用于改善皮肤老化的组合粪菌、粪菌移植胶囊及其应用的制作方法

本发明属于粪菌移植应用领域，更具体地，涉及用于改善皮肤老化的组合粪菌、粪菌移植胶囊及其应用。

背景技术：

1、粪菌移植(fecal microbiota transplantation，fmt)属于菌群移植技术的一种，其是将健康人粪便中的功能菌群，移植到患者胃肠道内，重建新的肠道菌群，实现肠道内及肠道外疾病的治疗。然而，粪菌移植主要通过机械介入，体验感差，且操作过程复杂、缺少统一标准，导致不同研究之间疗效差异较大，极大地限制了粪菌移植的临床推广和应用。

2、现有技术中已有将粪菌制备成粪菌移植胶囊进行推广和应用，如专利cn112089736b一种全菌胶囊及其制备方法和应用，其利用高通量测序筛选与粪菌受体互补的粪菌供体，制备全菌胶囊或药物，但其应用于炎性肠病或艰难梭菌感染的肠道疾病的治疗。而粪菌移植中移植物的肠道菌群组成是决定粪菌移植效果的关键因素，粪菌供体的选择不同、粪菌液的制备方法不同都会导致移植物中的菌群组成不同，因此，通常不同粪便样本来源的粪菌供体发挥着不同的作用，往往需筛选符合要求的粪菌供体。

3、虽粪菌移植已逐渐推广应用于慢性便秘、腹泻、肠易激综合征和炎性肠病等肠道功能性和器质性疾病，但从全球范围看，粪菌移植更多是处于科研或临床试验初级阶段，其蕴藏的潜在风险不容忽视。目前粪菌移植的推广应用仍还需更多更深入的研究，而至今尚未见粪菌移植在缓解人体皮肤老化方面的应用研究。

技术实现思路

1、针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种用于改善皮肤老化的组合粪菌、粪菌移植胶囊及其应用，其目的在于发现双形霍尔德曼菌、齿双歧杆菌、普拉梭菌、长链多尔氏菌、史氏甲烷短杆菌和青春双歧杆菌，以及梭状芽胞杆菌、直肠真杆菌、粪便拟杆菌、死亡梭杆菌中一种或多种的组合粪菌能够提升皮肤弹性和含水量，并降低皮肤粗糙度，具有改善皮肤老化的作用，其中双形霍尔德曼菌、齿双歧杆菌、普拉梭菌、长链多尔氏菌、史氏甲烷短杆菌、青春双歧杆菌与改善皮肤老化正相关，通过高通量测序筛选包括所述组合粪菌的粪菌供体制备粪菌移植胶囊，可以有效改善皮肤老化的问题，由此解决现有皮肤老化的技术问题。

2、为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种用于改善皮肤老化的组合粪菌，其包括双形霍尔德曼菌、齿双歧杆菌、普拉梭菌、长链多尔氏菌、史氏甲烷短杆菌、青春双歧杆菌；

3、以及梭状芽胞杆菌、直肠真杆菌、粪便拟杆菌、死亡梭杆菌中一种或多种；其中双形霍尔德曼菌、齿双歧杆菌、普拉梭菌、长链多尔氏菌、史氏甲烷短杆菌和青春双歧杆菌的活菌数占组合粪菌的50％以上。

4、优选地，所述用于改善皮肤老化的组合粪菌，其所述双形霍尔德曼菌、齿双歧杆菌、普拉梭菌、长链多尔氏菌、史氏甲烷短杆菌、青春双歧杆菌的活菌数均在boxplot分析获得的对应微生物的中位值ai以上；所述梭状芽胞杆菌、直肠真杆菌、粪便拟杆菌、死亡梭杆菌中活菌数在boxplot分析获得的对应微生物的中位值bj以下。

5、优选地，所述用于改善皮肤老化的组合粪菌，其所述中位值ai为在无重大疾病至少3个月内未服用任何抗生素的18～25岁年轻人群中，对相应微生物进行boxplot分析获得的每个对应微生物的中位值；

