一株蛹虫拟青霉及其溶胞物的制备和应用的制作方法

本发明属于微生物，具体涉及一株蛹虫拟青霉及其溶胞物的制备和应用。

背景技术：

1、蛹虫草 cordyceps militaris（l.fr.)，又名北虫草、北冬虫夏草，简称蛹草，为麦角菌科虫草属的模式种，是蛹虫草菌寄生于鳞翅目、鞘翅目等昆虫的幼虫、成虫和蛹上，并长出棒状橘红色子实体的虫菌复合体，蛹虫草为子囊菌门、肉座目、麦角菌科、虫草属的模式种。蛹虫草的无性型菌被鉴定为蛹虫拟青霉。

2、蛹虫草作为新食品原料富含虫草素、虫草多糖、虫草酸和大量核苷类、氨基酸类物质等具有良好的生物学活性。蛹虫草无性型蛹虫草拟青霉属于真菌，其是具有细胞核和细胞壁的异养生物。真菌细胞壁是一种复杂的多糖结构，其包裹着真菌胞质，使其免受外界渗透压、酸碱度等理化性质变化的影响。蛹虫草的细胞壁中最具特征性的成分是富含甲壳质(chitin)与葡聚糖，它们构成镶嵌及片层结构，均不能被人体吸收和降解，进而使得真菌的胞内成分难以释放而不能发挥高效和多种生物活性。而细胞壁结构的破坏则会导致质膜破裂和细胞溶解，从而释放全部的活性成分。由于细胞壁的主要成分使几丁质，又称甲壳质，是通过β-1,4糖苷键连接n-乙酰葡糖胺(2-乙酰胺-2-脱氧-d-葡萄糖)单体聚合而成的多糖结构，具有较大的拉伸强度，使得细胞壁难以被破环或者破环程度有限，因此，目前主要通过物理和化学因素进行细胞壁的破坏，但这些方法的破壁效率低且容易破环胞内的有效成分。

3、蛹虫草所含多种药效成分可在美容，修复，皮肤保养等方面发挥效应，特别是其活性成分虫草酸和虫草素含量明显高于冬虫夏草，使其得到人们的关注。蛹虫草溶胞产物具有很强的抗免增强活性，能促进炎性皮肤修复和镇静作用，抗氧化活性等，而且通过特定的制备方法具有美白、抗衰老的功能。因此，利用高效的方法获得蛹虫草内的溶胞物对于其应用具有重要的意义。

技术实现思路

1、本发明是提供了一株蛹虫拟青霉及其溶胞物的制备和应用。所述蛹虫拟青霉为蛹虫草无性型菌株 paecilomyces nukutaris jk207，其能够诱导产生甲壳质酶，将菌体细胞壁降解，发生溶胞现象而获得蛹虫草溶胞物。

2、为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

3、本发明提供了一株蛹虫拟青霉，其分类名为 paecilomyces nukutaris，保藏编号为cctcc no：m 20231136。

4、进一步的，所述蛹虫拟青霉的核苷酸序列如seq id no.1所示

5、进一步的，所述蛹虫拟青霉能够诱导产生甲壳质酶，且酶活不低于100 u/ml。

6、本发明还提供了利用所述的蛹虫拟青霉制备蛹虫草溶胞物的方法，其包括以下步骤：

7、（1）活化所述蛹虫拟青霉后，培养得到种子液；

8、（2）将所述种子液进行转温发酵，得到发酵液；

9、（3）将所述发酵液直接进行ph检测和诱导，再高温灭酶，离心取上清液，得到蛹虫草溶胞物原液；

10、（4）将所述蛹虫草溶胞物原液进行浓缩，得到蛹虫草溶胞物产物。

11、进一步的，所述步骤（1）中培养的条件为：培养温度 24℃，转速 150 r/min，培养时间3天。

12、进一步的，所述步骤（2）中种子液的接种量为10%；所述转温发酵的条件为：先22℃转速150 r/min培养24h，再转换成28℃培养温度，180 r/min继续培养24h。

13、进一步的，所述步骤（2）中使用的发酵培养基的配方为：葡萄糖 20 g/l、蛋白胨 5g/l、mgso4•7h2o 1.5 g/l、kh2po4 2 g/l、甲壳质5 g/l.

