，其特征在于，该培养基的组分包括：超纯水100ml、氯化钠0.5g、氯化钾0.04g、七水合硫酸镁0.02g、十二水合磷酸氢二钠0.16g、磷酸二氢钾0.02g、葡萄糖1.0g、蛋白胨1g、酵母浸粉0.25g、1％酚红0.1ml以及辅助成分。

2.根据权利要求1所述的一种适用于滑液囊支原体的培养基，其特征在于：所述辅助成分包括以下质量组分组成：鸡胚提取物、猪血清、80万单位/ml青霉素、1％nad、甘氨酸、赖氨酸、胆固醇、精氨酸。

3.根据权利要求1所述的一种适用于滑液囊支原体培养基的制备方法，其特征在于：所述培养基的制备方法如下：

4.根据权利要求3所述的一种适用于滑液囊支原体培养基的制备方法，其特征在于：所述步骤三中的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物1％、猪血清0.5％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％nad1g、甘氨酸0.005g、赖氨酸0.002g、胆固醇0.1g、精氨酸0.005g。

5.根据权利要求3所述的一种适用于滑液囊支原体培养基的制备方法，其特征在于：所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物2％、猪血清1.0％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％nad1g、甘氨酸0.010g、赖氨酸0.005g、胆固醇0.3g、精氨酸0.010g。

6.根据权利要求3所述的一种适用于滑液囊支原体培养基的制备方法，其特征在于：所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物2.5％、猪血清1.5％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％nad1g、甘氨酸0.015g、赖氨酸0.0075g、胆固醇0.4g、精氨酸0.015g。

7.根据权利要求3所述的一种适用于滑液囊支原体培养基的制备方法，其特征在于：所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物3％、猪血清2％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％nad1g、甘氨酸0.020g、赖氨酸0.0100g、胆固醇0.5g、精氨酸0.020g。

8.根据权利要求3所述的一种适用于滑液囊支原体培养基的制备方法，其特征在于：所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物3.5％、猪血清2.5％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％nad1g、甘氨酸0.025g、赖氨酸0.0150g、胆固醇0.6、精氨酸0.025g。

9.根据权利要求3所述的一种适用于滑液囊支原体培养基的制备方法，其特征在于：所述步骤三中需调配添加不同比例的辅助成分，由以下组分组成：鸡胚提取物4％、猪血清3％、80万单位/ml青霉素1.5ml、1％nad1g、甘氨酸0.030g、赖氨酸0.0175g、胆固醇0.7、精氨酸0.030g。

技术总结
本发明提供一种适用于滑液囊支原体的培养基及其制备方法，涉及病原微生物培养技领域，该培养基的组分包括：超纯水100ml、氯化钠0.5g、氯化钾0.04g、七水合硫酸镁0.02g、十二水合磷酸氢二钠0.16g、磷酸二氢钾0.02g、葡萄糖1.0g、蛋白胨1g、酵母浸粉0.25g、1％酚红0.1ml以及辅助成分，本发明针对现有技术的不足，用鸡胚提取物(CEE)代替一定比例的动物血清，提供一种鸡滑液囊支原体培养基及其制备方法，减少了动物血清等成分的使用，降低了外源异物对鸡的过敏反应，降低了企业的生产成本。添加几种氨基酸(甘氨酸、赖氨酸、胆固醇和精氨酸)，同时添加几种促进支原体生长的氨基酸，提高了鸡滑液囊支原体的活菌滴度。更适合鸡滑液囊支原体的分离鉴定和疫苗生产。

技术研发人员：武小椿,贾尚栋,张旭东,王昊,包世俊,邢小勇,权国梅
受保护的技术使用者：甘肃农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15