6、所述中位值bj为在无重大疾病至少3个月内未服用任何抗生素的60～75岁老年人群中，对相应微生物进行boxplot分析获得的每个对应微生物的中位值。

7、优选地，所述用于改善皮肤老化的组合粪菌，其所述组合粪菌中活菌数在1×109cfu/ml以上。

8、按照本发明的另一方面，还提供了一种如本发明所述组合粪菌在改善皮肤老化中的应用，其所述皮肤老化包括皮肤弹性下降、皮肤粗糙度增加或皮肤水分含量下降的症状。

9、优选地，所述组合粪菌在改善皮肤老化中的应用，其应用于制备改善皮肤老化的粪菌制剂，所述粪菌制剂包括胶囊、粉剂和/或片剂。

10、按照本发明的另一方面，还提供了一种用于改善皮肤老化的粪菌移植胶囊，其包括如本发明所述组合粪菌。

11、按照本发明的另一方面，还提供了一种如本发明所述粪菌移植胶囊的制备方法，其包括以下步骤：

12、(1)利用高通量测序筛选含如本发明所述的组合粪菌的粪便样本，逐级过滤，最后经0.22μm的过滤膜制备成粪菌浓缩液；所述粪菌浓缩液，其活菌数在1×109cfu/ml以上；

13、(2)将步骤(1)获得的粪菌浓缩液与冻干保护液按体积比为3～7:1混合，真空冷冻干燥，获得冻干粪菌粉，将冻干粪菌粉装入胶囊壳内，即为粪菌移植胶囊。

14、优选地，所述粪菌移植胶囊的制备方法，其所述组合粪菌包括活菌数在对应中位值以上的双形霍尔德曼菌(holdemanella biformis)、齿双歧杆菌(bifidobacteriumdentium)、普拉梭菌(faecalibacteriumprausnitzii)、长链多尔氏菌(dorealongicatena)、史氏甲烷短杆菌(methanobrevibacter smithii)和青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)以及活菌数在对应中位值以下的梭状芽胞杆菌(clostridiumsensu stricto)、直肠真杆菌(eubacterium rectale)、粪便拟杆菌(bacteroides caccae)和死亡梭杆菌(fusobacterium mortiferum)。

15、优选地，所述粪菌移植胶囊的制备方法，其所述冻干保护液为10％-20％脱脂奶粉、2％-7％海藻糖、1-3％甘露糖，余量为无菌生理盐水。

16、优选地，所述粪菌移植胶囊的制备方法，其所述粪便样本选自年龄在12-24岁、无重大疾病至少3个月内未服用任何抗生素且不含致病菌的粪便样本。

17、总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，能够取得下列有益效果：

18、本发明提供的组合粪菌包括双形霍尔德曼菌、齿双歧杆菌、普拉梭菌、长链多尔氏菌、史氏甲烷短杆菌、青春双歧杆菌，以及梭状芽胞杆菌、直肠真杆菌、粪便拟杆菌、死亡梭杆菌中一种或多种，其中据现有报道双形霍尔德曼菌、齿双歧杆菌、普拉梭菌、长链多尔氏菌、史氏甲烷短杆菌、青春双歧杆菌与改善皮肤老化正相关，梭状芽胞杆菌、直肠真杆菌、粪便拟杆菌、死亡梭杆菌与改善皮肤老化负相关，但经实验证实，本发明提供的组合粪菌能够改善人体皮肤老化，而报道的正相关的双形霍尔德曼菌、齿双歧杆菌、普拉梭菌、长链多尔氏菌、史氏甲烷短杆菌、青春双歧杆菌组合菌却并没有改善人体皮肤老化的效果。

19、另外，利用本发明提供的组合粪菌制备的粪菌移植胶囊，测试者服用8周后，皮肤弹性和含水量均得到提高，粗糙度降低，75％以上测试者的皮肤老化均得到改善，可见，本发明提供的粪菌移植胶囊具有良好的提升皮肤弹性和含水量及降低皮肤粗糙度的作用，可应用于改善皮肤老化的问题。

