动物血纤维连接蛋白联产方法与流程

文档序号:36174940发布日期:2023-11-24 23:08阅读:69来源:国知局

本公开涉及动物血纤维连接蛋白联产方法。


背景技术:

1、纤维连接蛋白国内通用名“fn”,英文fibronectin。fn是1974年国外研究发现的一种大分子糖蛋白,具有多种生物活性和生物学功能。目前国内外大量对fn的应用研究主要表现在两个方面:1、作为生化试剂,为细胞培养和生物工程的工业化应用提供基础。2、应用于多种疾病的诊断和治疗,(如:伤口的修复和愈合,癌症的诊断和治疗等)。

2、专利号为cn200510017717.8的专利中,提出了一种将fn、sod、免疫球蛋白、血红素几种生化物质,在同一个工艺流程中分离提取出来的动物血纤维连接蛋白联产方法,向新鲜动物血中加入柠檬酸三钠抗凝,迅速离心,分别收集血浆和血球,贮存于10度以下环境中,向血浆中加硫酸铵至饱和度20-30%,静置1小时以上,过滤或吊滤,取沉淀物溶鲜,上亲和层析柱,提取分离出fn主峰液,再经分子筛层析纯化,超滤浓缩,除菌,最后冷冻干燥,得fn产品,具有原料来源丰富,工艺简单,适合规模化生产的优点。

3、在这个方案中,动物血液中的多种生化物质被同时提取分离。然而,不同生化物质在离心、加硫酸铵、冷冻干燥等处理过程中可能会受到损失或降解,导致产品的质量和稳定性下降。


技术实现思路

1、为了解决上述问题,本公开提供了一种动物血纤维连接蛋白联产方法包括:

2、向新鲜动物血中加入柠檬酸三钠抗凝,离心,分别收集得到血浆和血球;

3、在所述血浆中,加入磁性纳米颗粒-聚合物复合材料,通过外加磁场,将磁性纳米颗粒-聚合物复合材料与目标血浆蛋白结合并形成沉淀,过滤,得到第一滤液和磁力沉淀物;

4、撤销外加磁场,将磁性纳米颗粒-聚合物复合材料与纤维连接蛋白分离,得到纤维连接蛋白沉淀物;

5、所述磁性纳米颗粒-聚合物复合材料包括包括羧基化三氧化二铁磁性纳米颗粒、聚乙烯醇和水;

6、将纤维连接蛋白沉淀物溶解,上亲和层析柱,提取分离出fn主峰液,再经分子筛层析纯化,超滤浓缩,最后冷冻干燥,得fn产品。

7、所述羧基化三氧化二铁磁性纳米颗粒的内核直径为5-30nm,所述水动力尺寸为50-150nm,羧基化三氧化二铁磁性纳米颗粒的zeta电位为-70mv。

8、所述聚乙烯醇的分子量范围是5000da至10000da。

9、所述羧基化三氧化二铁磁性纳米颗粒、聚乙烯醇的质量比为1:2-5。

10、所述联产方法还包括以下步骤:

11、在所述第一滤液中加入硫酸铵至饱和度50-60%,静置1小时以上,过滤,收集沉淀物,经超滤脱盐,冷冻干燥,得免疫球蛋白产品。

12、将所述血球洗涤干净,加等体积水溶血,溶血液在温度为60-75度下加热10-20分钟,过滤分别收集得到第二滤液和血红蛋白沉淀。

13、将所述第二滤液按体积加入0.25倍的乙醇、0.15倍的氯仿,在4度环境下静置1小时以上,离心、收集上清液,经超滤浓缩制得sod粗品液。

14、将所述血红蛋白沉淀物用水调成粥状,然后按体积加入3-5倍丙酮和盐酸混合液,过滤,向滤液中加入滤液体积1%的乙酸钠或5%鞣酸,静置30分钟以上,离心或过滤,收集沉淀物即为血红素粗品。

15、本发明的有益效果:

16、超顺磁性纳米颗粒在外加磁场下表现出强磁响应,能够被磁力场牵引和操控。能够快速而可控地实现沉淀和分离。超顺磁性纳米颗粒具有较高的稳定性和长期的磁性特性。通过聚合物包覆可以增加纳米颗粒与目标生物分子的相互作用,提高选择性。磁性纳米颗粒在生物体内的生物相容性和稳定性,以实现生物医学应用。

17、参考以下详细说明更易于理解本申请的上述以及其它特征、方面和优点。



技术特征:

1.一种动物血纤维连接蛋白联产方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的一种动物血纤维连接蛋白联产方法,其特征在于,所述羧基化三氧化二铁磁性纳米颗粒的内核直径为5-30nm,所述水动力尺寸为50-150nm,羧基化三氧化二铁磁性纳米颗粒的zeta电位为-70mv。

3.根据权利要求1所述的一种动物血纤维连接蛋白联产方法,其特征在于,所述聚乙烯醇的分子量范围是5000da至10000da。

4.根据权利要求1所述的一种动物血纤维连接蛋白联产方法,其特征在于,所述羧基化三氧化二铁磁性纳米颗粒、聚乙烯醇的质量比为1:2-5。

5.根据权利要求1所述的一种动物血纤维连接蛋白联产方法,其特征在于,所述联产方法还包括以下步骤:

6.根据权利要求1所述的一种动物血纤维连接蛋白联产方法,其特征在于,所述联产方法还包括以下步骤:

7.根据权利要求1所述的一种动物血纤维连接蛋白联产方法,其特征在于,所述联产方法还包括以下步骤:

8.根据权利要求1所述的一种动物血纤维连接蛋白联产方法,其特征在于,所述联产方法还包括以下步骤:


技术总结
本发明公开了动物血纤维连接蛋白联产方法,该向新鲜动物血中加入柠檬酸三钠抗凝,离心,分别收集得到血浆和血球;在所述血浆中,加入磁性纳米颗粒‑聚合物复合材料,通过外加磁场,将磁性纳米颗粒‑聚合物复合材料与目标血浆蛋白结合并形成沉淀,过滤,得到第一滤液和磁力沉淀物;撤销外加磁场,将磁性纳米颗粒‑聚合物复合材料与纤维连接蛋白分离,得到纤维连接蛋白沉淀物;所述磁性纳米颗粒‑聚合物复合材料包括包括羧基化三氧化二铁磁性纳米颗粒、聚乙烯醇和水;将纤维连接蛋白沉淀物溶解,上亲和层析柱,提取分离出FN主峰液,再经分子筛层析纯化,超滤浓缩,最后冷冻干燥,得FN产品。采用本发明的方案的产品的质量和稳定性得到了提高。

技术研发人员:王皓晴,王斌
受保护的技术使用者:上海纤连生物技术有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/16
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