14、进一步的，所述步骤（3）中具体步骤为：将所述发酵液升温至38℃，用盐酸调节发酵产物ph=4.0，保温保持3h，以形成溶胞体系，然后升温至85℃，保持10分钟灭酶，离心取上清液，得到蛹虫草溶胞物原液。

15、进一步的，所述步骤（3）中发酵液还能够与经研磨、高温杀菌后保温在40~50℃的蛹虫草子实体原料以1:10的体积质量比混合，保温保持3h，以形成溶胞体系，然后升温至85℃，保持10分钟灭酶，离心取上清液，得到蛹虫草溶胞物原液。

16、本发明还提供了所述的方法制备得到的蛹虫草溶胞物。

17、本发明还提供了所述的蛹虫草溶胞物在制备化妆品和/或护肤品中的应用。

18、本发明与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：

19、本发明利用新鲜野生蛹虫草获得了一株蛹虫草无性型菌株jk207，该菌株在培养物ph=4.0，16℃诱导下能够分泌甲壳质酶，且jk207菌株的酶活力能够达到120u/ml；而甲壳质酶能够酶解蛹虫草菌丝体或子实体，使其失去骨架结构而原生质泄露或者被破壁，进而使得有效物质充分释放，达到释放胞内产物，而获得蛹虫草菌丝体或子实体溶胞物的目的，且细胞破碎率100%；得到的蛹虫草菌丝体或子实体溶胞物能够用于制备美白、抗衰老等护肤品、化妆品等产品，具有广阔的应用前景。

技术特征：

1.一株蛹虫拟青霉，其特征在于，所述蛹虫拟青霉的分类名为paecilomyces nukutaris，保藏编号为cctcc no：m 20231136。

2.根据所述权利要求1所述的蛹虫拟青霉，其特征在于，所述蛹虫拟青霉的核苷酸序列如seq id no.1所示。

3.利用权利要求1所述的蛹虫拟青霉制备蛹虫草溶胞物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中培养的条件为：培养温度24℃，转速 150 r/min，培养时间3天。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中种子液的接种量为10%；所述转温发酵的条件为：先22℃转速150 r/min培养24h，再转换成28℃培养温度，180 r/min继续培养24h。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中使用的发酵培养基的配方为：葡萄糖 20 g/l、蛋白胨 5 g/l、mgso4•7h2o 1.5 g/l、kh2po4 2 g/l、甲壳质5 g/l。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中具体步骤为：将所述发酵液升温至38℃，用盐酸调节发酵产物ph=4.0，保温保持3h，以形成溶胞体系，然后升温至85℃，保持10分钟灭酶，离心取上清液，得到蛹虫草溶胞物原液。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中发酵液还能够与经研磨、高温杀菌后保温在40~50℃的蛹虫草子实体原料以1:10的体积质量比混合，保温保持3h，以形成溶胞体系，然后升温至85℃，保持10分钟灭酶，离心取上清液，得到蛹虫草溶胞物原液。

9.权利要求3-8任一项所述的方法制备得到的蛹虫草溶胞物。

10.权利要求9所述的蛹虫草溶胞物在制备化妆品和/或护肤品中的应用。

技术总结
本发明公开了一株蛹虫拟青霉及其溶胞物的制备和应用。本发明的蛹虫拟青霉Paecilomyces nukutaris，其保藏编号为CCTCC NO：M 20231136，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；该菌株能够分泌甲壳质酶，且JK207菌株的酶活力能够达到120U/ml；而甲壳质酶能够酶解蛹虫草菌丝体或子实体，使其失去骨架结构而原生质泄露或者被破壁，进而使得有效物质充分释放，达到释放胞内产物，而获得蛹虫草菌丝体或子实体溶胞物的目的，且细胞破碎率100%；得到的蛹虫草菌丝体或子实体溶胞物能够用于制备美白、抗衰老等护肤品、化妆品等产品，具有广阔的应用前景。

技术研发人员：江晓路,尚丽丽,宋克鹏,朱宗敏,李福臣
受保护的技术使用者：青岛黛优佳生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15