一种鉴别不同结缕草种质亲缘关系的引物及应用

本发明涉及结缕草种质亲缘关系鉴别，更具体地说是涉及一种鉴别不同结缕草种质亲缘关系的引物及应用。

背景技术：

1、结缕草属(zoysia willd.)隶属于禾本科多年生低矮草本植物，一般分为11个种，多个变种以及变型，其中大多数结缕草可用于运动场草坪、休憩草坪及保土草坪等的建植。结缕草属植物在我国分布有5个种，2个变种和1个变型。5个种分别是结缕草(z.japonicasteud.)、细叶结缕草(z.tenuiflia willd.extrin.)、沟叶结缕草(z.matrella(l.)merr.)、大穗结缕草(z.macorostachya franch.etsva.)以及中华结缕草(z.sinicahance)；2个变种分别是青结缕草(z.japon ica var.pollida nakai et honda)和长花结缕草(z.sinica var.nipponica ohwi.)；1个变型是大穗日本结缕草(z.japonicaf.macrostachya h.d.dung et l.j.gong)。其中结缕草是该属中分布范围最广、应用面积最大的一个种，也是中国结缕草属的代表种。

2、近年来，分子标记技术在草坪草种质资源的研究中的应用越来越广泛。在结缕草属植物的研究中也有广泛的应用。est-ssr(expressed sequence tag-simple sequencerepeat)是基于表达序列标签开发微卫星的一种分子标记，与基因组ssr标记相比具有更高的转译能力。由于est-ssr标记是一类功能标记，是以推测出est序列功能为基础获得的。目前，est-ssr被广泛应用于植物基因组学研究，遗传图谱的构建、比较作图、遗传多样性的评价等方面。很少应用于结缕草属种质资源的研究。

3、因此，如何将est-ssr应用于结缕草的分子标记中，并开发鉴定不同结缕草种质亲缘关系的引物是本领域技术人员亟需解决的技术问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，基于est-ssr分子标记的诸多优越性，本发明采用est-ssr分子标记的方法对不同地理来源的结缕草属种质进行遗传变异研究，从分子水平上探讨了结缕草种质资源的遗传多样性，为结缕草属种质资源的研究奠定了良好的基础。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种鉴别不同结缕草种质亲缘关系的引物，所述引物序列如seq id no.11～seqid no.12所示；

4、上游引物f：5’-tgctcaaacttgctttcctg-3’，如seq id no.11所示；

5、下游引物r：5’-ccgtgcaatcgtagtaccag-3’，如seq id no.12所示。

6、优选地，所述引物序列还包括：seq id no.1～seq id no.10和seq id no.13～seq id no.40所述的引物中的任意两组引物。

7、作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护所述的引物在制备鉴别不同种质结缕草亲缘关系的试剂盒中的应用。

8、作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护一种鉴别不同结缕草种质亲缘关系的试剂盒，包括seq id no.1～seq id no.40所示引物中任意一组或三组的结合；具体为：

9、

10、作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护一种鉴别不同种质结缕草亲缘关系的方法，以所述试剂盒进行检测。

11、作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护一种鉴别不同结缕草种质亲缘关系的方法，过程包括：

12、1)利用筛选出的20对est-ssr引物中的任意3对引物对43份结缕草属种质进行est-ssr的pcr扩增，得到多态性条带，并观察每对引物扩增出的等位基因数量；

13、2)根据est-ssr引物的多态性条带，利用ntsys软件对43份结缕草属种质进行遗传多样性研究，确定遗传系数，分析亲缘关系的远近。

14、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种鉴别不同种质结缕草亲缘关系的引物，该引物可以对不同种质结缕草间的亲缘关系进行鉴定，为后续研究结缕草的遗传性能奠定了基础。

技术特征：

1.一种鉴别不同结缕草种质亲缘关系的引物，其特征在于，所述引物序列如seq idno.11～seq id no.12所示；

2.根据权利要求1所述的一种鉴别不同结缕草种质亲缘关系的引物，其特征在于，所述引物序列还包括：seq id no.1～seq id no.10和seq id no.13～seq id no.40所述的引物中的任意两组引物。

3.权利要求1或2所述的引物在制备鉴别不同结缕草种质亲缘关系的试剂盒中的应用。

4.一种鉴别不同结缕草种质亲缘关系的试剂盒，其特征在于，包括seq id no.1～seqid no.40所示引物中任意一组或三组的结合；具体为：

5.一种鉴别不同结缕草种质亲缘关系的方法，其特征在于，以所述试剂盒进行检测。

6.根据权利要求5所述的一种鉴别不同结缕草种质亲缘关系的方法，其特征在于，过程包括：

技术总结
本发明公开了一种鉴别不同结缕草种质亲缘关系的引物，属于结缕草种质亲缘关系鉴定技术领域，引物序列如SEQ ID NO.11～SEQ ID NO.12所示，将该引物用于制备试剂盒，可以特定对结缕草的亲缘关系进行鉴定。

技术研发人员：黄春琼,董荣书,何潇,刘攀道,严琳玲,刘国道
受保护的技术使用者：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15