HBHA单克隆抗体及其在抗牛分枝杆菌感染中的应用

本申请属于畜牧业抗感染领域和生物，具体地，本申请提供了hbha单克隆抗体及其在抗牛分枝杆菌感染中的应用。

背景技术：

1、结核病(tuberculosis,tb)是由结核分枝杆菌复合群(mycobacteriumtuberculosis complex,mtbc)的分枝杆菌感染引起的一种古老的慢性消耗性人畜共患病。牛分枝杆菌(mycobacterium bovis,m.bovis)是结核病的一种重要病原体，除了可以感染牛外，还可以感染家养及野生动物，甚至人类，严重危害人类健康和养殖业的持续发展。卡介苗(bacillus calmette–guérin,bcg)目前仍然是1921年以来唯一被批准用于临床的结核病疫苗，但它的免疫效用却十分有限。因此，迫切需要研发新型结核病疫苗。

2、牛分枝杆菌是胞内菌，目前正在临床试验中的结核病候选疫苗主要通过增强细胞免疫来诱导保护。然而，已有研究表明抗体可通过多种方式抵御胞内病原体。我们前期研究发现，牛分枝杆菌细胞壁免疫血清通过促进巨噬细胞对牛分枝杆菌的摄取，增强吞噬体-溶酶体的融合，限制细菌的胞内生长等方式抵抗致病性牛分枝杆菌感染(qu m,etal.antibodies targeting the cell wall induce protection against virulentmycobacterium bovis infection[published online ahead of print,2023feb 27].microbiol spectr.2023；11(2):e0343122.doi:10.1128/spectrum.03431-22)。尽管免疫血清在推动结核病保护性抗体的研究中起到重要作用，但对于保护性抗体的表征仍存在一定的限制。同时，我们仍然需要解决许多关键问题，例如引起保护性抗体的抗原表征，介导保护的分子机制等。为了解决这些问题，筛选针对牛分枝杆菌的保护性单克隆抗体具有重大意义。

技术实现思路

1、前期研究结果表明，牛分枝杆菌c68004菌株细胞壁(c68004-cw)的免疫血清具有预防和治疗牛分枝杆菌感染的作用(qu m,et al.antibodies targeting the cell wallinduce protection against virulent mycobacterium bovis infection[publishedonline ahead of print,2023feb 27].microbiol spectr.2023；11(2):e0343122.doi:10.1128/spectrum.03431-22)，在本专利研究中构建c68004-cw免疫小鼠模型，利用杂交瘤技术进行细胞融合，并借助间接elisa筛选c68004-cw特异性单克隆抗体，通过体外和体内试验检测单克隆抗体对于牛分枝杆菌感染的影响，通过质谱分析和蛋白免疫印迹检测单克隆抗体的靶向抗原，最终获得抗牛分枝杆菌感染的单克隆抗体。

2、一方面，本申请提供了一种hbha单克隆抗体，所述单克隆抗体中重链可变区cdr氨基酸序列为：hcdr1 seq id no.5、hcdr2 seq id no.6、hcdr3 seq id no.7；轻链可变区cdr氨基酸序列为：lcdr1 seq id no.8、lcdr2 seq id no.9、lcdr3 seq id no.10。

3、进一步地，所述单克隆抗体中重链可变区氨基酸序列为seq id no.1；轻链可变区氨基酸序列为seq id no.3。

4、另一方面，本申请提供了上述抗体在制备治疗牛分枝杆菌感染的药物中的应用。

5、另一方面，本申请提供了上述抗体在制备诊断牛分枝杆菌感染的试剂中的应用。

6、另一方面，本申请提供了治疗牛分枝杆菌感染的药物组合物，所述药物组合物中包含上述抗体。

7、进一步地，所述药物组合物中还包含药学上可接受的辅料。

8、另一方面，本申请提供了编码上述单克隆抗体的核酸，所述核酸包含编码重链可变区的seq id no.2所示的核酸以及编码轻链可变区的seq id no.4所示的核酸。

9、另一方面，本申请提供了包含上述核酸的载体。

10、另一方面，本申请提供了包含载体的宿主细胞。

11、另一方面，本申请提供了生产上述抗体的方法，包括配合上述宿主细胞的步骤。

12、本发明获得的单克隆抗体2h3不仅可以抑制巨噬细胞内牛分枝杆菌的存活，并且可抵抗牛分枝杆菌在小鼠体内感染；提供了治疗牛分枝杆菌的新手段，为深入理解抗体在抵抗牛分枝杆菌中的作用提供科学证据，并为新型结核病疫苗的研发提供了新材料。

技术特征：

1.一种hbha单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体中重链可变区cdr氨基酸序列为：hcdr1 seq id no.5、hcdr2 seq id no.6、hcdr3 seq id no.7；轻链可变区cdr氨基酸序列为：lcdr1 seq id no.8、lcdr2 seq id no.9、lcdr3 seq id no.10。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体中重链可变区氨基酸序列为seq id no.1；轻链可变区氨基酸序列为seq id no.3。

3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体在制备治疗牛分枝杆菌感染的药物中的应用。

4.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体在制备诊断牛分枝杆菌感染的试剂中的应用。

5.治疗牛分枝杆菌感染的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中包含根据权利要求1或2所述的抗体。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述药物组合物中还包含药学上可接受的辅料。

7.编码根据权利要求1或2所述的单克隆抗体的核酸，其特征在于，所述核酸包含编码重链可变区的seq id no.2所示的核酸以及编码轻链可变区的seq id no.4所示的核酸。

8.载体，其特征在于，所述载体包含根据权利要求7所述的核酸。

9.宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含根据权利要求8所述的载体。

10.生产根据权利要求1或2所述的单克隆抗体的方法，其特征在于，所述方法包括培养根据权利要求9所述的宿主细胞的步骤。

技术总结
本发明提供一种靶向HBHA的单克隆抗体及其在抗牛分枝杆菌感染中的新用途，所述单克隆抗体中重链可变区CDR氨基酸序列为：HCDR1SEQ ID NO.5、HCDR2SEQ ID NO.6、HCDR3SEQ ID NO.7；轻链可变区CDR氨基酸序列为：LCDR1SEQ ID NO.8、LCDR2SEQ ID NO.9、LCDR3SEQ ID NO.10。实验结果表明，单克隆抗体2H3不仅可以抑制巨噬细胞内牛分枝杆菌的存活，并且可抵抗牛分枝杆菌在小鼠体内感染；提供了治疗牛分枝杆菌的新手段，为深入理解抗体在抵抗牛分枝杆菌中的作用提供科学证据，并为新型结核病疫苗的研发提供了新材料。

技术研发人员：周向梅,屈孟锦,王元智,葛昕,刘一朵
受保护的技术使用者：中国农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15