一种抗人CD25工程抗体及应用的制作方法

本发明属于医药领域，尤其是涉及一种抗人cd25工程抗体及应用。

背景技术：

1、cd25在tregs中高水平表达，但在teff细胞中不表达。消除或逆转tregs的免疫抑制作用是肿瘤免疫治疗的关键。cd25是实现treg耗竭的潜在靶点，它在肿瘤微环境（tme）和外周微环境中的作用受到了广泛的关注。

2、treg细胞的耗竭直接促进肿瘤消退。尤其是在cd25靶向药物对cd25+肿瘤的研究中，它们与treg细胞和teff细胞的结合亲和力之间的平衡对于治疗效果至关重要。cd25靶向药物的给药剂量和时间也对治疗有深远影响，结果已经开发了有效地消耗肿瘤浸润treg细胞的策略，包括使用fc优化的抗cd25抗体，这增强了adcc效应。此外，当将抗pd-1/pd-l1抗体与fc优化的抗cd25抗体结合治疗小鼠肿瘤模型时，已观察到协同效应。

3、目前只有一个cd25靶向adc adct-301进入临床试验。adct-301含有一种il-2阻断抗cd25抗体，名为humax tac。该adc不仅可以靶向表达cd25的肿瘤细胞以治疗cd25+人类淋巴瘤，还可以通过靶向肿瘤内treg细胞来治疗cd 25实体瘤。目前，还没有il-2非阻断性抗cd25单抗用于adc。然而，这种类型的adc被认为具有更强的抗肿瘤活性。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种抗人cd25工程抗体及应用。

2、为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

3、本发明提供一种抗人cd25工程抗体，该工程抗体包括重链可变区与轻链可变区；

4、所述的重链可变区的互补决定区包括cdr1、cdr2与cdr3；所述的重链可变区的cdr1的氨基酸序列如seq id no.1所示；所述的重链可变区的cdr2的氨基酸序列如seq idno.2所示；所述的重链可变区的cdr3的氨基酸序列如seq id no.3所示；

5、所述的轻链可变区的互补决定区包括cdr1、cdr2与cdr3；所述的轻链可变区的cdr1的氨基酸序列如seq id no.4所示；所述的轻链可变区的cdr2的氨基酸序列如seq idno.5所示；所述的轻链可变区的cdr3的氨基酸序列如seq id no.6所示。

6、进一步，所述的重链可变区的骨架区包括fr1、fr2、fr3和fr4；所述的重链可变区的fr1的氨基酸序列如seq id no.7所示；所述的重链可变区的fr2的氨基酸序列如seq idno.8所示；所述的重链可变区的fr3的氨基酸序列如seq id no.9所示；所述的重链可变区的fr4的氨基酸序列如seq id no.10所示；

7、所述的轻链可变区的骨架区包括fr1、fr2、fr3和fr4；所述的轻链可变区的fr1的氨基酸序列如seq id no.11所示；所述的轻链可变区的fr2的氨基酸序列如seq id no.12所示；所述的轻链可变区的fr3的氨基酸序列如seq id no.13所示；所述的轻链可变区的fr4的氨基酸序列如seq id no.14所示。

8、进一步，所述的工程抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.15所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.16所示。

9、本发明还提供一种核酸分子，该核酸分子编码所述的抗人cd25工程抗体。

10、进一步，所述的核酸分子编码所述的抗人cd25工程抗体的重链可变区的核苷酸序列如seq id no:17所示，编码轻链可变区的核苷酸序列如seq id no:18所示。

11、本发明还提供一种表达载体，该表达载体包含所述的核酸分子。所述的表达载体为pcdna3.4或simple-t。

12、本发明还提供一种抗人cd25工程抗体的应用，所述的抗人cd25工程抗体在制备检测调节性t细胞的试剂中的应用。

13、调节性t细胞是维持机体免疫耐受的重要因素之一，它由胸腺产生后输出至外周，并通过主动调节的方式抑制存在于正常机体内潜在的自身反应性t细胞的活化与增殖，从而调节机体的免疫力，如防止自身免疫性疾病的发生。调节性t细胞的数量减少或功能异常均有可能导致自身免疫病的发生，一些自身免疫性疾病如多发性硬化症、活动性类风湿关节炎、i型糖尿病等调节性t细胞的数量和功能均会发生变化。在许多恶性疾病如肺、胰腺和乳腺癌等已经发现调节性t细胞明显增高。调节性t细胞也阻断抗肿瘤免疫反应从而导致死亡率上升，也可用于骨髓移植术前术后的跟踪。

