一种与花生种皮彩色斑纹紧密连锁的分子标记AhyCs1及其应用

本发明涉及农业生物，特别是涉及一种与花生种皮彩色斑纹紧密连锁的分子标记ahycs1及其应用。

背景技术：

1、花生是我国重要的油料作物和经济作物，我国花生的年种植面积约为7000万亩，产量约1700万吨。花生富含脂肪酸、蛋白质，钙、铁、锌、硒等微量元素和维生素e，还富含白藜芦醇等功能活性物质，具有重要的保健作用。在我国，花生也被成为“长生果”，其功效在明代《本草纲目》、《杏林医学》、《陆川本草》、《全国中草药汇编》均有记载。在国外，大量的研究也表明花生在防治心血管疾病、治疗营养不良等方面具有显著的作用。例如，《新英格兰医学杂志》(the new england journal ofmedicine)的研究表明，每天吃坚果可以将心脏病的死亡率降低29％，甚至每周吃两次花生可以降低24％的风险(bao et al.2013)。在非洲，以花生为主的搭配特殊配方的花生酱已成为联合国治疗儿童营养不良的主要治疗性即食营养食品。2004年至今，花生酱计划(project peanut butter)已经治愈了100万营养不良儿童。

2、花生种皮，也被称为花生红衣，是花生营养物质的重要载体。花生种皮富含丰富的天然色素，特别是花青素，花青素具有抑制自由基、抗氧化等多种生物学功效(张瑜芳，2003)。另外，花生种皮也被成为花生红衣，是一味传统中药具有止血、治疗血友病的作用，花生红衣色素为纯天然的色素，无毒安全，是市场上难得的抗氧化天然色素。花生的种皮颜色以粉红色和红色为主，具有彩斑种皮的花生品种较少且普遍产量不高。花生种皮的着色深浅与花青素积累密切相关，花生种皮的彩斑区富集更多的花青素。花青素具有抗氧化、抑制自由基积累等多种生物学功效。近年来，彩斑种皮花生的市场需求正在不断增加。然而目前现有的彩斑品种只有“云南七彩花生”等少数品种。在河南、山东等花生主产区也没有彩斑花生品种，现有彩斑种皮花生品种的产量与常规品种相比偏低。因此，培育高产的彩斑种皮花生是满足市场需求的根本途径。

3、花生的种皮是也是由珠被发育而来的，和其他性状相比，种皮颜色要在隔代才能显现(zhao等2020)。另外，花生属于“地上开花、地下结果”的作物，需要收获后才能统计种皮的颜色。以上特性使得传统育种手段培育具有彩斑种皮的花生品种受到了很大的限制。分子标记辅助育种以基因型鉴定为主，对于彩斑种皮性状来说，通过切去种子的部分子叶，检测子叶的基因型可以提前确定下一代收获材料的种皮颜色(仇静静等，2018)，也可以通过检测当代叶片的基因型提前确定当代收获材料的种皮颜色，能够加速深彩斑花生新品种培育的进程，提高育种效率。然而，目前尚未有关于花生彩斑种皮相关基因及分子标记的报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种与花生种皮彩色斑纹紧密连锁的分子标记ahycs1及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明的分子标记能有效地鉴定花生的彩色斑纹种皮颜色，可以通过检测花生的种子和叶片dna提前确定下一代收获材料的种皮颜色，提高育种效率，并且有助于基因的精细定位、分离与克隆，也对于花生的分子育种和品质改良都具有重要的应用价值。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供一种与花生种皮彩色斑纹紧密连锁的分子标记ahycs1，所述分子标记ahycs1的特异性引物对包括：

4、核苷酸序列如seq id no.1所示的引物；

5、核苷酸序列如seq id no.2所示的引物。

6、本发明还提供一种利用所述的分子标记ahycs1鉴定花生种皮颜色的方法，包括以下步骤：

7、提取待测花生叶片或种子dna为模板，利用所述特异性引物对进行pcr扩增，之后将扩增产物进行凝胶电泳检测，根据凝胶电泳结果判断待测花生的种皮颜色。

8、进一步地，若凝胶电泳结果出现233bp大小的特征条带，则判定待测花生及其子代的种子为彩斑条纹皮。

9、进一步地，若凝胶电泳结果仅出现233bp大小的特征条带，则判定待测花生及其子代的种子为明显的彩斑条纹皮；若凝胶电泳结果同时出现229bp和233bp大小的特征条带，则判定待测花生及其子代的种子为颜色浅的彩斑条纹皮；若凝胶电泳结果仅出现229bp大小的特征条带，则判定待测花生及其子代的种子不是彩斑条纹皮。