技术特征：

1.一种用于改善皮肤老化的组合粪菌，其特征在于，包括双形霍尔德曼菌、齿双歧杆菌、普拉梭菌、长链多尔氏菌、史氏甲烷短杆菌和青春双歧杆菌，以及梭状芽胞杆菌、直肠真杆菌、粪便拟杆菌、死亡梭杆菌中一种或多种组合；其中双形霍尔德曼菌、齿双歧杆菌、普拉梭菌、长链多尔氏菌、史氏甲烷短杆菌和青春双歧杆菌的活菌数占组合粪菌的50％以上。

2.如权利要求1所述的用于改善皮肤老化的组合粪菌，其特征在于，所述双形霍尔德曼菌、齿双歧杆菌、普拉梭菌、长链多尔氏菌、史氏甲烷短杆菌、青春双歧杆菌的活菌数均在boxplot分析获得的对应微生物的中位值ai以上；所述梭状芽胞杆菌、直肠真杆菌、粪便拟杆菌、死亡梭杆菌中活菌数在boxplot分析获得的对应微生物的中位值bj以下。

3.如权利要求2所述的用于改善皮肤老化的组合粪菌，其特征在于，所述中位值ai为在无重大疾病至少3个月内未服用任何抗生素的18～25岁年轻人群中，对相应微生物进行boxplot分析获得的每个对应微生物的中位值；

4.如权利要求1至3任意一项所述的用于改善皮肤老化的组合粪菌，其特征在于，所述组合粪菌中活菌数在1×109cfu/ml以上。

5.一种如权利要求4所述组合粪菌在改善皮肤老化中的应用，其所述皮肤老化包括皮肤弹性下降、皮肤粗糙度增加或皮肤水分含量下降的症状。

6.如权利要求5所述的组合粪菌在改善皮肤老化中的应用，其特征在于，应用于制备改善皮肤老化的粪菌制剂，所述粪菌制剂包括胶囊、粉剂和/或片剂。

7.一种用于改善皮肤老化的粪菌移植胶囊，其特征在于，包括如权利要求4所述组合粪菌。

8.一种如权利要求7所述粪菌移植胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.如权利要求8所述的粪菌移植胶囊的制备方法，其特征在于，所述组合粪菌包括活菌数在对应中位值以上的双形霍尔德曼菌(holdemanella biformis)、齿双歧杆菌(bifidobacterium dentium)、普拉梭菌(faecalibacterium prausnitzii)、长链多尔氏菌(dorea longicatena)、史氏甲烷短杆菌(methanobrevibacter smithii)和青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)以及活菌数在对应中位值以下的梭状芽胞杆菌(clostridiumsensu stricto)、直肠真杆菌(eubacterium rectale)、粪便拟杆菌(bacteroides caccae)和死亡梭杆菌(fusobacterium mortiferum)。

10.如权利要求8所述的粪菌移植胶囊的制备方法，其特征在于，所述冻干保护液为10％-20％脱脂奶粉、2％-7％海藻糖、1-3％甘露糖，余量为无菌生理盐水。

技术总结
本发明公开了一种用于改善皮肤老化的组合粪菌、粪菌移植胶囊及其应用，其包括双形霍尔德曼菌、齿双歧杆菌、普拉梭菌、长链多尔氏菌、史氏甲烷短杆菌、青春双歧杆菌，以及梭状芽胞杆菌、直肠真杆菌、粪便拟杆菌、死亡梭杆菌中一种或多种，其中双形霍尔德曼菌、齿双歧杆菌、普拉梭菌、长链多尔氏菌、史氏甲烷短杆菌、青春双歧杆菌与改善皮肤老化正相关。另外，按照本发明的组合粪菌高通量测序筛选粪菌供体制备的粪菌移植胶囊，在服用8周后测试者皮肤弹性和皮肤含水量均得到提高，而皮肤粗糙度降低，具有明显的改善皮肤老化的效果，能够应用于改善皮肤老化。

技术研发人员：董思辰
受保护的技术使用者：深圳施诺华生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16