一种与长牡蛎牛磺酸合成相关的分子标记及其应用

本发明属于水产生物，涉及一种与长牡蛎牛磺酸合成相关的分子标记及其应用。

背景技术：

1、牛磺酸是人类和大多数动物体内含量最丰富的游离氨基酸之一，具有抗氧化、抗疲劳、营养神经、维持体液平衡等多种生物学功能。牛磺酸是机体的条件性必需氨基酸，在多数动物体内的合成量不足，需要依靠饮食摄入。长牡蛎富含牛磺酸，是食源性牛磺酸的优质来源，在改善人类牛磺酸营养、增强机体免疫力等方面具有广阔的应用前景。然而，长牡蛎牛磺酸含量个体差异大，且测量流程复杂。因此，挖掘与牛磺酸含量紧密连锁的分子标记，对于准确评估长牡蛎牛磺酸含量、培育富含牛磺酸的牡蛎新品种具有重要的应用价值。

2、半胱胺双加氧酶(cysteamine dioxygenase，ado)是一种硫醇双加氧酶，广泛表达于多种组织和细胞中，在维持体内硫醇平衡，特别是在调控半胱氨酸代谢和牛磺酸合成方面发挥关键作用。ado通过氧化体内硫醇底物半胱胺来调节次牛磺酸和牛磺酸的合成，与机体牛磺酸含量密切相关。以ado为靶标基因，筛选与长牡蛎牛磺酸含量相关的分子标记并开发配套的快速分型技术，有助于推动高牛磺酸牡蛎新品种的培育进程，对于改善人类牛磺酸营养具有积极意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种与长牡蛎牛磺酸合成相关的半胱胺双加氧酶ado的分子标记及其应用。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

3、一种与长牡蛎牛磺酸合成相关的分子标记，分子标记为seq id no:1所示长牡蛎牛磺酸合成相关的半胱胺双加氧酶ado核苷酸序列5’端起第329个碱基为t或c。

4、所述分子标记为seq id no:1所示序列5’端起第329个碱基存在t>c突变，其高牛磺酸含量的基因型为329ct。

5、所述分子标记在鉴定或辅助鉴定长牡蛎牛磺酸含量和长牡蛎辅助育种中的应用。

6、一种用于扩增长牡蛎牛磺酸合成相关的分子标记的引物，所述特异性引物序列为：cgado-f(5′-cgttcccgatacagaaggcat-3′)，cgado-r(5′-ctctggggtgagaacacagc-3′)。

7、一种用于扩增长牡蛎牛磺酸合成相关的分子标记的试剂盒，含所述的引物。

8、一种应用，所述引物或试剂盒在鉴定或辅助鉴定长牡蛎牛磺酸含量和长牡蛎辅助育种中的应用。

9、一种长牡蛎高牛磺酸品种的选育方法，以待测长牡蛎的外套膜基因组dna为模板，利用引物cgado-f和cgado-r进行pcr扩增，用限制性内切酶alu i对pcr产物进行酶切；利用琼脂糖凝胶电泳技术检测酶切产物，若酶切产物为473bp一条条带，该位点为纯合tt型；若酶切产物为473bp、328bp和145bp三条条带，该位点为杂合ct型；收集ct杂合基因型个体，进行多代繁育后即可育成富含牛磺酸的新品种。

10、长牡蛎牛磺酸合成相关的半胱胺双加氧酶ado的分子标记辅助育种方法：将上述获得携带高牛磺酸含量相关分子标记的长牡蛎进行繁殖，培育子代，克隆获得子代中的半胱胺双加氧酶ado基因外显子区序列，分析其多态性；同时检测其牛磺酸含量，分析分子标记cgado-329t/c的遗传规律及其与富集牛磺酸能力的关系，从中筛选基因型为329ct、牛磺酸含量又显著提高的长牡蛎进行多代繁育，即可育成高牛磺酸的新品种。

11、本发明与已有技术相比其特点为：本发明借助分子生物学技术，以长牡蛎为实验材料发掘牛磺酸合成相关的半胱胺双加氧酶ado的分子标记，初步建立了长牡蛎牛磺酸合成相关的半胱胺双加氧酶ado的分子标记辅助育种技术，该技术具有操作便捷、选育效率高、周期短等特点，对养殖贝类高牛磺酸品种的选育具有重要的理论价值和实践意义。

技术特征：

1.一种与长牡蛎牛磺酸合成相关的分子标记，其特征在于：分子标记为seq id no:1所示长牡蛎牛磺酸合成相关的半胱胺双加氧酶ado核苷酸序列5’端起第329个碱基为t或c。

2.按权利要求1所述的与长牡蛎牛磺酸合成相关的分子标记，其特征在于：所述分子标记为seq id no:1所示序列5’端起第329个碱基存在t>c突变，其高牛磺酸含量的基因型为329ct。

3.按权利要求1所述的与长牡蛎牛磺酸合成相关的分子标记的应用，其特征在于：所述分子标记在鉴定或辅助鉴定长牡蛎牛磺酸含量和长牡蛎辅助育种中的应用。

4.一种用于扩增长牡蛎牛磺酸合成相关的分子标记的引物，其特征在于，所述特异性引物序列为：cgado-f(5′-cgttcccgatacagaaggcat-3′)，cgado-r(5′-ctctggggtgagaacacagc-3′)。

5.一种用于扩增长牡蛎牛磺酸合成相关的分子标记的试剂盒，其特征在于：含权利要求4所述的引物。

6.一种权利要求4或5所述的应用，其特征在于：所述引物或试剂盒在鉴定或辅助鉴定长牡蛎牛磺酸含量和长牡蛎辅助育种中的应用。

7.一种长牡蛎高牛磺酸品种的选育方法，其特征在于：以待测长牡蛎的外套膜基因组dna为模板，利用引物cgado-f和cgado-r进行pcr扩增，用限制性内切酶alu i对pcr产物进行酶切；利用琼脂糖凝胶电泳技术检测酶切产物，若酶切产物为473bp一条条带，该位点为纯合tt型；若酶切产物为473bp、328bp和145bp三条条带，该位点为杂合ct型；收集ct杂合基因型个体，进行多代繁育后即可育成富含牛磺酸的新品种。

技术总结
本发明属于水产生物技术领域，涉及一种与长牡蛎牛磺酸合成相关的分子标记及其应用。分子标记为SEQ ID NO:1所示长牡蛎牛磺酸合成相关的半胱胺双加氧酶ADO核苷酸序列5’端起第329个碱基为T或C。本发明首次从长牡蛎牛磺酸合成酶ADO基因外显子区筛选到与高牛磺酸含量相关的分子标记，建立了高牛磺酸含量标记基因型的快速检测方法和高牛磺酸品种的分子标记辅助育种方法。本发明具有针对性强、选育效率高、操作便捷等特点，适用于牡蛎牛磺酸含量的快速评估和高牛磺酸良种的选育。

技术研发人员：宋林生,孔宁,孙士晴,乔鑫,姜春雨,王玲玲
受保护的技术使用者：大连海洋大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15