14、进一步，所述的抗人cd25工程抗体在制备诊断多发性硬化症、类风湿关节炎或i型糖尿病的试剂中的应用；所述的抗人cd25工程抗体在制备治疗肿瘤的药物中的应用或在制备检测骨髓移植指标的试剂中的应用。

15、本发明还提供一种表达载体的应用，所述的表达载体在制备检测调节性t细胞的试剂中的应用；所述的表达载体在制备诊断多发性硬化症、类风湿关节炎或i型糖尿病的试剂中的应用；所述的表达载体在制备治疗肿瘤的药物中的应用或在制备检测骨髓移植指标的试剂中的应用。

16、本发明还提供一种免疫检测试剂盒，该试剂盒含有所述的抗人cd25工程抗体和/或所述的表达载体。

17、相对于现有技术，本发明具有以下优势：

18、本发明所述的抗人cd25工程抗体可用于调节性t细胞的检测，从而辅助多发性硬化症、类风湿关节炎、i型糖尿病的诊断。

19、本发明所述的抗人cd25单克隆抗体的轻链可变区基因和重链可变区基因及其表达产物，两者重组后表达产生的抗cd25抗体，能够特异性结合人cd25分子。

技术特征：

1.一种抗人cd25工程抗体，其特征在于：该工程抗体包括重链可变区与轻链可变区；

2.根据权利要求1所述的抗人cd25工程抗体，其特征在于：所述的重链可变区的骨架区包括fr1、fr2、fr3和fr4；所述的重链可变区的fr1的氨基酸序列如seq id no.7所示；所述的重链可变区的fr2的氨基酸序列如seq id no.8所示；所述的重链可变区的fr3的氨基酸序列如seq id no.9所示；所述的重链可变区的fr4的氨基酸序列如seq id no.10所示；

3.根据权利要求1所述的抗人cd25工程抗体，其特征在于：所述的工程抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.15所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.16所示。

4.一种核酸分子，其特征在于：该核酸分子编码权利要求1-3中任一项所述的抗人cd25工程抗体。

5.根据权利要求4所述的核酸分子，其特征在于：所述的核酸分子编码所述的抗人cd25工程抗体的重链可变区的核苷酸序列如seq id no:17所示，编码轻链可变区的核苷酸序列如seq id no:18所示。

6.一种表达载体，其特征在于：该表达载体包含权利要求4或5所述的核酸分子。

7.权利要求1-3中任一项所述的抗人cd25工程抗体的应用，其特征在于：所述的抗人cd25工程抗体在制备检测调节性t细胞的试剂中的应用。

8.根据权利要求7所述的抗人cd25工程抗体的应用，其特征在于：所述的抗人cd25工程抗体在制备诊断多发性硬化症、类风湿关节炎或i型糖尿病的试剂中的应用；所述的抗人cd25工程抗体在制备治疗肿瘤的药物中的应用或在制备检测骨髓移植指标的试剂中的应用。

9.权利要求6所述的表达载体的应用，其特征在于：所述的表达载体在制备检测调节性t细胞的试剂中的应用；所述的表达载体在制备诊断多发性硬化症、类风湿关节炎或i型糖尿病的试剂中的应用；所述的表达载体在制备治疗肿瘤的药物中的应用或在制备检测骨髓移植指标的试剂中的应用。

10.一种免疫检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有权利要求1-3中任一项所述的抗人cd25工程抗体和/或权利要求6所述的表达载体。

技术总结
本发明提供了一种抗人CD25工程抗体及应用，重链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；重链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；重链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明所述的抗人CD25工程抗体可用于调节性T细胞的检测，从而辅助多发性硬化症、类风湿关节炎、I型糖尿病的诊断。

技术研发人员：王蓓,李原,郝军凤,李子旸,曹雪飞,崔鹏,刘红芹,屈浩,廖晓龙
受保护的技术使用者：天津旷博同生生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15