10、进一步地，所述pcr扩增的pcr体系为：dna模板1μl，正向引物和反向引物各0.5μl，dntpmix 0.5μl，10×taq buffer 2.0μl，mgcl22.0μl，taq酶0.20μl，加水至20μl。

11、进一步地，所述pcr扩增的pcr程序为：预变性95℃3min；94℃30s，56℃30s，72℃20s，35个循环；72℃延伸5min。。

12、进一步地，所述凝胶电泳检测包括8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

13、本发明还提供一种鉴定花生种皮彩色斑纹的试剂盒，包含如seq id no.1-2所示的特异性引物对。

14、本发明还提供一种所述分子标记ahycs1的应用，所述分子标记ahycs1用于花生育种和/或花生品质改良中。

15、进一步地，用于鉴定种皮彩色斑纹花生。

16、本发明公开了以下技术效果：

17、本发明提供了一种与花生彩色斑纹种皮紧密连锁的分子标记ahycs1，可以用于鉴定彩色斑纹种皮的花生，可以通过检测花生的种子和叶片dna提前确定下一代收获材料的种皮颜色，提高育种效率。此外，花生是异源四倍体，a和b亚基因组等位基因高度同源，很多标记难以有效地区分a和b亚基因组，而本发明的分子标记是通过多次科学的实验和摸索后筛选出来的，结果可靠，可信度高。

18、本发明的分子标记是简单的pcr标记，技术要求简单，与caps分子标记相比，不需要经过酶切、纯化、回收等步骤，直接通过pcr扩增和电泳即可实现鉴定，对仪器操作要求也比较低，采用常规实验的常规仪器均可操作，更加容易被人们接受。

19、本发明的分子标记可以有效地鉴定花生的彩色斑纹种皮颜色，一方面有助于基因的精细定位、分离与克隆，另一方面对于花生的分子育种和品质改良都具有重要的应用价值。

技术特征：

1.一种与花生种皮彩色斑纹紧密连锁的分子标记ahycs1，其特征在于，所述分子标记ahycs1的特异性引物对包括：

2.一种利用权利要求1所述的分子标记ahycs1鉴定花生种皮颜色的方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，若凝胶电泳结果出现233bp大小的特征条带，则判定待测花生及其子代的种子为彩斑条纹皮。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，若凝胶电泳结果仅出现233bp大小的特征条带，则判定待测花生及其子代的种子为明显的彩斑条纹皮；若凝胶电泳结果同时出现229bp和233bp大小的特征条带，则判定待测花生及其子代的种子为颜色浅的彩斑条纹皮；若凝胶电泳结果仅出现229bp大小的特征条带，则判定待测花生及其子代的种子不是彩斑条纹皮。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述pcr扩增的pcr体系为：dna模板1μl，正向引物和反向引物各0.5μl，dntp mix 0.5μl，10×taq buffer 2.0μl，mgcl22.0μl，taq酶0.20μl，加水至20μl。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述pcr扩增的pcr程序为：预变性95℃3min；94℃30s，56℃30s，72℃20s，35个循环；72℃延伸5min。。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述凝胶电泳检测包括8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

8.一种鉴定花生种皮彩色斑纹的试剂盒，其特征在于，包含如seq id no.1-2所示的特异性引物对。

9.一种如权利要求1所述分子标记ahycs1的应用，其特征在于，所述分子标记ahycs1用于花生育种和/或花生品质改良中。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，用于鉴定种皮彩色斑纹花生。

技术总结
本发明公开了一种与花生种皮彩色斑纹紧密连锁的分子标记AhyCs1及其应用，属于农业生物技术领域，该分子标记AhyCs1的特异性引物对包括如SEQ ID No.1‑2所示的正向引物和反向引物。本发明的分子标记AhyCs1可以用于鉴定彩色斑纹种皮的花生，可以通过检测花生的种子和叶片DNA提前确定下一代收获材料的种皮颜色，提高育种效率，一方面有助于基因的精细定位、分离与克隆，另一方面对于花生的分子育种和品质改良都具有重要的应用价值。

技术研发人员：赵传志,马婧,王兴军,夏晗,潘教文,侯蕾,厉广辉,李膨呈,赵术珍,王光浩,李长生,李爱芹
受保护的技术使用者：山东省农业科学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15